麻荆止咳颗粒对咳嗽变异型哮喘豚鼠BALF炎症细胞和肺支气管组织形态的影响

陈志斌，周春权，李雅敏，吴华嵩，梁淑敏，曾雪爱，王春娥，李希，程佑民（.福建省中医药研究院，福建福州5000；.福建中医药大学附属第二人民医院，福建福州5000；.泉州市中医院，福建泉州6000；.福建中医药大学，福建福州50）

麻荆止咳颗粒对咳嗽变异型哮喘豚鼠BALF炎症细胞和肺支气管组织形态的影响

陈志斌1，2，周春权1，李雅敏3，吴华嵩1，梁淑敏4，曾雪爱1，王春娥2，李希2，程佑民1
（1.福建省中医药研究院，福建福州350003；2.福建中医药大学附属第二人民医院，福建福州350003；3.泉州市中医院，福建泉州362000；4.福建中医药大学，福建福州350122）

目的观察麻荆止咳颗粒对豚鼠咳嗽变异型哮喘模型BALF炎症细胞和肺支气管组织形态学的影响。方法用Muraki法建立咳嗽变异型哮喘豚鼠模型，观察BALF炎症细胞和右肺支中叶气管组织切片的形态学变化。结果①麻荆止咳颗粒低、中、高剂量组BALF中EOS高于正常对照组，低于模型组，低剂量组与中、高剂量组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；②光镜观察各剂量组较模型组，支气管黏膜充血及嗜酸性粒细胞浸润有不同程度的减轻，高剂量组减轻明显，管腔内上皮细胞脱落及黏液栓形成少见。结论麻荆止咳颗粒能减少BALF的嗜酸性粒细胞的数量，降低支气管黏膜炎症细胞的浸润作用。

咳嗽变异型哮喘；麻荆止咳颗粒；BALF炎症细胞；肺支气管组织形态；豚鼠

麻荆止咳颗粒是我院治疗咳嗽变异型哮喘的经验方，具有宣肺化痰、养阴润肺、祛风止咳的功效。为探讨麻荆止咳颗粒的止咳机制，我们建立咳嗽变异型哮喘豚鼠模型，观察麻荆止咳颗粒对豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）致炎症细胞尤其特别是嗜酸性粒细胞（EOS）和肺支气管组织形态的影响。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物体质量（200±30）g雄性豚鼠70只，由上海斯莱克实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK（沪）2012-0011。

1.1.2 药物及试剂卵蛋白（OVA）（美国Sigma公司）；水合氯醛（青岛宇龙海藻有限公司）；环磷酰胺（通化市茂祥制药有效公司）；氢氧化铝（上海国药集团）。麻荆止咳颗粒（福建中医药大学第二人民医院，批号：20140923）。

1.1.3 主要仪器鱼跃牌402型超声雾化器、5417高速冷冻离心机、BX51T-PHD-J11显微镜（日本奥林巴斯有限公司）；Image-Pro Plus多功能真彩色细胞图象分析管理系统（美国Media Cybernetics公司）；RM2015石蜡切片机（德国莱卡公司）；MDF-382E型低温冰箱（日本三洋电机株式会社）；移液器（德国Eppendorf公司）；DSHZ-300型恒温水浴箱（江苏太仓医用仪器厂）等。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组70只清洁级雄性豚鼠，体质量（200±30）g，随机分为正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、模型组，每组14只。

1.2.2 造模方法根据Muraki法建立咳嗽变异型哮喘模型。操作：第1天以30 mg／kg剂量腹腔注射环磷酰胺，第3天肌肉注射4%OVA溶液0.5 mL，腹腔注射2%Al（OH）30.2 mL，第14天开始，造模豚鼠放入4 L的雾化玻璃罩内，用1%OVA溶液超声雾化吸入2 min，雾化流量3 mL／min，隔日1次，共7次。正常组豚鼠同一时间同一途经注射等量生理盐水。造模后豚鼠出现呼吸急促，腹肌抽搐，口鼻分泌物增多，表明造模成功。

1.2.3 给药造模后随机分为模型组、1.25 g／（kg／d）组（低剂量组）、2.5 g／（kg／d）组（中剂量组）、5.0 g／（kg／d）组（高剂量组），灌胃给药，每次10 mL，每日1次。正常对照组、模型组，每日1次，用10 mL生理盐水灌胃。5组灌胃7 d，可以自由进食豚鼠饲料和水。

1.2.4 标本采集及检测指标末次给药后24 h，称体质量，用10%水合氯醛0.3 mL／100 g腹腔注射，麻醉后切开颈部皮肤，充分暴露气管，夹闭右主支气管，于左主气管用灌洗针注入2 mL生理盐水，灌洗左肺，反复3次，回收灌洗液，15 000 r／min离心10 min，沉淀物涂片，瑞氏—姬姆萨染色，水洗后存放，光镜下细胞分类计数。油镜下计数分类200个白细胞，计算嗜酸性粒细胞所占百分比。气道黏膜及肺组织形态观察，即打开胸腔，取右肺中叶，肺组织用生理盐水冲洗后，放入4%多聚甲醛中固24 h，石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察每张肺组织切片的形态特征。

