微生物快速检测试纸条检测饲料原料微生物的实践

富国文 胡礼平 兰志刚 樊月圆 赵桂英*

(1.云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明 650201; 2.昆明正大有限公司,云南昆明 650301)

微生物快速检测试纸条检测饲料原料微生物的实践

富国文1胡礼平2兰志刚2樊月圆1赵桂英1*

(1.云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明 650201; 2.昆明正大有限公司,云南昆明 650301)

使用微生物快速检测试纸条检测饲料主要原料中的微生物，并与微生物标准检测方法的检测结果进行比较。结果显示，微生物快速检测试纸条与标准方法检测结果差异不显著。试验表明，微生物快速检测试纸条可以用于饲料原料中的微生物的检测。

微生物 快速检测试纸条 饲料原料

食品安全关系到全国人民“舌尖上的安全”，在动物性食品安全方面，吃上“放心肉”、“安全肉”成为迫切要求，而在保证动物性食品安全的一系列环节中饲料安全是其中一个重要组成部分[1]。在饲料生产过程中，对原料微生物的检测不可或缺。微生物可以使饲料发生腐败变质，降低营养价值，干扰动物机体的正常生理功能，严重者会污染畜产品，引起动物发病死亡，甚至导致人畜共患传染病的传播。为了降低微生物对饲料品质的影响，在我国饲料卫生标准中将微生物指标作为一项重要内容。生产中主要采用标准检测方法来检测饲料原料中的微生物，一般需要2～5 d才能完成，既费时又费力。为了方便、快捷的对饲料原料中的微生物做出检测，我们尝试使用微生物快速检测试纸条。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品

饲料原料样品于2016年10月21日采自昆明正大饲料有限公司原料库。

1.1.2 仪器与试剂

电子天平、超净工作台、恒温培养箱、微量移液枪、菌落计数器、三角瓶、试管、平皿；微生物快速检测试纸条购自广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司，其他均为国产分析纯试剂。

1.2 方法

1.2.1 饲料原料中细菌总数与沙门氏菌的快速检测

用电子天平称取各样品25 g，溶于225 ml灭菌生理盐水中混合均匀，再取1 ml混悬液进行10倍梯度稀释，分别制成10-1、10-2、10-3、10-4和10-5浓度的混悬液。将快速检测试纸条上层膜不干胶标签部分揭开，用无菌吸管吸取1 ml样品匀液，均匀滴加到各试纸条上，迅速贴好上层膜并水平晃动检测试纸条，使样品匀液均匀吸附，倒置于恒温培养箱内，36±1℃，培养24 h计算菌落数，每个样品设3个重复。

1.2.2 饲料原料中霉菌的快速检测

用电子天平称取各样品25 g，溶于225 ml灭菌蒸馏水中混合均匀，再取1 mL混悬液进行10倍梯度稀释，分别制成10-1、10-2、10-3和10-4浓度的混悬液。将快速检测试纸条上层膜揭开，用无菌吸管吸取1 ml样品匀液，均匀滴加到试纸条上，迅速贴好上层膜，使样品匀液均匀吸附，倒置于恒温培养箱内，29±1℃，培养48 h计算霉菌数，每个样品设3个重复。

1.2.3 饲料原料与饲料成品中微生物的标准检测

菌落总数的测定按GB/T 13093-2006进行，沙门氏菌的测定按GB/T 13091-2002进行，霉菌总数的测定按GB/T 13092-2006进行。

1.2.4 数据分析

挑选适宜菌落数的平板进行计数，计下各平板的菌落数后，求同一稀释度各平板菌落数的平均值，再根据稀释度求得各样品的菌落数。用SPSS软件分析菌落数的均值和标准差，并进行差异显著性分析。

2 结果与分析

2.1 饲料原料中细菌总数的检测结果

快速检测试纸条和标准方法检测饲料原料中细菌总数的结果见表1。根据《GB 13078-2001 饲料卫生标准》规定，饲料原料中的细菌总数不应超过2×106个/g。由表1中的检测数据可以看出，本次检测的饲料原料样品均符合国家标准，使用快速检测试纸条和使用标准方法检测的结果差异不显著（P＞0.05 ）。

表1 饲料原料中细菌总数检测结果

2.2 饲料原料中沙门氏菌的检测结果

快速检测试纸条和标准方法检测饲料原料中沙门氏菌的结果见表2。根据《GB 13078-2001 饲料卫生标准》规定，饲料原料中不得检出沙门氏菌。本次检测中，使用快速检测试纸条在豆粕和羽毛粉中检出沙门氏菌，而使用标准方法则没有检出，说明在沙门氏菌的检测方面，快速检测试纸具有更好的检测效果。

表2 饲料原料中沙门氏菌检测结果

2.3 饲料原料中霉菌总数的检测结果

快速检测试纸条和标准方法检测饲料原料中霉菌总数的结果见表3。根据《GB 13078-2001 饲料卫生标准》规定，豆粕中霉菌总数不应超过5×104个/g，乳清粉中霉菌总数不应超过1×103个/ g，鱼粉中霉菌总数不应超过3×103个/g，肉骨粉中霉菌总数不应超过2×104个/g。由表3中的检测数据可以看出，本次检测的饲料原料样品均符合国家标准，使用快速检测试纸条和使用标准方法检测的结果差异不显著（P＞0.05 ）。

表3 饲料原料中霉菌总数检测结果

3 讨论

饲料原料中含有丰富的营养物质，是微生物生长的天然培养基，一旦条件适合微生物就会大量繁殖，直接导致饲料中的营养物质分解，甚至会在饲料中产生具有强烈毒性和致癌性的毒素，因此，加强对饲料原料中微生物的控制对确保饲料安全具有重要作用[2]。饲料中含有的微生物种类繁多，主要包括细菌、霉菌、酵母菌等[3]，长期以来主要采用微生物标准检测方法检测饲料原料中的微生物，但该方法存在费时费力的问题，因此，近年来开发快速检测方法成了研究的热点。生物传感器法、基因芯片法、聚合酶链式反应法、生物阻抗法、快速检测仪法等多种检测方法被相继报道，但由于技术不成熟、对设备和技术要求高或价格昂贵等原因，均并未得到广泛应用[4]。微生物快速检测试纸条具有使用方便、检测速度快、检测准确度高和价格便宜等特点，在食品微生物的检测方面被广泛使用。

为了研究试纸条是否也适用于饲料原料中微生物的检测，我们将微生物快速检测试纸条的检测结果与标准检测方法检测的结果进行了对比。从对比的结果可以看出，微生物快速检测试纸条与标准检测方法检测的结果差异不显著，其中沙门氏菌的检测结果还要优于标准检测方法，也就是说微生物快速检测试纸条适用于饲料中微生物的快速检测。

[1] 魏淑英.饲料中微生物卫生指标现状的调查及控制[D].青岛农业大学，2009.

[2] 刘汉武.饲料安全与饲料微生物的检测[J]. 内蒙古科技与经济，2010，209（7）：68-70.

[3] 李亚莉，杨天龙，廖奇，等.浅谈微生物对饲料的影响[J].上海畜牧兽医通讯，2016，（2）：57-59.

[4] 刘小芳，王卫国.饲料中有害微生物快速检测技术新进展[J].粮食与饲料工业，2014，（1）：35-38.

富国文（1980-），男，辽宁西丰人，硕士研究生学历，云南农业大学动物科学技术学院，实验师，主要从事养猪生产方面研究工作。

赵桂英

云南省2015年工业发展专项资金中有关技术改造省级财政补贴项目