外周血中辅助性T细胞17及相关因子在胃癌患者中的变化及意义

刘爱民

·论著·

外周血中辅助性T细胞17及相关因子在胃癌患者中的变化及意义

刘爱民

目的 观察外周血中辅助性T细胞17(Th17)及相关因子在胃癌患者中的变化及意义。方法 选择2015年3月至2016年8月胃癌患者42例(观察组)，其中早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)22例，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)20例，并设同期健康体检者42例(对照组)，应用细胞流式细胞术测定2组血浆Th17细胞，应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆Th17细胞相关因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-23及IL-17情况，进行组间及观察组早期胃癌(22例)、晚期胃癌(20例)及黏液癌(12例)、腺癌(24例)、未分化癌(6例)比较。结果 2组IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17细胞表达比较，观察组高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；早期胃癌患者与晚期胃癌患者IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17细胞表达比较差异有统计学意义(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。观察组黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17细胞表达情况比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Th17及相关因子与胃癌有密切相关性，其检测结果有助于临床做出准确判断。

外周血中辅助性T细胞17；IL-6；IL-23；IL-17；胃癌；临床应用

胃癌(gastriccancer)是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率目前位于第2位，死亡率位于第3位[1,2]，发病率约占全球46.8%[3]，也是我国消化道恶性肿瘤死亡率的首位疾病，全国每年平均死亡率约为16/10万[4]。胃癌作为全球高发肿瘤，发病率及病死率有逐年上升的趋势，其发生、发展的机制较为复杂，过程中涉及到多个靶点、多个环节的综合作用结果[5]。由于胃癌发病的隐匿性和高度转移性，大多数患者就诊时已发展为中晚期[6]。因此，胃癌早期诊断至关重要。本研究为了确定外周血中辅助性T细胞17(Th17)及其相关因子在胃癌发病及不同分期是否有相关性，为临床治疗胃癌提供免疫学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院肿瘤科2015年3月至2016年8月胃癌患者42例(观察组)，男20例，女22例；年龄33～66岁，平均年龄(51.23±10.27)岁；临床分期[7]：早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)22例，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)20例；黏液癌(印戎细胞癌)12例，腺癌24例，未分化癌6例。排除患有严重肾脏、肝脏、心血管、代谢、消化、泌尿、神经或精神系统、自身免疫系统疾病者；经研究者判断不能进入临床试验者；依从性差的患者。并设同期本院体检中心健康体检者42例(对照组)，男19例，女23例；年龄32～65岁，平均年龄(50.87±10.13)岁。2组性别比、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 观察指标及方法

1.2.1 仪器与试剂：CD3PE-Cy5抗体、CD4FITCPE抗体、CD8AFITC抗体、CD25APC抗体、人Treg染色体试剂盒、Foxp3抗体及同型对照IgG2，均购自美国eBioscience公司；佛波酯、离子霉素、布雷菲德菌素A、FIX&PERM试剂盒均购自美国ENZO公司；淋巴细胞分离液(Ficoll-Hypaque)、流式细胞仪分析仪为美国BD公司产品；固定破膜剂购自美国Invitrogen公司；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒为北京嘉美诺斯生物科技有限公司，酶标仪应用TECANferrdouEvolyzer(瑞士)全自动免疫工作站。

1.2.2 观察方法：采集观察组(均为手术治疗前者)和对照组清晨空腹状态下采集外周静脉血4ml，分为2份，每份2ml，分别加入肝素钠抗凝管中，其中一份以2 500r/min离心7min，冻存在-80℃低温冰箱中备检测。应用ELISA检测血浆Th17细胞相关因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-23及IL-17情况。Th17细胞流式细胞术测定：将另外一份2ml静脉血肝素抗凝分离出单核细胞溶液加入布雷菲得菌素A、离子霉素、佛波酯工作液中，然后将试管放入细胞培养箱中，37℃条件下培养5h，留上层血浆，培养后的培养液分2份，均为100μl，分别置于2个流式管中，即Th17细胞管和同型对照管，并做好标记。在Th17细胞管和同型对照管中均加入推荐量CD3及CD8抗体，室温避光15min后再采用流式细胞仪进行检测。

