罗勒多糖抗菌作用研究

张颖颖 ,付业佩 ,王 萍

(1 山东中医药大学中医学院，山东 济南 250355；2 山东中医药大学药学院2016级研究生，山东 济南 250355)

罗勒多糖抗菌作用研究

张颖颖1*,付业佩2,王 萍2

(1 山东中医药大学中医学院，山东 济南 250355；2 山东中医药大学药学院2016级研究生，山东 济南 250355)

目的:研究罗勒多糖对几种常见致病细菌的抗菌活性。方法 采用微量肉汤稀释法进行检验。结果:罗勒多糖对金黄色葡萄球菌(含MRSA)、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、普通变形杆菌、粪肠球菌及肺炎克雷伯菌等各菌都有较好的抗菌效果，对MRSA的抗菌能力最为突出，抗铜绿假单胞菌的效果较差。

罗勒；多糖；抗菌；MIC

罗勒(OcimumbasilicumL.)属于唇形科(Lamiaceae) 罗勒属，是药食两用植物之一，属于一年生草本，主要分布于中国云南等南部省份及西部新疆等省份；国外主要分布于东南亚地区及南美洲、非洲部分地区。罗勒全草和种子药用价值较高，有疏风解表、强心安神、行气活血、解毒消肿、散瘀止痛等作用，可用于感冒、咳嗽、中暑、月经不调、跌打损伤等各种疾病的治疗[1]。国内外药理研究证实，罗勒不同提取物分别有抗菌、抗炎镇痛、降血脂和降血糖、抑制肿瘤转移等活性作用。Koffi Kobal[2]等人研究发现，罗勒中含有的甲基丁香酚、茴香脑类等成分可有效抑制细菌生长；G.Opalchenova等发现罗勒对金黄色葡萄球菌属、肠球菌属和假单胞菌均有较好抑制效果[3]；Prakash Chandra Gupta等发现罗勒甲醇提取物抑菌效果最佳，提示罗勒可作为防腐剂的来源[4]。Klaudija Carovic-Stanko等人对罗勒挥发油进行了研究，发现其可抑制O157：H7型大肠埃希菌，可用于出血性肠炎及溶血性尿毒综合征的治疗[5]。上述研究中，多以罗勒醇提物、挥发油等为研究对象，而对罗勒多糖的研究集中于抗肿瘤方面[6]，抗菌研究相对较少。故此，本文以多种临床常见细菌为对象，对罗勒多糖的抗菌作用进行了初步研究，结果显示该多糖具有一定的抗菌效果。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 罗勒多糖制备

罗勒药材粉碎，用85%乙醇脱脂，随后用水煎煮，提取2次，合并滤液，以95%乙醇醇沉2次，将沉淀物真空干燥，得到罗勒粗多糖成品。用无菌生理盐水配制成10mg/mL的溶液，0.22μm无菌滤器过滤备用。

1.1.2 培养基

实验所用培养基有营养琼脂(批号20170406001)和MH肉汤(批号20170406001)，均由杭州百思生物技术有限公司生产。以上培养基均按说明书配制，并按要求高压蒸汽灭菌后备用。

1.1.3 实验细菌

实验所用菌株由山东中医药大学中医学院微生物教研室保存备用。菌种共有16株，包含金黄色葡萄球菌标准株CMCC(B)26003，临床分离MRSA 5株；大肠埃希菌标准株CMCC(B)44102，临床分离4株(ESBL+/ESBL-各2株)；铜绿假单胞菌CMCC(B)10104、枯草芽胞杆菌CMCC(B)63501、粪肠球菌ATCC 29212、普通变形杆菌CMCC(B)49027、肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117，以上各菌株以营养琼脂进行接种，37℃24h培养后挑取菌苔以生理盐水配成1×106cfu/mL的对应菌液备用。

1.2 实验方法

采用NCCLS推荐的微量稀释法[7]，在此基础上稍有改动，使用96孔培养板测定罗勒多糖的MIC(最小抑菌浓度)。按照文献方法，进行药物倍比稀释[8]。罗勒多糖原始浓度为10mg/mL，经递倍稀释得到2-256倍稀释梯度。另单独设置阴性对照，直接加入菌液，观察生长现象。同时设立药物稀释梯度孔和MH肉汤空白孔以辅助对比。阳性对照孔各加入庆大霉素注射液10μL。以上药液和对照加样完毕后，每孔加入1×106 cfu/mL的对应菌液10μL，每个药物重复3次，37℃培养24h，以酶标仪对培养板在600nm波长下测定 OD值，结合细菌生长情况判断实验结果。

2 结果

经37℃24h培养后，庆大霉素阳性对照孔中无明显细菌生长，阴性对照孔中肉眼可见明显浑浊，说明阳性对照有效，阴性对照细菌生长良好；MH肉汤空白孔中无明显生长现象，证明培养基无污染。其他各孔测定结果见表1。

2.1 罗勒多糖抗菌实验结果(见表1)

由表1可见，罗勒多糖对不同菌株均有一定的抗菌效果。对金黄色葡萄球菌标准菌株及MRSA临床分离株均有明显的抗菌效果，其中标准菌株MIC为0.625 mg/mL，临床分离MRSA中的MIC在0.625～1.25mg/mL之间，抗菌效果较好。铜绿假单胞菌CMCC(B)10110的MIC是5.0mg/mL；大肠埃希菌标准菌株MIC是2.5mg/mL，ESBL+/ESBL-是1.25～5.0mg/mL，不同菌株之间差异较大；其他如枯草芽胞杆菌、普通变形杆菌、粪肠球菌及肺炎克雷伯菌等的MIC在1.25～2.5mg/mL之间。

