Stathmin蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

艾冬梅，刘 浩，张云红，俞宏伟，张 建，刘成军，王小玲(.河北省衡水市第二人民医院肿瘤科，河北 衡水 05000；.河北医科大学第一医院核医学科，河北 石家庄 0500；.河北省衡水市第二人民医院病理科，河北 衡水05000；.河北医科大学第四医院病理科，河北 石家庄 0500)

·论 著·

Stathmin蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

艾冬梅1，刘 浩2，张云红3，俞宏伟1，张 建1，刘成军1，王小玲4
(1.河北省衡水市第二人民医院肿瘤科，河北 衡水 053000；2.河北医科大学第一医院核医学科，河北 石家庄 050031；3.河北省衡水市第二人民医院病理科，河北 衡水053000；4.河北医科大学第四医院病理科，河北 石家庄 050011)

目的探讨Stathmin蛋白在乳腺癌中的表达及其与肿瘤病理特征的关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测61例乳腺癌组织中Stathmin蛋白的表达，并选取10例癌旁正常组织、10例乳腺纤维腺瘤作为对照。结果Stathmin蛋白在乳腺癌组织、癌旁组织、纤维腺瘤之间的表达差异有统计学意义(P<0.05)，乳腺癌组织表达高于纤维腺瘤(P<0.05)。Stathmin蛋白表达在不同组织学分级中差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺组织中Statmin蛋白表达与Ki-67蛋白表达具有相关性(P<0.05)，与雌激素受体、孕激素受体表达无相关性(P>0.05)。结论Stathmin蛋白过表达在乳腺癌发生发展中起了重要作用，可能成为预测乳腺癌新的生物学及个体化治疗的敏感指标。

乳腺肿瘤；癌蛋白18；免疫组织化学

乳腺癌是目前女性最常见的恶性肿瘤，其发病率在我国呈逐年增高，且发病年龄有年轻化的趋势，严重威胁着广大妇女的健康和生命[1]。Stathmin是近来研究较多的微管不稳定蛋白，它是一种细胞胞质蛋白，与细胞微管的形成有关[2]。在人类多种恶性肿瘤中，都存在Stathmin蛋白高表达[3]。本研究采用免疫组织化学法检测Stathmin蛋白在乳腺癌中的表达，探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系，旨在为判断乳腺癌的生物学行为及预后提供参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 全部标本来自于2011年1—12月河北省衡水市第二人民医院病理科乳腺癌石蜡标本61例，男性1例，女性60例，年龄37～66岁，平均(57.80±4.65)岁。所有患者均为浸润性导管癌。癌旁正常组织(距癌组织旁2 cm处)10例，乳腺纤维腺瘤10例。乳腺癌患者术前未接受过化疗或者放疗。对乳腺癌病理分级的判断主要是根据Notttingham联合组织学分级，按照美国癌症联合会肿瘤TNM分期原则分期。标本经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片全部经高年资病理医师复验。

1.2 主要试剂 兔抗人Stathmin 多克隆抗体(浓缩型)、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法免疫组织化学试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 实验方法 组织切片的制备：①将蜡块4 μm连续切片，黏附于防脱载玻片上；②低温烤干，切片保存于4 ℃冰箱中备用。染色：①将4 ℃冰箱中保存的切片取出，置于58～60 ℃烤箱中烤片3 h;②切片脱蜡至水95%乙醇5 min,二甲苯脱蜡10 min 2次,无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各5 min,95%乙醇5 min,80%乙醇5 min,70%乙醇5 min,蒸馏水摇洗，PBS洗5 min 1次；③3%H2O2去离子水室温下孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS浸泡5 min；④滴加封闭用正常山羊血清工作液，室温下孵育10 min，封闭非特异性抗原位点；⑤倾去多余血清，切片上滴加50 μL-抗，放置于湿盒中，4 ℃冰箱中过夜；⑥恢复至室温后，PBS浸泡5 min；⑦滴加生物素化二抗工作液(IgG/Bio),37 ℃孵育30 min，PBS浸泡5 min;⑧DAB显色，显微镜下观察3～10 min，充分水洗终止;⑨苏木精复染30 s，盐酸乙醇分化3 s，氨水反蓝15 s，脱水、透明，中性树胶封片;⑩显微镜下观察，拍照。

1.4 结果判断 Stathmin蛋白免疫组织化学的信号位于细胞浆，呈棕色或咖啡色，着色为阳性信号，阴性对照片无着色。所有切片由2名资深病理医师仔细阅片，以保证结果的可重复性。

1.5 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件处理数据。计数资料比较采用χ2检验；等级资料比较采用Kruskal-Wallis秩和检验；相关性采用Pearson直线相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Stathmin蛋白在不同乳腺病变中的表达 Stathmin蛋白在乳腺癌组织、癌旁组织、纤维腺瘤之间的表达差异有统计学意义(P<0.05)，乳腺癌组织表达高于纤维腺瘤(P<0.05)，见表1。

