乙肝五项检测中酶免疫法和金标免疫法的应用研究

程丽丽

(响水县中医院，江苏 响水 224600)

乙肝五项检测中酶免疫法和金标免疫法的应用研究

程丽丽

(响水县中医院，江苏 响水 224600)

目的 研究乙肝五项检测中酶免疫法和金标免疫法的检测的一致性和灵敏度的差异及其在临床中的应用。方法 随机选取我院检验科2012年6月至2015年6月的血样150例作为研究样本，分别采用酶免疫法和金标免疫法检测样本乙肝五项，比较两者对乙肝的确诊结果有无异同以及两者检出率是否有差别。结果 酶免疫法大三阳检出率为100%(41/41)，小三阳检出率为97.29%(36/37)，较金标免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差异均有统计学意义(均P<0.05)。差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 酶免疫法和金标免疫法对乙肝五项检测的结果具有一致性，且酶免疫法较金标免疫法检测灵敏度高。两者检测结果理想，值得临床推荐。

乙肝五项检测；酶免疫法；金标免疫法；应用研究

现今乙型病毒性肝炎已经成为全世界范围内流行的疾病，是全世界感染人数最多的慢性传染性疾病[1]，然而这种疾病并没有得到及时有效的控制，很多乙肝患者发展为肝硬化，甚至威胁生命。为此，我们提出用酶免疫法和金标免疫法[2]对乙肝HBsAg(乙肝病毒表面抗原)、HBsAb(乙肝病毒表面抗体)、HBeAg(乙肝病毒e抗原)、HBeAb(乙肝病毒e抗体)、HBcAb(乙肝病毒核心抗体)五项内容(俗称“乙肝两对半”)进行检测[1]，检验其一致性及灵敏度，并得到一些有意义的结果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机抽取2012年6月至2015年6月的患者血样150例，乙肝阳性102例，阴性48例。其中男性80例，乙肝阴性28例，HBsAg，HBeAg，HBcAb三项检测阳性(大三阳)20例，HBsAg，HBeAb，HBcAb三项检测阳性(小三阳)18例，其他14例，年龄在30到49岁之间，平均年龄为39.1±2.7岁，女性70例，乙肝阴性20例，HBsAg，HBeAg，HBcAb三项检测阳性(大三阳)21例，HBsAg，HBeAb，HBcAb三项检测阳性(小三阳)19例，其他10例，年龄在31到50岁之间，平均年龄为38.8±3.9岁[2]。临床资料符合实验因素外其他非实验因素基本相同，差异无统计学意义(P>0.05)。具有可比性。

1.2 研究方法 静脉采血于真空促凝试管中，在37℃的温度下静置，待凝固后离心完全分离血清，在两小时内分别采取酶免疫法和金标免疫法两种方法检测乙肝五项。采用酶标仪以450/630nm双波长比色，以S/CO值判定ELISA检测结果.。金标法严格按说明书滴加标本和缓冲液，在15分钟内判定结果。两种检测方法的步骤严格按照实验室操作规定进行。密切注意实验过程，及时将检测的实验结果和各项数据记录在表格中。通过对实验数据的分析，比较两种检测方法对实验结果的确定是否具有一致性及其敏感度的比较。

1.3 仪器与试剂 酶联免疫检测仪：深圳凯特KC-100，自动酶标洗板机：优利特URIT-670。潍坊三维生物工程集团有限公司生产的乙型肝炎病毒诊断试剂盒(酶联免疫法)，艾博生物医药有限公司生产的金标快速检测板。一次性使用静脉血采集容器(促凝管)。

1.4 评价标准 “优”为阳性检测结果高于90%，“良”为阳性检测结果在80%到90%之间，“可”为阳性检测结果在50%到80%之间，“差”为阳性检测结果低于50%[3]。

1.5 统计学方法 以SPSS13.0软件分析。数据比较以x2检验。计量数据以t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组效果对比 酶免疫法大三阳检出率为100%(41/41)，小三阳检出率为97.29%(36/37)，较金标免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差异均有统计学意义(均P<0.05)。但两种方法对大三阳和小三阳的检测率均在90%左右，且大三阳均完全检出，因此提示酶免疫法和金标免疫法在乙肝两对半的检测中具有高度一致性。见表1

表1 两组效果对比(例，%)

注：与对照组相比，*P<0.05

2.2 两种检测方法敏感度和特异度对比 通过对乙肝两对半的敏感度和特异度的实验对比，得出酶免疫法的敏感度为97.2%，特异度为96.5%，均高于金标免疫法的敏感度96.9%，特异度88.9%，计算x2值，得到P<0.05，差异具有统计学意义。提示两种方法相比较，酶免疫法对乙肝两五项的检出率要更高。详见下表2

