毛细管电泳法用于检测糖化血红蛋白的优势性分析

纪玉松

[摘要] 目的 分析用于檢测糖化血红蛋白的毛细管电泳法的性能，并与伯乐D10糖化血红蛋白分析仪进行对比和分析，以期指导临床应用。方法 选取正常人、缺铁性贫血患者和血红蛋白变异者各10名，每人静脉采集全血6 mL，加入抗凝剂制成标本，为正常组、缺铁性贫血组和变异体组，每组血液标本平均分为两份，分别用毛细管电泳仪和伯乐D10糖化血红蛋白分析仪进行糖化血红蛋白的检测，记录数据并进行分析比对，运用统计学方法处理数据。结果 ①在无干扰因素的情况下，毛细管电泳法和伯乐D10糖化血红蛋白分析仪对于糖化血红蛋白的检测相关性良好，其含量分别为（5.55±0.54）%和（5.53±0.52）%，差异无统计学意义（t<2.101，P>0.05）。②糖化血红蛋白变异体对两种检测方法的影响 在变异体存在的情况下，两种检测方法检测结果存在差异，毛细管电泳法的结果与血糖结果相符，具体结果见表2、表3。③缺铁性贫血对两种检测方法的影响缺铁性贫血可使糖化值升高，具体结果见表4。结论 毛细管电泳法与伯乐D10糖化血红蛋白分析仪相比具有明显优势，应用条件较简单，可操作性和可重复性高，前者不受变异体干扰，与临床诊断结果相符，且能提示缺铁性贫血的存在与否，适合应用到临床的诊断检查中。

[关键词] 糖化血红蛋白检测；毛细管电泳法；伯乐D10糖化血红蛋白检测；优势

[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2016）11（a）-0006-03

Capillary Electrophoresis Method Used for Determination of Glycosylated Hemoglobin Advantage Analysis

JI Yu-song

Clinical laboratory ，Qingdao Chenyang Peoples Hospital，Qingdao，Shandong Province，266000 China

[Abstract] Objective To analysis of capillary electrophoresis method used for determination of glycosylated hemoglobin performance， and compared with Bio-Rad D10 glycated hemoglobin analyzer and analysis， in order to guide clinical application. Methods Choose normalpeople，patients with iron deficiency anemia and hemoglobin variability each 10， each vein whole blood collected 6 ml， join the anticoagulant specimen， respectively divided into four groups， respectively， the normal group， iron deficiency anemia group and variants， each group of average blood specimen was divided into two， respectively， with capillary electrophoresis apparatus and Bio-Rad D10 test the glycosylated hemoglobin a1c analyzer， record the data and analysis， process the data by statistical methods. Results 1， In the case of no interference factors， capillary electrophoresis and bole D10 for glycosylated hemoglobin a1c analyzer test correlation is good， its content， respectively. （5.55 ± 0.54） % and（5.53 ± 0.52） %， there is no statistical difference（t<2.101，P>0.05）. 2， Glycated hemoglobin variant of the influence of two kinds of detection methods In the presence of variants， differences between two methods of testing results， the results of capillary electrophoresis with blood sugar results of specific results are shown in table 2 and table 3.3， The influence of iron deficiency anemia of two kinds of detection methods Iron deficiency anemia can make the saccharification value increases， the specific results are shown in table. Conclusion Capillary electrophoresis method compared with bole D10 glycated hemoglobin analyzer has obvious advantages， the application condition is relatively simple， high maneuverability and repeatability， the former can't be interfered variants， consistent with clinical diagnosis， and can suggest the existence of the iron deficiency anemia， suitable for application in clinical diagnostic work-up.

[Key words] HbAlc Test； Capillary electrophoresis； Bio-Rad D10 glycosylated hemoglobin test； Advantage

糖化血红蛋白是血红蛋白中2条B链的N端缬氨酸和葡萄糖非酶化不可逆结合形成的，与血糖浓度成正比，随红细胞的凋亡而消失[1]。因其不受进食等的影响，通过测定糖化血红蛋白的含量，可以反映糖尿病患者在过去几个月的时间内糖尿病控制情况的好坏，也可预测三个月内糖尿病的病情变化。并且糖化血红蛋白的检测与血糖的检测相比较稳定，故糖化血红蛋白的检测具有重要的临床意义[2]。该研究选择以高效液相色谱法为原理的伯乐D10糖化血红蛋白分析仪进行对比，明确毛细管电泳法的优势，以求临床的检测更加准确与便捷。研究表明，在糖化血红蛋白的干扰因素中，血红蛋白变异体和缺铁性贫血对于检测准确性干扰最常见，故该次研究分别以血红蛋白变异体和缺铁性贫血作为变量，对两组检测方法进行了比对，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

正常组、变异体组、缺铁性贫血组分别选取10名正常人（无糖尿病、贫血等疾病的健康人）、血红蛋白变异体患者、缺铁性贫血患者，静脉采全血6 mL，平均分为两份，加入抗凝剂EDTA，制成血液样本，于4°C环境下保存。见表1。

1.2 对象的纳入标准

血红蛋白变异体组病例纳入标准：临床检查中HbA1c结果与血糖结果不符，经血红蛋白电泳检测后确认存在血红蛋白变异体的病例。缺铁性贫血组病例纳入标准：根据临床血液学依据[2]。正常组纳入标准：经全面检查后，排除糖尿病，贫血等的健康人。

