DC-CIK生物疗法联合索拉非尼对原发性肝癌患者疗效及免疫功能的影响

刘永 阚积香 郭仕峰

·论著·

DC-CIK生物疗法联合索拉非尼对原发性肝癌患者疗效及免疫功能的影响

刘永 阚积香 郭仕峰

DC-CIK；索拉非尼；原发性肝癌；免疫功能

原发性肝癌(primarylivercancer，PLC)是我国常见的肿瘤之一，由多种因素引起，具有病程短、起病隐匿等特点，而且患者常伴有不同程度的免疫缺陷，病死率高，严重威胁人类的生命安全。原发性肝癌治疗主要是手术法，但该法预后差、复发率高，导致治疗效果不理想。生物治疗是继手术、放疗、化疗之后的一种新型肿瘤治疗方法，具有杀瘤谱广、杀瘤活性高等优势，已成为研究的热点。目前多采用细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkiuer，CIK)、体内回输突状细胞(dendriticcell，DC)等生物治疗肿瘤。索拉非尼是一种多靶点靶向治疗肿瘤的新药，为VEGF及其受体的多激酶抑制剂，能够抑制肿瘤的复发和转移，提高肝癌的远期治疗效果[1,2]。研究发现索拉非尼联合多种治疗手段的综合治疗模式可提高晚期肝癌的疗效[3]，但关于DC-CIK生物疗法联合索拉非尼治疗原发性肝癌的研究较少。本研究旨在探讨DC-CIK生物疗法联合索拉非尼对原发性肝癌患者的治疗效果及免疫功能的影响，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年3月至2016年4月到本院肿瘤科就诊的原发性肝癌患者78例，随机分为对照组和观察组，每组39例。所有患者经影像学确诊为原发性肝癌(参照《原发性肝癌诊疗规范(2011年版)》)。对照组男27例，女12例；年龄35～76岁，平均年龄(49.6±8.7)岁；合并乙型肝炎后肝硬化28例，合并门静脉高压11例；患者肝功能分级均为Child-A级，甲胎蛋白(AFP)<5μg/ml者2例，<400μg/ml者24例，≥400μg/ml者13例。观察组包括男30例，女9例；年龄31～80岁，平均年龄(51.9±9.6)岁。合并乙型肝炎后肝硬化27例，合并门静脉高压12例；患者肝功能分级均为Child-A级，甲胎蛋白(AFP)<5μg/ml者4例，<400μg/ml者25例，≥400μg/ml者10例。2组患者年龄、性别比、病程等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：①诊断为中晚期原发性肝癌；②能持续口服索拉非尼3个月以上；③未使用激素类药物和免疫抑制剂。

1.2.2 排除标准：①转移性肝癌；②严重功能肾衰竭、糖尿病等。

1.3 方法

1.3.1 CIK细胞的分离培养：根据磁共振显像结果确定肿瘤的大小，采集患者外周血，抗凝处理后，血细胞分离机(CS3000)分离外周血单个核细胞后，再加入淋巴细胞分层液，梯度离心，PBS缓冲液洗3次，进一步分离纯化外周血单个核细胞(纯度≥90%，数量1×108～3×108)。血细胞计数后，调整细胞浓度为1×106/ml，接种到含有1 000 U/ml rh-干扰素的无血清培养液中，第2天向培养液中分别加入50 μg/ml CD3单抗、100 U/ml IL-2，每隔2～3 d换1次培养液，培养20 d。每周测2次白细胞增殖率，当阳性细胞达到85%进行细胞治疗。

1.3.2 DC细胞的分离培养：将获得的外周血单核细胞移至培养皿中培养2 h，使其贴壁，后弃去上清，加入无血清的培养基，加入100 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子、500 U/ml IL-4，37℃、5%CO2培养，第5天加入500 U/ml rh-干扰素，第7天收集悬浮的DC，无菌检验合格后，进行细胞治疗。

1.4 治疗方法 对照组：采用索拉非尼(德国Bayer Pharma AG，注册证号H20130137)治疗，饭前口服0.4 g/次，2次/d，4周1个疗程，连续治疗3个疗程。观察组：在对照组基础上，间隔2周以上回输CIK细胞和DC细胞，每周2～3次，每次回输CIK细胞1×1010～1×1012个，DC细胞1×109～1×1010个，4周1个疗程，连续治疗3个疗程。

2 结果

2.1 DC-CIK细胞培养结果 DC-CIK细胞1～3 d增殖较慢，处于潜伏期，4～6 d增殖较快，处于对数生长期，8 d以后细胞数目趋于稳定。DC-CIK细胞比单纯CIK细胞的增殖速度更快，培养至第25天时DC-CIK细胞的增殖倍数为1 300，CIK细胞的增殖倍数为150。

2.2 临床治疗效果 观察组患者治疗后肿瘤总缓解率(48.71%)显著高于对照组(23.08%)，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者病情缓解情况 n=39,例(%)

注: 与对照组比较，*P<0.05

免疫指标治疗前对照组观察组治疗后对照组观察组2组治疗后比较t值P值CD+342.13±7.6941.65±7.5244.56±8.2470.96±9.63*#13.0080.000CD+422.87±3.1323.14±3.1125.61±3.7836.58±8.03*#7.7190.000CD+821.25±2.1620.47±2.3623.41±2.3429.23±3.12*#9.3190.000CD+4/CD+81.08±0.121.04±0.151.05±0.131.24±0.16*#5.7560.000CD+165.41±0.395.76±0.456.14±0.7110.24±1.13*#14.5060.000CD+5623.68±2.3424.02±3.2726.10±3.8930.25±5.41*#3.8890.000

