抗纤益心浓缩丸对扩张型心肌病大鼠心功能及心室重构的影响*

王振涛常红波吴 鸿柴松波韩丽华

（1.河南省中医院，河南 郑州 450002；2.河南中医药大学，河南 郑州 450046）

·研究报告·

抗纤益心浓缩丸对扩张型心肌病大鼠心功能及心室重构的影响*

王振涛1常红波2吴 鸿1柴松波1韩丽华1

（1.河南省中医院，河南 郑州 450002；2.河南中医药大学，河南 郑州 450046）

目的观察抗纤益心浓缩丸对扩张型心肌病大鼠心功能及心室重构的影响，探讨其防治扩张型心肌病（DCM）部分作用机制。方法通过大鼠自主饮用呋喃唑酮水溶液，建立DCM模型。8周后，将LVEF≤45%的大鼠随机分为模型组、抗纤益心浓缩丸高、中、低剂量组、卡托普利组、中西药联合组，另设有正常对照组，采用相对应药物进行灌胃治疗。16周后，超声心动图测定心功能的变化，称左室质量及电子显微镜下观察心肌组织超微结构变化。结果与模型组比较，各治疗组左室收缩末期内径 （LVESD）、左室舒张末期内径（LVEDD）减低（P＜0.05），左室射血分数（LVEF）及左室短轴缩短率（LVFS）均明显提高（P＜0.05），中西药联合组效果最好（P＜0.01）；与模型组比较，左室质量指数（LVMI）各治疗组均明显减少（P＜0.05）；电子显微镜观察结果：正常组大鼠心肌细胞膜完整，肌原纤维排列整齐，肌小节及肌丝结构清晰，未见孪缩带和异常电子致密物沉积；与其相比，模型组心肌细胞肌膜溶解，肌原纤维排列紊乱，局部可见肌丝断裂，线粒体肿胀、变形；与模型组相比，抗纤益心浓缩丸中、低剂量组均稍有改善，中西药联合组大鼠心肌改善最明显。结论抗纤益心浓缩丸能改善扩张型心肌病大鼠心功能及心室重构作用。

扩张型心肌病 抗纤益心浓缩丸 心功能及心室重构

扩张型心肌病（DCM）是一种以左心室或双心室扩大伴收缩功能障碍为特征的心肌病，临床多表现为进行性心力衰竭、血栓栓塞、心律失常及猝死等。目前尚无特异性治疗方法，其预后极差，大多发病后5~10年生存率仅为25%~50%［1］。近些年，中医药治疗DCM发挥了重要作用，中西医结合治疗大大提高了本病的治疗效果，其预后得到了改善。笔者在长期治疗DCM的临床实践中，结合前人经验，提出益气升阳、活血利水法治疗DCM，并自拟抗纤益心方。在前期的临床观察和实验研究中显示其能明显延缓病情发展，改善心功能，部分能逆转心室肥厚、缩小心脏［2-4］。本实验通过大鼠自主饮用呋喃唑酮水溶液建立DCM模型［5-6］，观察抗纤益心浓缩丸对DCM大鼠心功能及心室重构的影响，探讨其治疗DCM的部分作用机制，为抗纤益心浓缩丸的临床应用提供实验依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级Wistar大鼠，雄性，体质量60~ 70 g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2012-0001。动物饲料：60Co照射后的动物饲料［河南省实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2010-0002］。本实验在河南省中医院中心实验室完成，设施证明：00000860。

1.2 试药与仪器 抗纤益心浓缩丸 （红参、黄芪、丹参、泽兰、益母草、升麻、白术、茯苓、麦冬9味组成，河南中医药大学药学院制剂室提供，批号：20150423）；卡托普利片（25 mg/片，上海信宜天平药业有限公司，批准文号：国家准字H31021832）；呋喃唑酮片（100 mg/片，山西云鹏制药有限公司生产，批准文号：国家准字H14023917）；水合氯醛由郑州派尼有限公司生产，规格10 mL：0.5 g，批号：20100614。IVC独立送风隔离笼具：CA25笼一拖二PSU触摸型（苏州冯氏实验动物设备有限公司），超净工作台型号：JB-CJ-2FC型（苏州冯氏实验动物设备有限公司），动物饮水机型号：Master-Q型 （上海和泰仪器有限公司），电子天平：BS224S德国220 g/0.1 mg。超速低温离心机型号：SIGMA3-K（美国Sigma-Aldrich公司）。超声诊断系统：ACUSON Cypress（美国西门子医疗系统公司），配备有西门子acuson7L3型探头，B超耦合剂：YY0299，天津；手术针、线、剪刀、镊子、止血钳等。以上仪器均由河南省中医院中心实验室统一提供。