2 结果

2.1 实验结果见表1。

表1 5组细胞分类计数比较

表1 5组细胞分类计数比较

注：与正常组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05；与中剂量组比较，3）P＜0.05；与低剂量组比较，4）P＜0.05。

组别模型组正常组高剂量组中剂量组低剂量组n细胞分类计数／×109／L白细胞／×109／L 9.72±0.831）4.03±0.122）4.18±0.081）2）3）4）4.20±0.071）2）4.56±0.101）2）14 14 14 14 14嗜酸性粒细胞1.76±0.251）0.18±0.122）0.35±0.111）2）3）4）0.39±0.101）2）0.55±0.071）2）中性粒细胞0.81±0.071）0.37±0.022）0.35±0.011）2）4）0.39±0.042）0.41±0.021）2）淋巴细胞0.47±0.041）0.40±0.022）0.48±0.031）4）0.34±0.011）2）0.47±0.021）单核细胞6.55±0.561）3.08±0.092）3.00±0.061）2）4）3.08±0.052）3.13±0.072）（嗜酸性粒细胞／总细胞）／% 18.00±1.061）4.33±2.812）8.33±2.391）2）3）4）9.33±2.311）2）12.15±1.401）2）

2.2 肺支气管形态观察见图1。

图15 组豚鼠肺支气管形态图（×400）

3 讨论

3.1 麻荆止咳颗由蜜麻黄、荆芥、蝉蜕、瓜蒌皮、旋覆花、蜜款冬花、北沙参、甘草等12味药组成，方中以蜜麻黄、荆芥、旋复花祛风降气；瓜蒌皮清热化痰；蝉蜕祛风止痒，解痉止咳；密款冬花润肺下气止咳；北沙参养阴生津润肺。全方共奏宣肺化痰、养阴润肺、祛风止咳之功。治疗以肺脏为重点，利咽祛痒并重，有别于西医的哮喘。我们课题组前期研究［1］表明，麻荆止咳颗粒合丙卡特罗治疗咳嗽变异型哮喘患者，疗效明显优于西药治疗，同时证实麻荆止咳颗粒具有良好的止咳作用。

3.2 咳嗽变异性哮喘是由气道炎症引起的气道高反应性，通过释放细胞因子导致嗜酸粒细胞（E0S）黏附于微血管内皮细胞上，使嗜酸性粒细胞活化而产生颗粒蛋白，进而引起支气管痉挛、气流受阻和组织损伤，是一种气道反应性炎症和以气道高反应为特征的疾病［2-4］。目前认为，气道炎症是哮喘气道高反应的基础，在咳嗽变异型哮喘的支气管黏膜的特征性炎症中，EOS是关键的效应细胞。

3.3 研究结果表明，麻荆止咳颗粒低、中、高剂量组均能降低咳嗽变异型哮喘豚鼠BALF中的EOS数量，减少肺组织嗜酸性粒细胞的浸润，中、高剂量组疗效，优于低剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05）。肺支气管形态学观察表明，麻荆止咳颗粒低、中、高剂量组支气管粘膜充血水肿及嗜酸性粒细胞浸润，较模型组有不同程度的减轻，其中高剂量组明显减轻，管腔内上皮细胞脱落及粘液栓形成较少。本实验为麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异型哮喘提供了实验依据，证实麻荆止咳颗粒通过减少BALF的嗜酸性粒细胞的数量，降低支气管粘膜炎症细胞的浸润，减轻气道炎症，达到治疗咳嗽的目的。

［1］陈志斌，黄民华，连林辉，等.咳平汤治疗风邪客肺、肺热伤津型感染后咳嗽临床观察［J］.福建中医学院学报，2010，20（4）：7-9.

［2］MENZIES-GOW A，ROBINSON DS.Eosinophils eosinophilis Cytokines（interleukim5），and antieosinophilic therapy in asthma［J］.Curr Opin Med，2002，8（8）：33-38.

［3］SHIMODA T，OBASE Y，KISHIKAWA R，et al.Comparison of central and peripheral airway inflammation between cough variant asthma and mild asthma by examination of hypertonic saline inhalation-induced sputum［J］.J Allergy Clin Immunol，2007. 19（1）：130-132．

［4］MATSUOKA H，NIIMI A，MATSUMOTO H，et al.Inflammatory subtypes in cough-variant asthma：association with maintenance doses of inhaled corticosteroids［J］.Chest，2010.138（6）：1418-1420.

R285.5

B

1000-338X（2017）01-0019-02

2016-10-26

福建省卫生厅中医药科研资助课题（WZHW201303），福建省科技计划项目（2015R1035-2）

陈志斌（1960—），男，主任医师，主要从事呼吸病的中西医结合研究。