金钱草单剂及合剂(山药)对高尿酸血症小鼠的影响*

石 玮,陶梦君,袁婷婷,董 娟,李 慧,李 娜,华 龙,孙月如,袁 慧**

(1.皖南医学院公共卫生学院，安徽 芜湖 241002；2.皖南医学院机能学实验中心)



金钱草单剂及合剂(山药)对高尿酸血症小鼠的影响*

石 玮1,陶梦君1,袁婷婷1,董 娟2,李 慧2,李 娜1,华 龙1,孙月如1,袁 慧1**

(1.皖南医学院公共卫生学院，安徽 芜湖 241002；2.皖南医学院机能学实验中心)

目的 研究金钱草单剂及金钱草山药合剂对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响。方法 SPF级雄性昆明小鼠80只随机分组8组，每组10只。金钱草单剂高、中、低剂量组小鼠灌胃剂量分别为80g/kg、40g/kg和20g/kg，金钱草山药合剂高、中、低剂量组小鼠灌胃剂量其中金钱草剂量分别为80g/kg、40g/kg和20g/kg，山药剂量均为40g/kg，空白对照组和阳性对照组灌胃等体积的蒸馏水。1次/d，连续7d。末次灌胃1h后，除了空白对照，其余各组均腹腔注射次黄嘌呤500mg/kg联合皮下注射氧嗪酸钾50mg/kg，建立急性高尿酸血症模型。给药后1h进行眼眶取血，测量小鼠血清尿酸值。结果 阳性对照组小鼠的血尿酸明显高于空白对照组(P<0.05)，金钱草单剂各剂量组与金钱草山药合剂各剂量组均有降低高尿酸血症小鼠血清尿酸的效果，与空白对照组和阳性对照组相比，差异均有统计学意义(P均<0.05)，但单剂与合剂的各剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 金钱草单剂及金钱草山药合剂预防性给药均可降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平。

金钱草；山药；高尿酸血症；次黄嘌呤；氧嗪酸钾

尿酸是人类嘌呤化合物的终末代谢产物，高尿酸血症指的是在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸水平男>420μmol/L或女>360μmol/L。随着我国经济水平的提高和生活方式的改变，高尿酸血症和痛风的患病率呈明显上升趋势[1]。引起痛风的主要生化基础是高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)，故而对血尿酸含量的控制是防治痛风的首要措施。同时亦有研究表明高尿酸血症也是心血管疾病的危险因子[2-3]，所以防治高尿酸血症意义重大。临床上常用降尿酸的药物均为西药，疗效尚可，但久服具有严重副作用，且停药易反弹[4-5]。而大量文献[6-9]提示中医药治痛风和高尿酸血症具有综合疗效较好，不良反应少，安全可靠，且无明显毒副反应的优势。因此，从中医药和天然药中寻找并开发出抗痛风和高尿酸血症药物具有重要的应用价值。

金钱草，又称过路黄，为报春花科植物的干燥全草，具有清热利湿，通淋，消肿之功效，金钱草的主要有效成分为黄酮类化合物，有研究表明金钱草含有的大量酚性物质(如黄酮类化合物)，具有黄嘌呤氧化酶抑制作用，其水提物能显著地降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平[7]。但金钱草性微寒，单独使用可能会导致患者出现脾虚，故多推荐增加补脾气的中药。而山药具备健脾开胃的效果[10]，且有止泻利、化痰涎等功效。故本次研究在使用金钱草单剂的同时，增加了金钱草山药合剂进行干预，比较单剂与合剂降低血尿酸的效果，以期为治疗痛风和高尿酸血症药物的开发提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物：选择SPF级雄性昆明小鼠，每只体重约20～25g，共80只，每笼10只饲养，温度22℃，自由摄食饮水，适应性饲养5d后用于实验。

1.1.2 实验药品及试剂：金钱草(安徽省金芙蓉中药饮片有限公司，批号：150201)；山药(安徽省金芙蓉中药饮片有限公司，批号150108)；次黄嘌呤、氧嗪酸钾[阿拉丁试剂(上海)有限公司，批号20150309、20150329]；尿酸试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20150510、20150910、20151110)。