1.3 分组与造模 采用随机方法按7∶1分为造模组和正常对照组，造模组采用自主饮用呋喃唑酮水溶液（按1 kg水加700 mg呋喃唑酮片配置），每日更换1次，8周后，将LVEF≤45%的大鼠随机分为模型组、抗纤益心浓缩丸高、中、低剂量组、卡托普利组、中西药联合组（抗纤益心浓缩丸高剂量与卡托普利片）。

1.4 给药方法 模型组每日灌胃与治疗组同等容积的去离子水；卡托普利对照组卡托普利片10.125 mg/kg溶于去离子水灌胃；抗纤益心浓缩丸高、中、低剂量组，每日灌胃抗纤益心浓缩丸（18.8、9.4、4.7 g/kg）分别溶于去离子水；中西药联合组是抗纤益心浓缩丸高剂量和卡托普利的混合溶液每日灌胃。根据成人剂量换算得到灌胃剂量，大鼠每公斤体质量用药量为成人体质量的6.35倍。公式：dB（mg/kg）=dA·（RB/RA）·（WA/WB）1/3（RB，RA是体形系数；WA/WB是已知动物体质量）。

1.5 标本采集及检测 各组大鼠药物干预疗程结束后，禁食不禁水12 h，称体质量，麻醉各组大鼠进行超声心动图检测LVESD、LVEDD，然后迅速开胸提取心脏，用生理盐水打入主动脉充分冲洗心脏残血，纱布吸干水分，分离心室，再沿室壁剪开，分离左、右心室，电子天平准确称量左心室质量（LVW），用锐利的刀片切取左心室心尖部心内膜下小块心肌，4%戊二醛固定，送电镜室待检。将固定好的样品用牙签取出置于EP管内并标记，0.1 mol/L PBS 0.5 mL漂洗，每次10 min，反复4次；1%锇酸0.5 mL做后固定，静置1.5 h；0.1 mol/L PBS 0.5 mL漂洗，每次10 min，反复4次；30%丙酮脱水，10 min；50%丙酮脱水，10 min；70%丙酮脱水，10 min或过夜；90%丙酮脱水，10 min；100%丙酮，45 min，反复2次；其间配置环氧树脂；渗透：无水丙酮：环氧树脂812=1∶1渗透封闭1 h，开盖0.5 h。硅胶板渗透：纯环氧树脂812 4 h或过夜；走聚合37℃12 h，45℃12 h，45℃24~48 h；切片；染色；电镜观察。

1.6 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件分析。组间比较符合正态分布且方差齐者，用单因素方差分析进行检验；如果符合正态分布但未通过方差齐性检验，则采用单因素方差分析进行检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组超声心动图检测及左心室质量指数结果比较 见表1。与正常组比较，各组LVEF、LVFS均有所降低（P＜0.05），LVMI有所增加（P＜0.05）；与模型组比较，各治疗组大鼠LVEF、LVFS都有不同程度的上升，LVMI有所减轻（P＜0.05），中西药联合组效果最明显（P＜0.01）。

表1 各组超声心动图检测及左心室质量指数结果比较（s）

表1 各组超声心动图检测及左心室质量指数结果比较（s）

与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

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2.2 各组大鼠心肌组织电镜观察 见图1。正常大鼠心肌细胞排列整齐，肌小节和肌丝结构清晰，线粒体线状排列，呈椭圆形，未见胶原蛋白沉着和胶原纤维沉积。模型组大鼠心肌细胞肌膜溶解，排列紊乱、稀疏，局部肌丝断裂，可见线粒体肿胀、变形、空泡样变化，成纤维细胞周围聚集大量胶原纤维沉积。中药高剂量、卡托普利组电镜下观察大鼠心肌细胞形态接近，肌膜较完整，其明暗带尚清晰，线粒体绝大部分接近正常，呈线状排列。中药中剂量组介于高剂量与低剂量组之间。低剂量组大鼠心肌细胞肌膜大部分溶解，可见少量线粒体肌游离于细胞外，局部可见肌丝断裂。中西药联合组心肌细胞肌膜较完整，肌小节和肌丝结构相对清晰，明暗带明显，线粒体呈线状排列较整齐可见，未见明显胶原纤维沉积。

