细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因和妊娠糖尿病的关系

李丽贤 许曼

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)指妊娠期孕妇首次发现或发生的糖代谢异常，经口服糖耐量试验检查确认，已被WHO列为独立的糖尿病的类型之一[1]。随着人们生活水平的提高，以及孕期的运动量减少，调查显示，GDM的发生率呈现逐年增加的趋势，严重危害母婴的健康[2]。关于GDM的病因目前尚未完全阐明，可能与遗传因素、炎症因子以及胰岛素抵抗等有关[3]。

研究证实，2型糖尿病具有遗传异质性，且发现多个发病的相关基因，文献报道，这些发病基因的多态性与GDM有着显著的相关性[4]。其中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因(cyclin dependent kinaseinhibitor，CDKN2A/2B)是两个临近的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制基因，CDKN2A/2B过度表达可引起胰腺β细胞复制的调节剂CDK4的减少，继而引起胰腺发育不全和糖尿病的发生[5]。本文就CDKN2A/2B和GDM的相关性做进一步的探讨，为GDM的治疗提供理论依据。

资料与方法

一、临床资料

选取本院2014年12月—2015年12月收治的GDM患者56例(GDM组)进行研究，所有孕妇均满足以下任意一种情况：(1)糖化血红蛋白≥6.5%；(2)空腹血糖≥7.0 mmol/L；(3)口服葡萄糖耐量试验血糖≥11.1mmol/L；(4)典型高血糖或高血糖危象。同时选取正常糖耐量(血糖<11.1mmol/L)孕妇108例(正常组)以及2型糖尿病患者98例(T2DM组， T2DM组患者符合2型糖尿病诊断标准[6])。三组患者的年龄、平均孕周比较，差异无统计学意义，资料具有可比性。

表1 三组患者基本资料比较

二、方法

1.基因检测：所有受试者均空腹8 h以上，于清晨进行统一采集外周静脉血4 ml，按照Trion试剂盒(型号：X-100，规格：100ml，生产厂家：北京索莱宝科技有限公司)的说明书以及外周血白细胞DNA提取标准操作规程进行DNA的提取，采用PCR-RFLP方法对各组受试者外周血CDKN2A/2B基因分布频率进行观察。本组实验所有试剂均由本院研究所统一提供，测定和检测均由同一人进行操作。

2.统计学处理：应用SPSS17.0 软件进行统计分析。计量资料采用均数±标准差表示，计数资料采用χ2检验，组间进行t检验。采用Person检验进行相关性分析，并设定显著性水平为P<0.05。

结 果

一、 三组受试者CDKN2A/2B的TT、TC、CC三种基因型分布频率比较

三组受试者中CDKN2A/2B基因rsl0811661位点均存在于TT、TC、CC三种基因型。TT基因分布频率，GDM和T2DM组显著高于正常组，差异有统计学意义；而GDM组和T2DM组相比，差异无统计学意义。CC分布频率，正常组显著高于GDM组和T2DM组，差异有统计学意义；GDM和T2DM组差异无统计学意义。三组TC分布频率相似，差异无统计学意义。见表2。

表2三组受试者CDKN2A/2B的TT、TC、CC三种基因型分布频率比较[例(%)]

组别例数TTTCCC正常组10815(139)47(435)46(426)GDM组5618(321)∗24(429)14(25．0)∗T2DM组9832(327)∗42(429)24(248)∗

注：与正常组相比，*P<0.05

二、 三组受试者rsl0811661危险等位基因T的分布频率比较

正常组等位基因T的分布频率显著低于GDM组和T2DM组，差异有统计学意义，但GDM组与T2DM组间的基因型和等位基因频率分布相近，差异无统计学意义。见表3。

表3三组受试者rsl0811661危险等位基因T的分布频率比较[例(%)]