1.1.3 主要仪器及设备：紫外可见分光光度计(UV-5100，上海元析仪器有限公司)；分析天平(FA1104，上海光正医疗器械有限公司)；高速低温离心机(X-30R，美国Beckman-Coulter公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 高尿酸血症小鼠模型建立 选用徐立等[11]人的方法，利用次黄嘌呤和尿酸氧化酶抑制剂联合作用，腹腔注射次黄嘌呤500mg/kg联合皮下注射氧嗪酸钾50mg/kg，制造小鼠代谢性高尿酸血症模型，在给药后1h进行眼眶取血，测定血尿酸值。

1.2.2 金钱草、山药水提液的提取制备 按水煎煮工艺制备金钱草水提液：将300g的金钱草放入5000mL圆底烧瓶中，加入3L蒸馏水中，浸泡1h，武火煎煮至沸腾，改为文火煎煮60min，过滤;二次煎煮时，加2L蒸馏水，沸腾后文火煎煮60min，过滤;三次煎煮时，加2L蒸馏水，沸腾后文火煎煮60min，过滤。将三次煎煮的滤液合并，用离心机3000r/min离心10min，将上清液取出浓缩定容至0.06L，制成每1mL含5g生药的金钱草水提液，4℃冰箱存放。

按水煎煮工艺及上述流程方式制备山药水提液，制成含生药5g/mL的山药水提液，4℃冰箱存放。

使用前将金钱草水提液稀释成单剂高、中、低三个剂量，分别含生药4g/mL、2g/mL和1g/mL；将金钱草水提液和山药水提液混合稀释成合剂高、中、低三个剂量，分别含生药金钱草4g/mL和山药2g/mL、金钱草2g/mL和山药2g/mL、金钱草1g/mL和山药2g/mL，以备使用。

1.2.3 动物分组及给药 将完成适应性饲养的雄性小鼠进行称重后随机分组，分为空白对照组组，阳性对照组，金钱草单剂低、中、高剂量组和金钱草山药合剂低、中、高剂量组共8组，每组10只。分组后各组小鼠体重均值分布在22.40～23.42g之间，差异无统计学意义(F=0.448，P=0.869>0.05)。

除正常饲养外，每天中午各组小鼠给予灌胃措施，连续7d。空白对照组与阳性对照组每天中午灌胃0.5mL蒸馏水，各剂量组灌胃0.5mL相应组别剂量的单剂或合剂。金钱草单剂高、中、低剂量组小鼠灌胃剂量分别为80g/kg、40g/kg和20g/kg，金钱草山药合剂高、中、低剂量组小鼠灌胃剂量其中金钱草剂量分别为80g/kg、40g/kg和20g/kg，山药剂量均为40g/kg。连续灌胃7d后，除空白对照组，其余各组利用氧嗪酸钾皮下注射50mg/kg和次黄嘌呤腹腔注射500mg/kg制造小鼠高尿酸血症模型，注射1h后小鼠眼眶取血。

1.2.4 血清尿酸测定 小鼠取血后常温静置30min，5000r/min，4℃离心10min，分离上清，利用血清尿酸试剂盒及紫外可见分光光度计测定血清尿酸值。

2 结 果

2.1 小鼠尿酸值含量分布比较 根据各剂量组不同金钱草配方灌胃饲养小鼠一周后，给予高尿酸模型制造药物造模，1h后眼眶取血，测定血清中尿酸值含量。各剂量组中金钱草山药合剂高剂量组小鼠血清尿酸值含量最低，为(888.09±133.97)μmol/L；金钱草山药合剂低剂量组小鼠血清尿酸值含量最高，为(979.20±43.81)μmol/L。各组间进行方差分析，差异有显著性(P<0.01)。见表1。

表1 金钱草不同剂量组小鼠尿酸值含量分布

2.2 小鼠血尿酸值两两比较 将不同剂量组测定的小鼠血尿酸值进行两两比较，得到如下结果，见表2。根据表中数据可知，每个剂量组与空白对照组、阳性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)，但是单剂与合剂的各剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 金钱草单剂及金钱草山药合剂各剂量组小鼠血尿酸值两两比较P值表