注: 与治疗前比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

2.4 不良反应 观察组患者发生低热5例，发生高热3例，持续时间3～6h，自行消退，发生皮疹10例，发生恶心、呕吐4例。对照组患者发生低热3例，发生高热2例，自行消退，发生皮疹7例，发生恶心、呕吐5例，2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

PLC作为一种常见恶性肿瘤，其发病率呈逐年上升趋势，已成为严重危害人体健康的恶性疾病。由于PLC发病较隐匿，患者初期并无任何不适感，且相关症状易被忽视，而当患者觉察机体有不适症状时，多数已

进入中晚期，中晚期肝癌患者免疫功能受抑制，其免疫调节机制紊乱，并以疼痛、乏力、腹水、食欲不振等为临床主要表现[5]。同时，免疫应答及启动应答方面存在一定缺陷，而肝切除等手术治疗并不能达到满意效果，随着免疫分子与细胞生物学技术的不断成熟，PLC治疗方法也从单一手术或药物治疗逐渐发展为多模式联合治疗，DC与CIK生物疗法联合索拉非尼等抗肿瘤药物为PLC患者提供了新的肿瘤治疗途径，该疗法可通过生物技术与生物反应调节剂，向肿瘤患者体内回输免疫细胞，增强其自身免疫功能，并最终达到抑制及杀死肿瘤细胞的目的[6]。DC-CIK疗法通过向肿瘤患者体内回输免疫细胞，使机体的免疫力增强，从而达到治疗肿瘤的目的。DC是人体内抗原呈递细胞，通过识别、处理抗原来激活机体的免疫系统。CIK细胞是肿瘤杀伤细胞，主要通过自身细胞毒性及细胞因子来发挥抗肿瘤作用。DC-CIK共同培养时，能增强CIK细胞的增殖能力、杀伤活性以及DK的功能，从而提高治疗效果[6]。索拉非尼与传统治疗肿瘤的不同，主要作用是控制药物生长，可以实现患者的“带瘤生存”[7]。

综上所述，采用DC-CIK生物疗法联合索拉非尼治疗，能提高FLC患者的免疫功能，疗效显著且不良反应可以控制，但由于本研究所选病例数量及疗效观察时间有限，存在一定不足，对于如何建立更规范有效的DC-CIK生物疗法以及与索拉非尼治疗相匹配的方案，以降低FLC患者治疗费用，进一步保证患者的治疗效果并提高生活质量，仍是临床亟需解决的问题。

1 张惠洁, 郭卫东, 屈振杰.TACE联合索拉菲尼治疗原发性肝癌的疗效观察及血清VEGF、bFGF水平的变化.现代肿瘤医学,2015,23:3164-3168.

2 秦一卓. 索拉非尼结构类似物1122-37的抗癌活性及机制研究.山东大学学报,2014,49:115-117.

3 夏锋, 孙振凯,马宽生,等. 基于索拉非尼的联合治疗对晚期肝癌的疗效观察.临床肿瘤学杂志,2010,15:365-367.

4LepageC,CapocacciaR,HacklM,etal.Survivalinpatientswithprimarylivercancer,gallbladderandextrahepaticbiliarytractcancerandpancreaticcancerinEurope1999-2007:ResultsofEUROCARE-5..EuropeanJournalofCancer,2015,51:2169-2178.

5 李建旺, 彭大为, 黄春珍,等. 自体CIK细胞及DC细胞联合索拉非尼治疗晚期肝癌的临床观察.实用癌症杂志,2011,26:459-461.

6 艾丽梅, 宋盈盈, 苏荣英.DC-CIK细胞体外抗白血病K562细胞的免疫效应.中国生物制品学杂志,2011,24:1168-1170.

7 孙恒, 韩文杰. 索拉非尼对原发性肝癌患者疗效的研究分析.实用癌症杂志,2014,29: 442-444.

8LeungT,YamJ,ChanLK,etal.Deletedinlivercancer2suppressescellgrowthviatheregulationoftheRaf-1/ERK1/2/p70S6Ksignallingpathway.LiverInternational,2010,30:1315-1323.

9BeljanskiV,KnaakC,YanZ,etal.Combinedanticancereffectsofsphingosinekinaseinhibitorsandsorafenib.InvestigationalNewDrugs,2011,29:1132-42.

10 覃英容, 林源, 莫显伟,等. 原发性肝癌患者术后细胞免疫功能状况与复发的相关性.中国癌症防治杂志,2013,5:235-238.

11 艾月琴,赵华,江龙委,等. 自体DC-CIK细胞联合索拉非尼治疗晚期肾癌的临床效果.中国医药导报,2015,12:157-160.

12 邱辉,张俊萍,韩亚萍,等.DC-CIK与CIK体外抗肿瘤作用的实验研究.当代医学,2013,19:21-23.

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.08.033

276400 山东省沂水县人民医院(刘永、阚积香)；山东省沂水中心医院(郭仕峰)

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1002-7386(2017)08-1234-03

2016-10-29)