2 结果

2.1 2组IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17细胞表达情况比较 2组IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平及Th17细胞表达比较差异有统计学意义(P<0.05)，观察组高于对照组。见表1。

表1 2组IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17细胞表达情况比较

组别IL⁃1β(ng/L)IL⁃6(ng/L)IL⁃23(ng/L)IL⁃17(ng/L)Th17细胞表达(%)观察组65．9±7．0∗188．7±18．7∗235．1±17．6∗87．1±13．4∗3．49±0．41∗对照组31．4±6．341．9±10．789．7±8．831．9±8．52．19±0．40

注：与对照组比较，*P<0.05

2.2 观察组早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)、晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ期)IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17细胞表达情况比较 早期胃癌患者与晚期胃癌患者IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，IL-6、IL-23IL-17水平及Th17细胞表达比较差异有统计学意义(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。见表2。

分期IL⁃1β(ng/L)IL⁃6(ng/L)IL⁃23(ng/L)IL⁃17(ng/L)Th17细胞表达(%)早期胃癌(n=22)57．1±5．5134．8±17．9∗178．7±9．8∗58．4±6．9∗3．29±0．47∗晚期胃癌(n=20)77．9±6．6253．7±15．7286．5±13．8105．7±8．76．41±0．45

注：与对照组比较，*P<0.05

2.3 观察组黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17细胞表达比较 观察组黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17细胞表达情况比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

类别IL⁃1β(ng/L)IL⁃6(ng/L)IL⁃23(ng/L)IL⁃17(ng/L)Th17细胞表达(%)黏液癌(n=12)68．1±7．6188．7±16．7211．1±11．278．2±7．43．35±0．42腺癌(n=24)70．2±6．8203．4±17．6220．4±12．481．3±9．23．43±0．39未分化癌(n=6)67．7±7．1187．3±16．8208．4±13．077．7±10．33．39±0．43

3 讨论

IL-6可促进多种细胞的增殖和分化细胞因子，陈金华等[19]观察了IL-6在胃癌发生中的作用，结果表明胃癌组织分化程度、淋巴结转移情况及浸润深度与IL-6关系密切，有协同趋势。IL-6是一种自分泌生长因子，与自身靶细胞IL-6R结合，并激活JAK/STAT信号传导通路。活化Stat3，使Survivin表达上调，靶细胞生长甚至过度增殖，凋亡被抑制，从而促进肿瘤形成。

观察结果表明，Th17细胞在胃癌患者外周血中存在高表达，晚期胃癌患者Th17细胞表达高于早期胃癌患者，均高于健康人群；晚期胃癌患者IL-17水平高于早期胃癌患者，证明了Th17细胞分泌IL-17的主要特征；胃癌患者中黏液癌、腺癌、未分化癌IL-17及Th17细胞表达情况比较差异均无统计学意义(P>0.05)。作为协同诱导Th17细胞的细胞因子IL-1β、IL-6、IL-23，2组IL-1β、IL-6及IL-23比较差异有统计学意义(P<0.05)，观察组高于对照组；早期胃癌患者与晚期胃癌患者IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，IL-6、IL-23比较差异有统计学意义(P<0.05)，晚期胃癌患者高于早期胃癌患者。胃癌患者中黏液癌、腺癌、未分化癌IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17及Th17细胞表达情况比较差异均无统计学意义(P>0.05)。说明Th17及相关因子与胃癌有密切相关性，其检测结果有助于临床做出准确判断，为胃癌免疫治疗提供了实验室依据。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.07.031

056001 河北省邯郸市中心医院门诊部

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1002-7386(2017)07-1064-03

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