3 讨 论

高尿酸血症是预防痛风发生的首要关键疾病，我国高尿酸血症(HUA)人群患病率呈明显上升趋势。1998年对上海2037名人群研究发现男性HUA的患病率为14.2%，女性为7.1%，总体患病率10.1%[12]。2003年南京邵继红等[13]的研究是男性17.6%、女性9.3%。2013年哈尔滨地区人群HUA男性患病率为26.83%，女性患病率为11.12%[14]。因此对于这种疾病，我们必须给予足够的重视。

张淑哲等[4]和张俊杰等[5]的研究中均提到目前临床用药均为西药，虽然疗效尚可，但久服具有严重的副作用，且停药易反弹，从而影响患者的依从性。他们在其研究中也提到中药的综合疗效较好，不良反应少，安全可靠。刘晓平[8]在研究中所提到的传统中医药治疗痛风具有许多优势，可以进行全身调节，标本兼治，防治并举，且无明显毒副反应。通过对近5年来中药治疗痛风性关节炎的文献回顾,发现中药内服从脾虚湿阻、肝脾湿热，尤其是湿浊毒瘀辨治取得良好疗效，中药内外合治亦取得良好疗效[9]。因此认为研究人员应结合痛风的中医发病机理，从调节肝、肾、脾、胃功能入手，在中医药和天然药中寻找并开发出疗效明确、毒副反应少的抗痛风和高尿酸血症药物[6]。

近年来对于中草药在痛风治疗中作用的动物实验研究也逐渐增多，科研人员利用大鼠或小鼠给予外源性的嘌呤来源或抑制嘌呤分解的酶制剂制造高尿酸血症模型或痛风性关节炎模型，了解药物对痛风治疗的效果[15-16]。

本次研究使用的主要有效药物为金钱草，其有效成分主要为金钱草总黄酮。本次研究结果显示阳性对照组血尿酸值高达1114.43μmol/L，各种剂量组血尿酸值均低于980μmol/L，各剂量组包括金钱草单剂组与金钱草山药合剂组均与模型组的血清尿酸值差异有统计学意义(P<0.05)，表明使用金钱草单剂与合剂对于降低小鼠高尿酸血症的血清尿酸值有明显作用。同时于舒雁[17]研究发现金钱草总黄酮对高尿酸血症大鼠小鼠的血清尿酸值均有降低作用，这与本次研究的结果一致。有其他研究[18]表明金钱草具有良好的利尿作用，能够预防肾结石的发生，故认为金钱草能够降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸值，可能原因是金钱草可以加快尿酸的排泄速度，起到了降低血清尿酸值的作用。但金钱草对于肾脏排泄干预的详细机制仍有待进一步研究。

从实验结果可知，各剂量组之间的小鼠血清尿酸值差异无统计学意义(P>0.05)，说明各剂量组降低小鼠高尿酸血症血清尿酸值的效果是基本一致的。尽管各组之间的血清尿酸值均值比较无差异，但高剂量金钱草山药合剂组的尿酸值最低，为(888.09±133.97)μmol/L，提示可能是最佳剂量配方，且在实验灌胃过程中发现合剂组小鼠对于药物的接受程度明显好于单剂组，灌胃后出现的吐药和灌胃后精神状态不佳的情况明显少于单剂组。但实验动物小鼠之间存在较大的个体差异，可能也是本次实验未能看到明显量效关系的原因之一，故对于治疗小鼠高尿酸血症的最佳金钱草剂量及配方仍需进一步分析研究。

[1]LIU R,HAN C,WU D,et al.Prevalence of hyperuricemia and gout in mainland China from 2000 to 2014:A systematic review and meta-analysis[J].Biomed Res Int,2015,2015:762820

[2]SELLIN L,KIELSTEIN J T,DE GROOT K.Hyperuricemia-more than gout:Impact on cardiovascular risk and renal insufficiency[J].Z Rheumatol,2015,74(4):322

