探索消乳散结胶囊中柴胡的鉴别及含量测定

贵州省黔南州食品药品检验所（558000）周灿 安军 邓言欢

贵州省食品药品检验所（550004）茅向军

1 仪器试剂

岛津LC-2010AHT液相色谱仪，柱子Diamonsil@（钻石）C18 5μm 250mm×4.6；科导超声波清洗器；乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、浓氨，甲醇为分析纯、水为娃哈哈纯净水；柴胡对照药材(中国食品药品检定研究院，120992-201108）；柴胡皂苷a(中国药品生物制品检定所，110777-200507）、柴胡皂苷d（中国药品生物制品检定所，110778-200506）、柴胡阴性对照购自市场试验室自制；青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G预制板（批号20090406）、消乳散结胶囊样品为山东步长神州制药有限公司提供（批号111206、120203、120204、120205）

2 柴胡TLC薄层研究[1]

2.1 供试样制备

2.1.1 取样品2g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为点样溶液①。

2.1.2 取样品2g、阴性对照样品2g、柴胡对照药材0.5g，各加甲醇50ml，分别加热回流30分钟，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，分别制成供试溶液②、供试溶液③、供试溶液④。

2.1.3 取样品2g、阴性对照样品2g、柴胡对照药材0.5g，各加入0.5%氨性甲醇溶液50ml，分别加热回流30分钟，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，分别制成供试溶液⑤、供试溶液⑥、供试溶液⑦。

2.1.4 取样品2g、阴性对照样品2g、柴胡对照药材0.5g，各加甲醇50ml，分别加热回流30分钟，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣用水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，分取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，分别制成供试溶液⑧、供试溶液⑨、供试溶液⑩。

2.2 对照品溶液的制备 分取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液S1、S2。

2.3 薄层展开方法 吸取上述10种供试溶液和2种对照品溶液各5μl，点于硅胶G预制板上，分别以展开剂(A)：乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)、展开剂(B)：二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(30∶40∶15∶3)、展开剂(C)：三氯甲烷-甲醇-水（7∶3∶1）10℃以下放置分层的下层溶液，展开，取出，晾干。

2.4 显色剂条件喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液，在60℃加热至斑点显色清晰。

2.5 薄层结果表明，柴胡药材几种提取方法均检测出柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、而样品与阴性对照的几种提取方法中均未检测出柴胡皂苷a、柴胡皂苷d。

3 柴胡HPLC的研究

3.1 色谱条件照《中国药典》2010版一部柴胡含量项下方法，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为210nm。

3.2 对照品溶液的制备取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1ml各含50μg的的混合对照溶液。

3.3 供试品溶液的制备

3.3.1 方法①：取样品1g、柴胡对照药材0.5g、柴胡阴性对照1g，分别加甲醇25ml，超声处理（功率300W，频率33kHz）30分钟，过滤，用微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

3.3.2 方法②：分取样品1g、柴胡对照药材0.5g、柴胡阴性对照1g，分别加含5%浓氨溶液的甲醇溶液25ml，超声处理（功率300W，频率33kHZ）30分钟，过滤，精密吸取10ml，水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，用微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

3.4 测定法 精密吸取上述供试溶液和对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

3.5 色谱结果 样品和柴胡阴性对照用甲醇提取和用氨性甲醇提取，在图谱中均未见柴胡皂苷a、柴胡皂苷d色谱峰；柴胡对照药材两种提取方法其色谱中有柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的色谱峰。

4 讨论

4.1 研究表明，消乳散结胶囊中醋柴胡所含的柴胡皂苷a、柴胡皂苷d经过醋制或提取工艺后，其化学成分发生了变化，未能检测出柴胡皂苷a、柴胡皂苷d色谱峰。

4.2 含柴胡的口服制剂，由于要通过胃的吸收，其强酸环境对柴胡皂苷影响较大，现行的《中国药典》以柴胡皂苷a、d作为指标成分来考察柴胡药材的质量值得商榷。