表2 两种检测方法敏感度和特异度对比

注：与对照组相比，*P<0.05

3 讨论

目前，我国是世界上感染乙型肝炎病毒人数最多的国家，乙肝病毒传播途径以母婴传播为垂直传播，以血液传播和性传播为平行传播，传播范围广，速度快，严重威胁我国人民的健康水平，对患病家庭造成经济、心理等各方面影响[3]。积极探索科学方法，找到迅速有效的治疗和预防措施显得刻不容缓。为此，我院采用酶免疫法和金标免疫法检测乙肝五项指标，探究两种方法检测率及其敏感度差异，旨在指导临床运用，并取得了一些结论。究其主要原因，酶免疫法为双抗体夹心法，原理是形成抗原-抗体复合物，然后通过显色来诊断鉴别，其形成的复合物稳定性高，不易分离，因此具有较高的灵敏度(0.5ng/ml)。在ELISA检测中需强调注意：血清分离必须彻底，避免纤维蛋白吸附导致结果假阳性；标本不可溶血，否则血红蛋白残留也会致结果假阳性；操作必须规范，滴加样本和试剂要垂直，保证加入量的准确性；试剂盒在使用前应先从冰箱取出放置37℃恒温30分钟方可使用，滴加时需摇匀试剂，弃去2滴后再加入；温育时要封板，时间要准确，以防影响结果的判定；洗板步骤非常重要，要先检查洗板机，确保管道通畅，足量清洗液洗板5次洗完后要拍干ELISA板；在滴加终止液后10分钟内要在酶标仪上比色读取结果，时间过长可致假阳性。金标免疫法是以胶体金作为免疫示踪物检测患者血清中抗原抗体，但由于需要较高浓度的免疫示踪物，所以其灵敏度(5ng/ml)在一定程度上受到限制，这也是该方法稍差于酶免疫法的主要原因。

本文通过对酶免疫法和金标免疫法检测乙肝两对半的研究，结果发现，酶免疫法大三阳检出率为100%(41/41)，小三阳检出率为97.29%(36/37)，较金标免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差异均有统计学意义(均P<0.05)。因此提示酶免疫法和金标免疫法在乙肝两对半的检测中具有高度一致性。但两种方法对大三阳和小三阳的检测率均在90%左右，且大三阳均完全检出，因此提示酶免疫法和金标免疫法在乙肝两对半的检测中具有高度一致性，均能有效检测出阳性患者，符合张晓春等人的报道结果[4]。此外，通过对乙肝五项的敏感度和特异度的实验对比，得出酶免疫法的敏感度为97.2%，特异度为96.5%，均高于金标免疫法的敏感度96.9%，特异度88.9%，说明酶免疫法比金标免疫法的敏感程度更高。有报道表明[5]，酶免疫法灵敏度高，特异性强，重复性好，可用于乙型肝炎的明确诊断；金标免疫法由于显示出与酶免疫法密切的相关性，亦能较准确检测乙肝表面抗原，且该方法简单易行，大多数可以肉眼观察到实验现象，操作快捷，因此一定程度上也可以指导临床研究备。

综上所诉，酶免疫法和金标免疫法都可以应用于乙肝五项检测中，且酶免疫法效果优于金标免疫法，实验数据准确可靠，值得临床推荐，但操作过程繁琐，影响因素较多，适合批量检测。金标法快速简便，可立即出结果，无需仪器设诊，适合急诊。临床可以根据工作需要进行选用。

[1] 李家明. 慢性乙型病毒性肝炎患者的临床五项检验结果分析[J]. 中外医学研究,2014,34(2):66-67.

[2]云春凤,陈竞,杨春，等. 酶联免疫法和化学发光法检测25-羟基维生素D的一致性[J]. 卫生研究,2015,03(4):435-439.

[3]倪红霞. 乙肝病毒母婴传播的病毒变异规律与乙肝疫苗免疫保护效果研究[D].第二军医大学,2013，28(7):77-81

[4]张晓春,陆燕蓉. 标记免疫技术的研究进展[J]. 中国卫生检验杂志,1999,02(8):64-67.

[5]胡丽华. 乙肝两对半测试卡快速检测血清乙肝三系应用及评价[J]. 齐齐哈尔医学院学报,2001,12(7):1433.

10.3969/j.issn.2095-9559.2017.02.020

2095—9559(2017)02—2926—02

2016-08-03