子宫腺肌病中缺氧诱导因子—1的表达及其临床意义

贺凌云　朱炜　罗君玲

【摘要】 目的：探讨子宫腺肌病患者在位和异位内膜组织中缺氧诱导因子-1蛋白的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法检测子宫腺肌病患者的在位和异位内膜组织各60例，并将其与正常子宫内膜30例的阳性率进行统计学分析。结果：HIF-1表达中，子宫腺肌病内膜、肌层的表达大于正常子宫内膜及肌层。子宫腺肌病中异位和在位内膜中的表达为86.67%和65.00%，相比正常子宫内膜33.33%，差异有统计学意义（P<0.05）。异位内膜表达也高于在位内膜，比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：子宫腺肌病的发生、发展与HIF-1关系密切，可促进子宫腺肌病细胞的生长、血管形成。

【关键词】 子宫腺肌病； 缺氧诱导因子-1； 免疫组化

【Abstract】 Objective：To explore the clinical significance and expression of Hypoxia inducible factor-1 in adenomyosis.Mehtod：Immunohistochemical method was used to detect the each 60 cases of eutopic and ectopic endometrial tissue with adenomyosis， and the positive rate was compared with that of normal endometrium in 30 cases.Result：The expression of the muscular layer and endometrium of adenomyosis in HIF-1 were greater than that of normal endometrium and muscular layer；expression in ectopic and eutopic endometrium of adenomyosis were respectively 86.67% and 65.00%， compared with normal endometrium of 33.33%，there were statistically significant differences（P<0.05）.The expression of ectopic endometrium was higher than that in eutopic endometrium，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：The occurrence and development of adenomyosis is closely related to HIF-1，which can promote the growth and angiogenesis of adenomyosis.

【Key words】 Adenomyosis； Hypoxia inducible factor-1； Immunohistochemical

First-authors address：Peoples Hospital of Yingde City in Guangdong Province，Yingde 513000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.07.008

子宮腺肌病是指子宫内膜腺体及其周围间质慢性侵袭进入子宫肌层，进行性生长而产生的病变，发病机制不清，主要表现为继发性进行性加重的痛经、月经量增多、不孕不育等，已成为危害广大妇女身心健康的重要妇科疾病，药物治疗以及保守手术治疗效果差，尤其对渴望生育的妇女临床治疗非常棘手。研究认为缺氧诱导因子-1（HIF-1）为缺氧状态下可调控新生血管生成，本研究旨在通过临床资料分析，免疫组化检测HIF-1在子宫腺肌病中的表达情况并探讨临床意义，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本科2012年1月-2015年1月诊断明确的子宫腺肌病患者异位、在位内膜组织各60例，年龄40～52岁，平均（46.2±3.1）岁；其中增生期患者38例，分泌期22例；月经起始时间、周期异常46例（76.67%）；痛经病史54例（90.00%）。同时选取同年份在本科因非子宫腺肌病疾病前来门诊或病房行诊刮术的正常子宫内膜30例作为对照组，年龄26～58岁，平均（45.7±3.0）岁，刮诊术后内膜组织经病理诊断考虑为正常子宫内膜，月经起始时间、周期异常24例（80.00%），痛经病史25例（86.67%）。患者年龄、月经史、临床表现等一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有病例病理诊断均经2名副主任及以上医师诊断，一般条件可，无高血压、糖尿病，无术前使用激素史。

1.2 方法 手术室取子宫腺肌病患者的在位内膜和异位内膜组织，非子宫腺肌病疾病前来门诊或病房行诊刮术的正常子宫内膜，取材后立即放入4%中性甲醛中固定72 h后脱水包埋，每个组织块均先进行HE染色，筛选，明确诊断后进行免疫组化染色，参照阴性对照组进行分析。

1.3 主要试剂 包括浓缩型兔抗人HIF-1多克隆抗体，使用稀释度为1∶50，购自武汉博士德生物工程有限公司，通用型二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司，用公司提供阳性玻片作为对照组，采用通用免疫组化进行实验。

1.4 判定标准 参照Birner等[1]展示，在低倍镜视野下随机观察5个视野数的共计1000个细胞，综合染色强度和阳性内膜细胞总数占总内膜细胞数的百分比进行处理，HIF-1蛋白表达定位于膜细胞的胞质内，呈现出棕黄色或棕褐色的颗粒表现。此外，染色强度按以下标准评估：着色弱，但强于对照者为1分，稍清晰者为2分，强者为3分；阳性细胞占总内膜细胞数≤10%者为（-），计0分，10%～50%者为2分，51%～ 80%者为3分，大于80%者为4分。上述两项评分相加，3分为弱阳性（+），4～5分为阳性，6～7分为强阳性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 20.0统计软件进行统计学处理，计量资料采用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化结果 正常子宫肌层与正常子宫内膜表达没有区别，子宫腺肌病肌层、内膜和正常子宫肌层、内膜表达比较均有区别，腺肌病表达均大于正常子宫，见图1。