组别例数等位基因T分布频率正常组10837(343)GDM组5633(589)∗T2DM组9859(602)∗

注：与正常组相比，*P<0.05

三、CDKN2A/2B基因和GDM相关性分析

相关性分析发现，rsl0811661危险等位基因T与GDM具有显著的相关性(r=4.227，P<0.05)。

讨 论

目前，对于GDM的发病易感基因的研究有着显著的突破，研究发现，易感基因对于GDM的早期诊断和干预有着极其重要的作用，不但减轻母婴结局的不良影响，也降低了妇女妊娠后2型糖尿病的发生风险。

近年来，随着科学研究的深入，发现CDKN基因已成为当今肿瘤的研究热点，细胞周期是细胞生命活动的重要部分，其相关激酶及抑制酶在细胞周期的调控中起着关键性的作用[7]。相关研究证实[4-7]，GDM患者中存在多个发病的相关基因，，这些发病基因的多态性与GDM有着显著的相关性。其中CDKN2A/2B是两个临近的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制基因，当CDKN2A/2B过度表达时，其胰腺β细胞复制的调节剂CDK4显著减少，从而诱发妊娠期糖尿病[8]。

本文通过对CDKN2A/2B基因在GDM、T2DM以及正常孕妇中的表达情况进行分析比较，结果发现CDKN2A/2B基因rsl0811661位点均存在于TT、TC、CC三种基因型上，GDM和T2DM组的TT基因分布频率显著高于正常孕妇组，差异有统计学意义；但GDM和T2DM组间差异无统计学意义。正常组等位基因T的分布频率(34.3%)显著低于GDM组(58.9%)和T2DM组(60.2%)，GDM和T2DM组分别与正常组比较，组间差异有统计学意义；但GDM组与T2DM组间的基因型和等位基因频率分布相近，差异无统计学意义。这说明CDKN2A/2B基因rsl0811661位点存在基因多态性，其T等位基因可能为GDM的风险等位基因[9]。为进一步探讨CDKN2A/2B基因与GDM的相关性，本文对其基因表达和GDM的相关性采用Person进行分析，结果发现rsl0811661危险等位基因T与GDM具有显著的相关性。这说明CDKN2A/2B基因可能是GDM的易感基因之一，或者为GDM和T2DM共同的易感基因[10]。

1 Diagnostic criteria and classification of hyperglycaemia first detected in pregnancy.Geneva,Switzerland:World Health Organization,2013.

2 申微,郭欣,区小牧.新诊断标准妊娠期糖尿病妊娠结局观察.中华临床医师杂志(电子版),2012,6:3090-3092.

3 International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups，Consensus Panel，Metzger BE，et al.International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups recommendations on the diagnosis and classification of hyperglycemia inpregnancy.Diabetes Care,2010,33:676-682.

4 Cho YM，Kim TH，Lim S，et al.Type 2 diabetes-associated genetic variantsdiscovered in the recent genome-wide association studies are related to gestationaldiabetes mellitus in the Korean population.Diabetologia,2009,52:253-261.

5 陈友,江芳华,徐丛荣,等.新诊断标准下妊娠糖尿病筛查分析.国际检验医学杂志,2013,34:3083-3084.

6 Takeuchi F，Serizawa M，Yamamoto K，et al.Confirmation of multiple risk Lociand genetic impacts by a genome-wide association study of type 2 diabetes in the Japanese population.Diabetes,2009,58:1690-1699.

7 侯旭奔,方浩,杜金童,等.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的临床研究进展.中国新药杂志,2011,20:1280-1286.

8 Xu M,Bi Y,Xu Y,et al.Combined effects of 19 common variations on type 2diabetes in Chinese:results from two community-based studies.PLoS One,2010,5:el4022.

9 Shin HD,Park BL,Shin HJ.Association of KCNQ1 polymorphisms with thegestational diabetes mellitus in Korean women.J Clin Endocrinol Metab,2010,95:445-449.

10 Moritani M,Yamasaki S,Kagami M.Hypoplasia of endocrine and exocrinepancreas in homozygous transgenic TGF-betal.Mol Cell Endocrinol,2015,229:175-184.