图1 各组大鼠电镜下心肌组织超微结构图（12000倍）

3 讨 论

中医学无扩张型心肌病之病名，但很早就有关于类似证候的记载，历代医家对其认识散见于“心悸”“水肿”“喘证”“心水”等证。笔者在长期治疗DCM的临床实践中，结合前人经验，认为本病早期气虚为本，瘀血为标；晚期心肾阳气虚衰，温煦失职，导致诸脏腑功能失调。其中气虚阳虚为本，瘀血、痰浊、水湿为标。心气虚不能鼓动血液运行而血脉瘀滞，肾阳虚则不能温化津液则水湿内停。其中气虚是中心环节，存在于病变发展过程中的各个阶段，因而提出益气升阳、活血利水法治疗DCM，并根据本法自拟抗纤益心方。在前期的临床观察和实验研究中显示能明显延缓病情发展，改善心功能，部分能逆转心室肥厚、缩小心脏［2-4］。为方便患者使用，现已将其研发制作丸剂，进一步探讨其治疗DCM作用机制，为抗纤益心浓缩丸的临床应用提供实验依据。

本研究通过大鼠自主饮用呋喃唑酮水溶液建立DCM模型［5-6］，观察抗纤益心浓缩丸对DCM大鼠心功能及心室重构的影响，探讨其治疗DCM的部分作用机制。结果显示：与模型组比较，抗纤益心浓缩丸高、中剂量组及卡托普利组LVEF有不同程度的上升，有统计学差异（P＜0.05），中西药联合组有显著性差异（P＜0.01），表明抗纤益心浓缩丸能改善DCM大鼠心功能。心室重构是DCM发生、发展的基本病理环节，可以导致心功能的进一步恶化。电镜结果显示：抗纤益心浓缩丸高、中剂量组及卡托普利组在不同程度上能改善DCM大鼠心肌供血、供氧，抑制心肌细胞肥大和胶原产生，逆转心腔扩大、心室肥厚，这可能是抗纤益心浓缩丸在一定程度上抑制DCM大鼠心室重构的作用机制之一。抗纤益心浓缩丸在一定程度上能够抑制心肌细胞肥大和胶原产生，逆转心腔扩大、心室肥厚，干预DCM大鼠心室重构，但其最佳有效剂量以及用药时间还有待进一步深入研究。

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Effect of Kangxian Yixin Concentrated Pill on the Serum Cardiac Function and Ventricular Remodeling of Rats with Dilated Cardiomyopathy

Wang Zhentao，Chang Hongbo，Wu Hong，et al.Henan Province Hospital of TCM，Henan，Zhengzhou 450002，China.

Objective：To observe effect of Kangxian Yixin concentrated pill on the serum cardiac function and ventricular remodeling of Rats with DCM and discuss part of its action mechanism on the treatment of DCM.Methods：Through rats drinking furazolidone aqueous solution，DCM model were set up.After 8 weeks，rats with LVEF acuities≤45%were randomly divided into model group，Kangxian Yixin high dose，midium dose and low dose group，captopril group，Chinese and western medicine group.The normal control group was also set up with the corresponding drug lavage therapy.After 16 weeks，the changes of cardiac function were measured by echocardiography.Left ventricular mass was measured and myocardial tissue ultrastructure changes were observed under electron microscope.Results：Compared with model group，left ventricular end systolic diameter（LVESD），left ventricular end-diastolic diameter（LVEDD）reduced（P＜0.05），left ventricular ejection fraction（LVEF）and left ventricular short axis reduced rate（LVFS）were significantly increased（P＜0.05）in the treatment groups.The result in the Chinese and western medicine group was the best among the groups（P＜0.01）.Compared with model group，left ventricular weight in each treatment group was significantly decreased（P＜0.05）.According to the electron microscope observation：normal group of rats'myocardial cell membrane integrity，neat myofibril，and clear muscle sarcomere structure could be observed with no twin shrink belt and abnormal electron dense deposit. By contrast，myocardial cell membrane dissolved，myofibril was arranged in disorder，muscle wire fracture was partially visible，mitochondria swelling and deformation was observed in the model group.Compared with model group，a slight improvement was got in Kangxian Yixin concentrated pill medium and low dose group.The curative effect in the Chinese and western medicine combined group was the most obvious.Kangxian Yixin concentrated pill high dose group and captopril group played a similar role.Conclusion：Kangxian Yixin concentrated pill can improve cardiac function and ventricular remodeling of rats with DCM.

DCM；Kangxian Yixin concentrated pill；Cardiac function and ventricular remodeling

R285.5

A

1004-745X（2017）03-0394-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.03.006

河南省科技创新人才计划项目（144200510016）