非小细胞肺癌组织中程序性死亡受体配体表达与调节性T细胞浸润的相关性

陈丽萍 李 琛

(河北北方学院附属第一医院呼吸内科，河北 张家口 075000)

非小细胞肺癌组织中程序性死亡受体配体表达与调节性T细胞浸润的相关性

陈丽萍 李 琛

(河北北方学院附属第一医院呼吸内科，河北 张家口 075000)

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中程序性死亡受体配体(PD-L)1与调节性T细胞(Treg)浸润的相关性。方法 NSCLC患者79例，检测癌组织及癌旁组织中PD-L1水平和Treg浸润情况，分析PD-L1水平和Treg浸润的相关关系，并观察其与临床病理的关系。结果 癌组织中PD-L1高表达和Treg高浸润显著高于癌旁组织(P<0.05)；Ⅰ期癌组织中PD-L1高表达和Treg高浸润显著高于Ⅱ期，有淋巴结转移肺癌组织中PD-L1高表达和Treg高浸润显著高于无淋巴结转移(P<0.05)；癌组织中PD-L1高水平与Treg高浸润存在正相关关系(P<0.05)。结论 NSCLC组织中PD-L1高表达和Treg高浸润，与淋巴结转移和分期有关，且PD-L1高表达与Treg高浸润呈正相关关系。

程序性死亡受体配体1；调节性T细胞；非小细胞肺癌

非小细胞肺癌(NSCLC)的发病与免疫功能异常和基因缺失或突变有关。调节性T细胞(Treg)是近年来被发现的一种T细胞亚群，对免疫应答和免疫稳定方面均具有重要作用，翼状螺旋转录因子P3(Foxp3)是其标志性分子之一。研究显示〔1〕，Treg水平升高对肺癌生长和转移具有促进作用，且与肺癌预后具有较大关系。程序性死亡受体(PD)配体(PD-L)1是B7家族的成员之一，是一种负性调节因子。在丙肝患者细胞中PD-L1表达与Treg增殖有关，因此推测PD-L1高表达与NSCLC 有关。然而目前临床关于Treg浸润和PD-L1表达与NSCLC的关系研究甚少。本研究拟分析NSCLC组织及癌旁组织中Treg浸润和PD-L1的表达情况及其相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年12月至2015年12月我院收治的79例NSCLC患者的手术癌组织及癌旁组织，患者均经病理及细胞学确诊。排除术前经放疗或化疗者、存在自身免疫性疾病者或严重感染者。其中男44例，女35例，年龄48～80〔平均(65.4±4.2)〕岁，根据TNM分期：Ⅰ期47例，Ⅱ期32例；肿瘤类型：鳞癌34例，腺癌35例，大细胞肺癌10例。研究经医学伦理委员会批准，患者及家属均知情同意，并签署知情同意书。

1.2 方法 试剂：兔抗人多克隆抗体PD-L1(生产批次：20131128)和Foxp3(生产批次：20131109)由Abcam公司提供，免疫组化SP试剂(生产批次：20131019)、苏木精(生产批次：20131025)均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。方法：将手术标本以10%的甲醛固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，脱蜡，分别将兔抗人多克隆抗体PD-L1和Foxp3(Treg)加入，置于4℃环境中过夜。然后分别进行洗脱、加入二抗，最后进行苏木精染色。然后进行计数，先于低倍镜视野下选取阳性细胞密集区域(5个细胞左右)，然后再行高倍镜观察，每个标本均记录5个视野。PD-L1染色阳性：细胞质或(和)胞膜出现棕褐色或棕黄色；Foxp3(Treg)染色阳性：肿瘤细胞及间质细胞质和细胞核呈棕褐色。PD-L1染色高表达：以阳性率20%为界限，高于20%表示高表达；Foxp3(Treg)染色：得到阳性细胞总数求平均值或者中位数，超过中位数或平均数表示高表达。

1.3 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行χ2或Fisher确切概率法检验及Spearman相关性分析。

2 结 果

2.1 癌组织和癌旁组织比较 癌组织中PD-L1高表达42例，癌旁组织中PD-L1高表达3例；癌组织中Treg高浸润40例，癌旁组织Treg高浸润4例，比较差异显著(P<0.05)。

2.2 PD-L1表达、Treg浸润与临床病理关系 Ⅱ期癌组织中PD-L1高表达和Treg高浸润显著高于Ⅰ期，有淋巴结转移肺癌组织中PD-L1高表达和Treg高浸润显著高于无淋巴结转移(P<0.05)。见表1。

2.3 相关性分析 Spearman相关性分析显示：癌组织中PD-L1高水平与Treg高浸润存在正相关关系(r=0.762，P=0.007)。

表1 PD-L1表达、Treg浸润与临床病理关系〔n(%)〕

3 讨 论

NSCLC是肺癌的一种，主要包括腺癌、鳞癌、大细胞癌，与小细胞肺癌比较，NSCLC扩散较慢，转移也相对较晚。目前，NSCLC发病原因和发病机制尚不确切，主要有以下观点〔2〕：NSCLC细胞是属于异质性恶性细胞，其形成与外源性毒素、环境等因素有关，主要包括工业污染、吸烟，其中吸烟是最重要的危险因素；NSCLC形成还与特定促癌基因活性增加、抑癌基因活性降低有关。且研究显示，NSCLC发生和发展还与机体免疫有关，且以T细胞免疫最重要。