3 讨论

国内外研究显示，罗勒提取物具有具有抗菌、抗氧化、抗血栓、降血糖、降血脂、抑制肿瘤生长等多方面的药理活性[9]。国内外对罗勒的抗菌作用做了初步研究，发现罗勒水提物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌抑制效果较好，醇提物对霍乱弧菌亦有明显的效果。临床观察证实，罗勒注射液具有抗菌消炎、防治感染等作用，而且使用安全可靠[10]。

金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌都可通过创伤感染，属于临床常见感染菌。铜绿假单胞菌耐药性强，临床中该菌所致感染病例比例逐年上升，其耐药性导致治疗难度较大[11]。MRSA是临床常见耐药菌之一，基因组中固有耐药序列及耐药质粒转移等因素是其耐药的主要机制。随着各种抗生素的普遍应用，其引发的临床感染比例越来越高。该菌易在人体内繁殖，可降低机体免疫力，严重感染者可能出现脓毒血症等继发感染[12]。大肠埃希菌、普通变形杆菌、粪肠球菌及肺炎克雷伯菌均可通过肠道感染，引起各种疾病；枯草芽胞杆菌可污染食物，引起腐败变质。

本实验中，罗勒多糖显示出了较为广泛的抗菌谱，对多种常见临床感染细菌都有一定抑制效果。其中，罗勒多糖对大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、普通变形杆菌、粪肠球菌及肺炎克雷伯菌等菌有相对较好的抗菌效果，尤其是对MRSA表现出了较强的抗菌能力，未受其耐药机制的影响。但罗勒多糖对个别大肠埃希菌临床株抗菌效果较弱，且不同菌株间有较大差异；对铜绿假单胞菌抗菌效果较差。

罗勒为药食两用植物，即是开发食品的有效原材料，又可广泛用于医药生产。有鉴于此，罗勒多糖的抗菌潜力可应用于临床药物的开发，亦可用于食品中研制新型生物防腐剂，对制药工业及食品工业的研发均有较高价值。

[1] 国家中医药管理局.《中华本草》编委会. 中华本草: 第七分册[M].上海:上海科学技术出版社, 1997:6118-6 120.

[2] Kobal Koffi, Poutiouli P W, Raynaud Christine, et al. Chemical composition and antimicrobial properties of different basil essential oils chemotypes from Togo[J].Bangladesh J Pharmacol,2009,4(6):1-8.

[3] Opalchenova G, Obreshkova D. Comparative studies on the activity of basil-an essential oil fromOcimumbasilicumL Against multidrug resistant clinical isolates of the generaStaphylococus,EnterococcusandPseudomonasby using different test methods[J]. Journal of Microbiological Methods, 200354(6):105-110.

[4] Gupta Prakash Chandra, Batra Ritu, Chauhan Abhishek,et al. Antibacterial activity and TLC Bioautography of Ocimum basilicum L Against pathogenic bacteria[J]. Journal of Pharmacy Research,2009,2(3):407-409.

[5] Klaudija Carovic Stanko,Sandi Orlic, Olivera Politeo, et al. Composition and antibacterial activities of essential oils of seven[J]. Ocimum taxa.Food Chemistry,2010,119(1):196-201.

[6] 曲 迅,杨美香,郑广娟,等. 罗勒多糖对肿瘤转移行为的影响[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志,2004,11(l) : 31-35．

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[10] 中国人民解放军白求恩国际和平医院药局．罗勒在动物体内抑菌实验研究及临床疗效观察[J]．中国医药工业杂志，1977, 8(7):27-30．

[11] 王文晶，黄 茂，赵旺胜，等．下呼吸道感染铜绿假单胞菌流行和耐药现状分析[J]．实用临床医药杂志，2006, 10(3):33-36.

[12] Haque N Z, Zuniga L C, Peyrani P, et al．Relationship of vancomycin minimum inhibitory concentration to mortality in patients with methicillin-resistant Staphylococcus aureus hospital-acquired，ventilator-associated，or health-care-associated pneumonia[J].Chest,2010, 138(6):1356-1362．

(本文文献格式：张颖颖,付业佩,王萍.罗勒多糖抗菌作用研究[J].山东化工，2017，46(20)：6-7.)

ResearchontheAntibacterialActionofOcimumBasilicumL.Polysaccharide

ZhangYingying1,FuYepei2,WangPing2

(1. College of Traditional Chinese Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China; 2. 2016 graduate student, College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355,China)

Objective:To study the in vitro antimicrobial activity against certain clinical bacterias. Methods: Micro both dilution method. Results:The inhibition of Ocimum basilicum L. polysaccharide onStaphylococcusaureus,Escherichiacoli,Bacillussubtilis,Proteusvulgaris,Enterococcusfaecalis,Klebsiellapneumoniaeare obvious, Especially for MRSA, it showed strong antibacterial ability, and the antibacterial effect againstPseudomonasaeruginosawas weak.

Ocimum basilicum L.; polysaccharide; antibacterial; MIC

2017-09-14

山东省中医药科技发展计划项目(2015-116)

张颖颖(1977—)，山东日照人，硕士研究生，山东中医药大学中医学院，讲师，主要从事医学微生物学与免疫学教研工作。

R781.54

A

1008-021X(2017)20-0006-02