[3]BORGHI C,VERARDI FM,PAREO I,et al.Hyperuricemia and cardiovascular disease risk[J].Expert Rev Cardiovasc Ther,2014,12(10):1219

[4]张淑哲,王仲,石雪丽.中药降低尿酸水平对血管内皮功能的影响[J].河北医药,2012,34(6):935

[5]张俊杰,邓成志,张国斌.中药和天然药物治疗痛风的实验研究进展[J].中国药师,2008,15(8):1188

[6]袁建丽.痛风发病机理及其药物治疗现状和展望[J].中国药事,2014,28(1):86

[7]俞仑青.金钱草的药理作用及临床应用概况[J].中国中药杂志,2011,36(14):131

[8]刘晓平.痛风宁颗粒治疗痛风的药效学实验研究[D].福州:福建中医药大学,2008:39

[9]丁园园,刘维.急性期痛风性关节炎的中医药治疗进展[J].四川中医,2011,29(11):48

[10]孙晓生,谢波.山药药理作用的研究进展[J].中药新药与临床药理,2011,22(3):353

[11]徐立,时乐.小鼠代谢性高尿酸血症模型的复制方法初探[J].中国比较医学杂志,2006,16(1):1

[12]杜蕙,陈顺乐,王元.上海市黄浦区社区高尿酸血症与痛风流行病学调查[J].中华风湿学杂志,1998,2(2):75

[13]邵继红,莫宝庆,喻荣彬.南京市社区人群高尿酸血症与痛风的流行病学调查[J].疾病控制杂志,2003,7(4):305

[14]韩涛,刘培培,荣胜忠.城市居民体检人群高尿酸血症的患病情况[J].卫生研究,2013,42(3):306

[15]刘微,黄晓东,范红艳.泽苓痛风饮对高尿酸血症小鼠血尿酸的影响[J].中国民族民间医药,2009,18(23):59

[16]闫曼,安雅婷,李舰.益母草提取物对大鼠高尿酸血症的调控作用[J].中国中药杂志,2014,39(24):4856

[17]于舒雁.金钱草总黄酮对高尿酸血症动物模型的影响[D].郑州：河南中医学院,2014:85

[18]李静,胡国全,桂敬强.金钱草水提液对小鼠肾脏草酸钙结石形成的干预作用[J].安徽科技学院学报,2014,28(2):5

The Effect of Lysimachia Cristinae Hance and Yam on Hyperuricemia in Mice

SHI Wei,TAO Meng-jun,YUAN Hui,et al

(StaffroomofPreventiveMedicine,SchoolofPublicHealth,Wannanmedicalcollege,WuhuAnhui241002,China)

Objective To study the effect of Lysimachia Cristinae Hance (mixed with Yam) on Hyperuricemia in Mice. Methods 80 male,Kunming,SPF mice were randomly dividend into 8 groups (10 mice in each group):control group,model group,different dosage groups of Lysimachia Cristinae Hance single agent (80g/kg,40g/kg and 20g/kg) and Lysimachia Cristinae Hance plus Yam mixture(80g/kg,40g/kg and 20g/kg) and the Yam agents of mixture groups(40g/kg only).To feed the mice with different dose of medicine once a day lasting one week,and after the last feeding,give the mice i.p.injection of hypoxanthine in a dose of 500 mg/kg and s.c.injection of uricase inhibitor in a dose of 50 mg/kg.An hour later，the concentration of serum uric acid was measured.Results The levels of serum uric acid in mice between different dose groups and model group were significantly different(P<0.05).The level of serum uric acid in mice among different dose groups were not significantly different.Conclusion Lysimachia Cristinae Hance single agent and Lysimachia Cristinae Hance plus Yam mixture agent could significantly decrease the level of the serum uric acid in hyperuricemic mice.

Lysimachia cristinae hance;Yam;Hyperuricemia；Hypoxanthine;Oteacil potassium

安徽省大学生创新创业训练项目AH201410368110

R-332

A

2095-4646(2017)02-0104-04

10.16751/j.cnki.2095-4646.2017.02.0104

2016-12-05)

**通讯作者：E-mail：782213588@qq.com