1.3 仪器和试剂

毛细管蛋白电泳仪和伯乐D10糖化血红蛋白分析仪，及其各自配套试剂。

1.4 原理

毛细管电泳法原理： 在碱性缓冲液及高电压环境下，由于血红蛋白不同组分所携带电荷数差异的存在，在电场力的作用下其泳动速率也存在差异，因而可以完成不同组分的分离，并予以测定[3]。伯乐D10糖化血红蛋白分析仪原理： 采用高效液相色谱法（HPLC）检测全血糖化血红蛋白，由于糖化后的血红蛋白所带电荷数的差异，测量其在波长为440 nm时的吸收情况，通过软件进行测定和计算，从而完成糖化血红蛋白的测定[4]。

1.5 方法

①无干扰因素的情况下两种方法的比较：取正常组样本分为两组，分别用毛细管电泳法和伯乐D10糖化血红蛋白分析仪检测糖化血红蛋白，记录其结果，并进行两独立样本的t检验，分析两种方法测得的糖化血红蛋白含量。②糖化血红蛋白变异体对两种方法的影响 选取变异组的样本血，分为两组，分别编号。分别采用上述两种检测方法对两组样本血进行糖化血红蛋白的检测，记录其数据，进行统计学分析。将样本委托上海伯豪生物科技有限公司进行血红蛋白基因测序，得出变异体类型。③缺铁性贫血对两种方法的影响 选取缺铁性贫血组的样本血，分为两组，并予以编号。采用上述两种检测方法对两组样本进行检测，并进行血清学检查，记录数据

1.6 统计方法

采用软件SPSS 17.0进行统计学处理，计量资料用平均数±标准差（x±s）表示，P<0.01为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 无干扰因素的情况下两种方法的比较结果

经两独立样本t检验得P>0.05，t<2.101，认为两种检测方法在无干扰因素情况下测得糖化血红蛋白含量差异无统计学意义，二者相关性良好，见表2。

2.2 两种检测方法的检测结果

伯乐A10糖化血红蛋白分析仪测得的HbA1c结果与实际血糖值不符，而毛细管电泳法测得结果与血糖值基本一致。变异体类型主要为Hb E、Hb J-Bangkok、Hb NewYork、Hb G-Taipei和Hb F，见表3。

2.3 缺铁性贫血对两种检测方法的影响

缺铁性贫血对两种检测方法的影响见表4、表5。

3 讨论

糖化血红蛋白是糖基化的血红蛋白，因其生成量取决于血糖浓度，与进食等因素无关，故临床上通过测定糖化血红蛋白的含量可以诊断患者是否患有糖尿病以及反映糖尿病治疗情况和预后。糖化血红蛋白测定是指测定糖化了的血红蛋白占总的血红蛋白的比例，正常人糖血红蛋白约占4%～6%，>6.5%基本可以确定为糖尿病患者，因为较血糖检测稳定，故糖化血红蛋白检测在临床具有重要的意义。检测糖化血红蛋白的方法有很多，如高效液相色谱法，免疫层析法、电泳法等，高效液相色谱法是目前最经典的检测方法之一。该次研究用毛细管电泳法与伯乐D10糖化血红蛋白分析仪（其原理为高效液相色谱法）做对比，比较二者相关性以及得出毛细管电泳法检测糖化血红蛋白的优势变异体组的有关结果显示，毛细管电泳法的检测结果与实际血糖结果一致，而伯乐D10糖化血红蛋白分析仪的结果不一致。故在变异体存在的情况下，毛细管电泳法的优势性显而易见，这与某研究表明的电泳法可以分离绝大部分血红蛋白变异体相一致[5]；而伯乐D10糖化血红蛋白分析仪不能提示血红蛋白变异体，其检测结果的准确性完全取决于变异体糖化率和正常血红蛋白糖化率的一致性。而后者结果的偏差很容易造成临床上的误诊。缺铁性贫血（IDA）的血清学检查结果显示，空腹血糖无明显差异，缺铁性贫血组血清铁含量明显减少，总铁结合力明显增加，糖化血红蛋白含量增加，IDA使得HbA1c检测结果高于正常值，经补铁治疗后，结果均下降。但伯乐D10检测仪仅可显示糖化值的变化，无法确定是否有缺铁性贫血病史；毛细管电泳仪可得出HbA2 值，目前HbA2的临界值为2.25%，可以根据其结果对IDA进行筛查。并且，在进行糖化血红蛋白的检测过程中，毛细管电泳法对环境条件、温湿度、pH的要求均低于伯乐D10糖化血红蛋白分析仪。且操作性更强，可重复操作，样本用量较小。

综上所述，毛细管电泳法具有精確性高，操作性强，受干扰因素少的优势，更加符合现代医疗的要求。与伯乐D10糖化血红蛋白分析仪相比，毛细管电泳法在缺铁性贫血或糖化血红蛋白变异等存在的情况下，对诊断更加具有参考价值，可以提示变异体存在与否以及其类型，提示是否有缺铁性贫血的发生，诊断准确性更高，更具有临床参考价值，建议在临床中推广使用，以提高糖化血红蛋白的检测效率与精确度，减少误诊的可能性。

[参考文献]

[1] 王宏平.糖化血红蛋白的检测意义[J].中国实用医药，2007， 2（6）：10-11.

[2] 邓家栋.临床血液学[M].上海：上海科学技术出版社，2001：23-86.

[3] 李卿，刘文彬，金中淦，等.毛细管电泳法检测糖化血红蛋白的分析性能评估[J].检验医学，2015，30（2）：181-182.

[4] 杨兴萍.美国伯乐D-10糖化血红蛋白分析仪的性能评价[J].检验医学与临床，2011，8（21）：2683-2684.

[5] WeyKamp C，Waenink-Wieggers H，Kemna E，et al. HbAlc：performance of the Sebia cupillary[J].Clim Chem Lab Med，2013，51（6）：129-131.

（收稿日期：2016-07-17）