Treg对机体自身免疫反应性T细胞亚群、对T细胞增殖、细胞因子产生均具有调节作用。研究显示〔3〕，Treg对荷瘤小鼠抗肿瘤反应具有抑制作用，提示Treg浸润与肿瘤发生发展具有较大关系。肿瘤细胞逃逸指肿瘤细胞可以通过免疫系统识别和攻击，进而在体内生产和增殖。Treg增殖在肿瘤细胞逃逸中发挥较大作用，对免疫功能具有抑制作用，并且调节免疫应答产生细胞因子，抑制对抗肿瘤作用。推测Treg浸润可能通过抑制免疫功能对肿瘤的监测和杀灭，进而影响肿瘤的发生和发展。本研究结果的具体作用机制尚不确切，可能与多种因素共同作用有关，多种因素可以促使肿瘤微环境发生改变，进而引起肿瘤负性刺激因子和促进因子失调，进而诱导Treg大量产生〔4〕。除此之外，NSCLC患者外周血会发生改变，且分期不同及是否存在淋巴结转移变化也不同，进而致使外周血促进未成熟树突细胞诱导Treg生成也存在差异。PD-L1是现阶段研究比较成熟的B7家族成员之一，是一种负性共刺激分子。有研究显示，PD-L1通路和Treg增殖存在较大关系〔5〕。且有研究显示，丙型肝炎患者树突细胞对Treg具有一定刺激作用，在一定程度上可以抑制丙型肝炎病毒特异性的T细胞，而这种抑制作用与PD-1/PD-L1通路存在较大关系〔6〕。而恶性肿瘤和转移性肿瘤中会存在较多Treg浸润，而Treg浸润同样与PD-1/PD-L1通路有密切关系。推测PD-1/PD-L1可以在一定程度上诱导Treg产生，并可以在一定程度上调节免疫功能，进而对肿瘤免疫进行负性调节，降低对肿瘤细胞的杀灭作用〔7〕。本研究说明Treg高浸润确实与NSCLC有关，且与临床病理特点有关，其原因为〔8〕：Treg高浸润会对机体免疫功能产生影响，进而降低机体对肿瘤细胞的免疫作用，致使肿瘤细胞产生，而对肿瘤监测作用降低，也会增加肿瘤转移能力，导致肿瘤分期较高和淋巴结转移。癌组织中PD-L1高水平与Treg高浸润存在正相关关系，分析其原因可能为：PD-L1水平较高时，PD-1/PD-L1通路也在一定程度上表达活跃，而PD-1/PD-L1通路对Treg浸润有关，进而导致Treg高浸润。

1 刘卫青,代荣钦,郭志松,等.缺氧诱导因子-1α、缺氧诱导因子-2α在非小细胞肺癌肿瘤组织中的表达及临床意义〔J〕.中华实验外科杂志,2015,32(11):2854-6.

2 Ikeda S,Okamoto T,Okano S,etal.PD-L1 Is Upregulated by simultaneous amplification of the PD-L1 and JAK2 genes in non-small cell lung cancer〔J〕.J Thorac Oncol,2016；11(1):62-71.

3 李 琳,王 晖,杜 俊,等.雌激素受体α和β在老年非小细胞肺癌患者的表达及其与临床病理关系〔J〕.中华老年医学杂志,2013；32(3):271-4.

4 Leng C,Li Y,Qin J,etal.Relationship between expression of PD-L1 and PD-L2 on esophageal squamous cell carcinoma and the antitumor effects of CD8+T cells〔J〕.Oncol Rep,2016；35(2):699-708.

5 龙 日,刘映峰,严全能,等.JNK通路介导LPS诱导脐静脉内皮细胞PD-L1表达的实验研究〔J〕.热带医学杂志,2013；13(5):546-8,569.

6 张 健,王昕升,王宝英,等.肺结核患者血中CD95与PD-1,PD-L1的检测与分析〔J〕.现代检验医学杂志,2013；28(1):103-5.

7 韩丽娟,李汝平,陈新峰,等.B7家族及其受体PD-1在人NK/T细胞淋巴瘤中的表达及临床意义〔J〕.中国肿瘤临床,2014；41(6):363-7.

8 马丽莉,李水仙,毕志彬.PD-L1和PD-L2在食管鳞状细胞癌表达增强并与浸润和转移有关〔J〕.细胞与分子免疫学杂志,2015；31(8):1112-4.

〔2015-12-09修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

陈丽萍(1984-)，女，硕士，住院医师，主要从事呼吸肿瘤方面的研究。

R73

A

1005-9202(2017)04-0903-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.04.053