黄芩配方颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究

周里欣，林彦朝，章运典，陈洪英

（仲景宛西制药股份有限公司，河南南阳 474500）

黄芩配方颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究

周里欣，林彦朝，章运典，陈洪英

（仲景宛西制药股份有限公司，河南南阳 474500）

目的建立黄芩配方颗粒的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。方法以黄芩苷为参照物，采用Thermo BDS Hypersil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 m），以乙腈－0.5%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL／min，柱温为40℃，检测波长为280 nm。结果通过HPLC指纹图谱分析，共标示出黄芩配方颗粒有8个共有色谱峰，相似度均大于0.90，确认3号峰为黄芩苷。结论该研究建立的黄芩配方颗粒HPLC指纹图谱法，操作简单，稳定可靠，可为黄芩配方颗粒的质量控制提供科学依据。

黄芩；配方颗粒；高效液相色谱法；黄芩苷；指纹图谱

黄芩配方颗粒由黄芩经水提取、浓缩干燥制成。黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi干燥根，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效。主要用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安[1]。黄芩配方颗粒的功能主治与黄芩一致，用于临床配方，因携带和服用方便，深受患者欢迎，如何控制产品质量、确保产品疗效至关重要。目前，通常以黄芩苷为指标性成分用薄层色谱法、高效液相色谱(HPLC)法等方法测定[2]，但不能全面控制产品质量。中药配方颗粒近年来发展迅速，检测手段日益提高，通过红外光谱、高效液相色谱法等建立指纹图谱，全面控制产品质量是发展趋势[3－15]。黄芩主要含有黄芩苷等黄酮类化合物、挥发油、萜类物质、多糖多种成分[16－17]，其中黄酮类是其主要化学成分和活性成分。因此，本研究中以黄芩苷为参照，建立全面反映各成分信息的指纹图谱，望能科学地控制产品质量，确保临床疗效。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695型高效液相色谱仪及其化学工作站，Waters 2998型PDA检测器，四元梯度泵，自动进样器均由美国沃特世公司提供，UP超纯水机(四川优普超纯科技有限公司)；Hangping FA2104V型电子天平(上海精密仪器仪表有限公司)；BP211D型十万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)；KQ－300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，磷酸、乙醇等其他试剂均为分析纯；黄芩苷对照品（批号为110715－201318，纯度93.3%），购自中国食品药品检定研究院，供含量测定用；黄芩配方颗粒（仲景宛西制药股份有限公司，批号分别为150701，150801，150901，151001，151002，151003）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈为流动相A，0.5%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱见表1；检测波长：280 nm；柱温：40℃；流速1.0 mL／min。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。

2.2 溶液制备

对照品溶液：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液，即得。

供试品溶液：取装量差异项下本品，混匀，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

表1 流动相梯度表

2.3 系统适用性试验

分别吸取黄芩苷对照品溶液和上述供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪进行分析，在拟订色谱条件下，供试品溶液色谱在与黄芩苷对照品溶液色谱相应的位置上有相同保留时间的色谱峰，经PDA检测器峰纯度测试，二者一致，理论板数大于2 500，各色谱峰均达到基线分离。结果见图1。

2.4 指纹图谱方法学考察

精密度试验：取本品，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，连续进样6次。结果见图2、表2、表3。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算相似度，有较高的相似度，精密度良好。

图1 黄芩苷高效液相色谱图

稳定性试验：取本品，按2.2项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，分别于0，2，4，8，12，24 h时进样测定。结果见图3、表4、表5，有较高的相似度，说明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重复性试验：取本品，按2.2项下方法制备供试品溶液6份，按2.1项下色谱条件进样测定。结果见图4、表6、表7，有较高的相似度，重复性良好。

2.5 指纹图谱的确定

取本品6批，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定。将6批样品的测定结果以cdf的数据格式导出，导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012年，130723版本），以中位数作为模板，计算各样品的整体相似度，结果见图5。以中位数法生成对照图谱。

表2 黄芩配方颗粒指纹图谱精密度试验匹配结果

表3 黄芩配方颗粒指纹图谱精密度试验相似度

图3 黄芩配方颗粒稳定性指纹图谱测定结果

表4 黄芩配方颗粒指纹图谱稳定性试验匹配结果

3 讨论

3.1 提取方法选择

取装量差异项下本品，混匀，研细，取1 g，2份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定质量，分别超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min和加热回流30 min，放冷，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按2.1项下色谱条件进样测定。结果二者差异不大，因超声简便快捷，选择超声30 min即可。

表5 黄芩配方颗粒指纹图谱稳定性试验相似度

图4 黄芩配方颗粒指纹图谱重复性测定结果

表6 黄芩配方颗粒指纹图谱重复性试验匹配结果

表7 黄芩配方颗粒指纹图谱重复性试验相似度

3.2 提取溶剂选择

图5 对照指纹图谱（3号峰是黄芩苷）

取装量差异项下本品，混匀，研细，取1 g，3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入70%乙醇、甲醇、水各25 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，用相应的溶剂补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按2.1项下色谱条件进样测定，结果用70%乙醇提取，色谱峰较多，含量较高，故选择70%乙醇为提取溶剂。

3.3 流动相选择

Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈为流动相A，分别以0.5%磷酸、0.5%冰乙酸溶液为流动相B，按表1进行梯度洗脱；检测波长为280 nm；柱温为40℃；流速为1.0 mL／min。结果表明，0.5%磷酸溶液为流动相，各特征峰分离度较好，故选择0.5%磷酸溶液为流动相B。

3.4 波长选择

试验过程中共选择了250，280，350 nm 3种波长，结果在280 nm波长下，各特征峰凸显，故选择280 nm作为检测波长。

3.5 柱温选择

为了保持色谱分析的一致性，设定柱温来控制不同试验环境下的色谱分析，试验过程中共选择了30，35，40℃3种柱温，结果在40℃下，分离效果较好。

3.6 色谱柱选择

试验中考察了Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）、Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）、Welch Xtimate C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）3种色谱柱。结果表明，在相同色谱条件下，Thermo BDS Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）得到的色谱图，各峰的分离及峰形均最好。

建立黄芩配方颗粒指纹图谱，有利于全面控制产品质量，确保临床疗效。但配方颗粒水煎煮提取，脂溶性成分提取率低，其是否具有和饮片同等的药效，有待进一步研究。

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Study on the HPLC Fingerprint of Scutellaria Baicalensis Dispensing Granules

Zhou Lixin，Lin Yanchao，Zhang Yundian，Chen Hongying

（Zhongjing Wanxi Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanyang，Henan，China474500）

ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthefingerprintdeterminationof ScutellariaBaicalensisDispensingGranules.MethodsThe samples were analyzed by HPLC with baicalin as the reference.Thermo BDS Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）chromatographic column was used for analysis with acetonitrile and 0.5%phosphoric acid solution as mobile phase in gradient elution manner，1.0 mL／min e flow rate，40℃column temperature，280 nm detection wavelength were adopted.ResultsBy analyzing the fingerprint，8 peaks existed including the peak of baicalin.The similarity of the samples was more than 0.90.ConclusionThe established HPLC fingerprint of Scutellaria Baicalensis Dispensing Granules is simple and dependable.The method can provide scientific basis for the quality control of Scutellaria Baicalensis Dispensing Granules.

Scutellaria Baicalensis；dispensing granules；HPLC；baicalin；fingerprint

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)02－0027－05

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.02.008

2016－10－18；

2016－11－28)

周里欣（1964－），女，工程师，研究方向为中药制剂质量控制，（电子信箱）wxzlx891005＠163.com。