2.2 Stathmin蛋白在乳腺癌组织中的表达与临床病理参数的关系 Stathmin蛋白表达在不同组织学分级中差异有统计学意义(P<0.05)；在不同年龄、不同病灶直径、淋巴结有无转移，不同TNM分期、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEFG)和原癌基因人类表皮生长因子受体2(human epidermalgrowth factor receptor-2，HER-2)阳性与否差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 Stathmin蛋白在不同乳腺病变中的表达

*P<0.05与乳腺癌组织比较(秩和检验)

2.3 Statmin蛋白的相关性分析 相关性分析结果显示，乳腺组织中的Statmin蛋白表达与Ki-67蛋白表达呈正相关(P<0.05)，而与雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesteronereceptor,PR)表达不相关(P>0.05)，见表3。

表2 Statmin蛋白在乳腺癌组织中的表达与临床病理参数之间的关系

表3 乳腺组织中Stathmin与Ki-67、ER、PR的相关性

3 讨 论

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，在我国乳腺癌的发病率明显年轻化，45～50岁发病率最高，远远高于国外的60岁发病的高峰期。乳腺癌的发病机制十分复杂，且发生发展机制尚未完全阐明[4]。因此，临床上需要进一步了解恶性肿瘤细胞的特性，掌握肿瘤细胞发生发展及浸润转移之间的规律，深入研究肿瘤细胞各种基因蛋白的特性及相互关系[5]。

近年来人们开始重点关注微丝微管在肿瘤细胞增殖转移中的作用，而调控微管不稳定蛋白的主要代表则是Stathmin、驱动蛋白Kin I家族。人Stathmin蛋白也称原癌基因蛋白p18，含有149个氨基酸，相对分子质量为19 000,是一种高度保守的脊椎动脉细胞胞质磷蛋白[4]。Stathmin作为一种调控微管运动的细胞质磷蛋白，在人类多种恶性肿瘤高表达[5]。

对于Stahmin在乳腺癌组织中的表达，国内外相关报道并不多，而且各研究报告结果并不完全一致，但一致认可的是Stathmin在乳腺癌组织中高表达[6-7]，与疾病的进展有关[8-10]。Baquero等[11]研究Stathmin高表达10年总生存为53.1%，而低表达者为67%(P=0.03)。提示高表达者预后差。何宇等[12]报道Stahtmin在三阴乳腺癌的表达为98.9%(82/83)。Wang等[13]也提出Stathmin在转移性乳腺癌中具有极为重要的研究价值。提示Stathmin蛋白可能在乳腺癌的发生发展及转移中发挥作用，可能与乳腺癌预后有关。

本研究结果显示，10例乳腺纤维腺瘤Stathmin阳性表达是0%(0/10)，而癌旁组织中弱阳性表达为20.0%(2/10)，乳腺癌组织阳性率为62.3%(38/61)，三者比较差异有统计学意义(P<0.05)。表明在乳腺组织中，良性病变或者癌旁组织Stathmin表达水平低下，而恶性细胞随着恶性程度增加呈明显高表达，提示Stathmin的表达在乳腺癌发生发展过程中起重要作用，Stathmin基因及其编码的蛋白产物是重要的肿瘤标志物，可能成为临床检验乳腺癌的分子靶点。通过分析Stathmin与乳腺癌临床病理指标特征之间的关系，结果显示Stathmin蛋白表达在不同组织学分级中差异有统计学意义(P<0.05)；在不同年龄、不同病灶直径、淋巴结有无转移、不同TNM分期、VEFG和HER-2阳性与否差异均无统计学意义(P>0.05)；与病理分级及Ki-67蛋白具有相关性(P<0.05)，病理分级级别越高，Stathmin阳性率越高。上述结果与部分文献报道并不一致，可能与组织来源、入组病例数量、检测方法不完全一致等有关，需要进一步扩大样本数量，规范检验标准。

总之，Stathmin蛋白与乳腺癌的发生发展密切相关，还与乳腺癌的分化程度及增殖有关。提示Stathmin是乳腺癌发生的重要因子，可能成为乳腺癌早期诊断、判断预后及基因治疗的新靶点。

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[12] 何宇,罗静,周蕾,等.雄激素受体、Stathmin与三阴性乳腺癌临床病理因素相关性的初步探讨[J].中国普外基础与临床杂志,2013,20(8):846-850.

[13] Wang X,Qian H,Zhang S. Discovery of significant pathways in breast cancer metastasis via module extraction and comparison[J]. IET Syst Biol,2014,8(2):47-55.

(本文编辑：刘斯静)

2016-03-09；

2016-08-29

艾冬梅(1973-)，女，河北衡水人，河北省衡水市第二人民医院副主任医师，从事恶性肿瘤内科治疗研究。

R737.9

B

1007-3205(2017)04-0479-03

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.04.027