2.2 HIF-1在患者异位、在位内膜和正常子宫内膜中的表达 HIF-1在子宫腺肌病患者的异位、在位内膜和正常子宫内膜中的表达情况可见，异位和在位内膜中的表达为86.67%和65.00%，相比正常子宫内膜的33.33%，差异均有统计学意义（P<0.05）。同时，异位内膜表达也高于在位内膜，比较差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

目前，关于子宫腺肌病该病发生发展变化原因与机制不明，有学者认为，子宫肌层内的各种细胞因子、免疫因子、激素及其受体、酶及酶的抑制剂等，对其发生与发展均起着重要的作用[2]。当前，对于该病的治疗包括曼月乐（左炔诺孕酮宫内缓释系统）、子宫动脉栓塞或阻断治疗、腹腔镜联合促性腺释放激素激动剂（GnRH-a）和放置左炔诺孕酮宫内缓释系统（LNG-IUS）、芳香化酶抑制剂等治疗方法，但对于其与缺氧诱导因子之间的关系的研究并未见[2-11]。有学者认为子宫动脉栓塞治疗该病痛经的有效率为77.2%[12]，同时，高强度聚焦超声消融治疗能改善有生育要求的子宫腺肌病患者的临床症状，且不增加妊娠及分娩时并发症的发生率[13]，联合GnRH-α和/或LNG-IUS能提高高強度聚焦超声消融治疗子宫腺肌病痛经的疗效，降低复发率[14]。

1991年研究者在探讨缺氧诱导的红细胞成素（EPO）基因表达谱中首先发现的一种DNA结合蛋白，命名为缺氧诱导因子-1（HIF-1），进一步研究发现，其可调节细胞内氧代谢，起到关键因子的作用。研究发现HIF-1的靶基因多达40种[15]，其功能主要涉及血管的生成、塑型，转化，促使红细胞生成、糖转运分解、离子转运、细胞增殖和细胞存活等重要作用[16]。近年来研究发现，HIF-1在缺氧状态下可调控血管生成，通过影响血管生存其他因子的表达，包括血管内皮生长因子（VEGF）及其受体-1、内皮素-1、诱导型一氧化氮合酶、人内皮细胞环氧合酶-2等因子，而直接或间接参与血管生成的全过程[17]。文献[18]报道提示上述血管生成因子与子宫腺肌病发病相关。

本文通过免疫组化分析，研究结果提示，正常子宫肌层与正常子宫内膜在HIF-1的表达没有区别；子宫腺肌病肌层、内膜和正常子宫肌层、内膜表达比较均有区别，腺肌病表达均大于正常子宫。同时，统计分析发现，异位和在位内膜中的表达为86.67%和65.00%，相比正常子宫内膜33.33%，差异均有统计学意义（P<0.05）。同时，异位内膜表达也高于在位内膜（P<0.05），比较差异有统计学意义（P<0.05）。

从免疫组化分析中可见，具体的细胞组织中，内膜细胞中可见表达增强，而在间质细胞中几乎未见表达，表明HIF-1的激活可能与子宫腺肌病的发病关系密切，异位和在位的内膜相对处于缺氧状态，从而诱导细胞过度表达缺氧诱导因子，促进对靶基因的表达，导致细胞对缺氧的耐受能力增强，引起表达进一步增强。同时，在子宫膜异位症中，HIF-1α在异位内膜过度表达，且与异位内膜的血管生成密切相关，推测HIF-1α可能在子宫内膜异位症的发病机制中起着重要作用[19]。有关学者认为，HIF-1蛋白的表达科导致大量的VEGF产生，从而促使微血管的生成，间接表明缺氧诱导因子在子宫腺肌病中的重要地位[20]。诸多学者也认为，子宫腺肌病动物模型中，通过甲氧雌二醇-2，可抑制HIF-1蛋白的表达，从而抑制疾病的生长和发展[21]。笔者的临床资料分析认为，通过手术切除子宫或其他的治疗方案治疗子宫腺肌病，可有效治疗该病，但是否可通过抑制缺氧诱导因子，抑制血管内皮生长因子的表达，抑制微血管生成，从而治疗子宫腺肌病，需做进一步的研究，笔者认为HIF-1也参与子宫腺肌病的血管生成，可能是血管生成的核心调控因子之一。

综上所述，子宫腺肌病的发生、发展是由多因素、多步骤、多阶段构成的复杂过程，可能涉及多个细胞因子及基因的激活或抑制。笔者认为，HIF-1与子宫腺肌病发生发展关系密切，促进子宫腺肌病细胞的生长、血管形成。

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（收稿日期：2017-01-12） （本文编辑：周亚杰）