小鼠卵巢玻璃化冷冻对子代的初步影响及FSH的干预研究

于 佳，王海菲，杨梦怡，刘心蕊，李 雪，潘朋歌

（1.宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室、基础医学院生物技术系，宁夏 银川 750004；2.宁夏生殖与遗传重点实验室，宁夏 银川 750004）

女性配子发源地为卵巢，伴随着周期性卵泡的发育，雌、孕激素也进行周期性的分泌，成为女性健康的保护神。然而过去几十年里，随着肿瘤治疗和诊断水平不断得到提高，癌症女孩和青年女性的生存率也得到明显提高，但其中的化疗及放疗方法却对她们的生育能力起到了危害的作用。从而丧失卵泡功能，导致女性失去了生育能力，同时女性体内的雌激素水平显著降低，降低绝经后女性的生活质量。故此，在正式进行抗癌治疗过程中，需针对患者卵巢进行冻存处理，待患者病症得到有效控制后，再将其移植到患者体内，进而达到保障患者生育功能的目的。本研究室前期研究显示，在促卵泡素（follicle stimulating hormone，FSH）的干预下，可有效保障在玻璃化冻融卵巢条件下，卵泡的成活情况[1-2]。

1 材料与方法

1.1 实验动物及饲养条件

性成熟健康C57 BL/6J♀100只，体重25～30 g；♂60只，体重30～35 g，购自美国杰克逊实验室（证号：000664）。所有小鼠均自由进行摄食，且室内温度控制在20度左右，对应湿度控制在50%左右，并保障室内通风情况。

1.2 主要试剂与仪器

本次研究主要涉及为注射用重组人促卵泡刺激素以及浓度在90%以上的人血清白蛋白，研究过程中所使用荧光生物显微镜，由日本生产，型号为OLYMPUS，常规倒置荧光显微镜，型号为，CK40，Leica DME实体显微镜，液氮罐（美国MVE）。

1.3 试验方法

取非干预玻璃化冻存组（vitrification test group,VTG）简称新鲜移植组和玻璃化冻存FSH干预组（FSH-VG）简称玻璃化冻存组的出生子代进行试验。所有小鼠在出生后12小时，即断奶。随后结合小鼠生长情况，针对其生理发育、运动协调情况等展开统计。

1.4 行为测试方法

按文献[3-4]介绍的程序进行试验。

1.5 统计学方法

应用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析处理，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组小鼠出生时一般情况

观察可知，所有新生小鼠皮肤均表现为红色，且不存在有毛发，双眼没有睁开，双耳粘贴在皮肤上。两组进行比较均没有出现明显外观畸形。

2.2 两组仔鼠体重变化情况

结合对小鼠体重变化情况进行统计可知，在出生后2周时间后，小鼠体重增加速度明显加快。且组间对比可知，体重变化情况不存在有显著差异P＞0.05。

2.3 两组小鼠生理发育指标测试结果

结合统计可以发现，两组小鼠各方面生理指标均逐渐达标，且在达标时间上未存在有明显差异，统计学无明显差异（P＞0.05）。

2.4 两组小鼠神经反射和运动协调能力结果

比较后发现：两组小鼠神经反射和运动协调能力指标达标日期大致相当，统计学无明显差异（P＞0.05）。

3 讨 论

近20年来，医院采用新型化疗及放疗方案，有效提高恶性肿瘤的年轻女性及儿童的存活率，但对于细胞分裂活动较为频繁的卵巢组织来说，应用大剂量的化疗和放疗会造成无法修复的损伤，使得女性患者卵巢出现早衰的现象，严重情况下甚至丧失生殖能力。而有研究表明对于女性大量卵泡，卵巢的玻璃化冷冻技术可以做到一次性地保存，待卵巢组织得到有效恢复后，再借由体外培养等方式，进而达到辅助生育的效果。

本研究结果显示，FSH进行干预的玻璃化冻存组和新鲜移植组相比不具有明显差别，提示FSH可以作为干预因素的添加，对于玻璃化冷冻过程起到有利，并且不会对出生后子代小鼠的生理发育、成熟情况和神经发育造成影响，没有出现延迟发育。然而，冻融卵巢的遗传安全性除了与新生子代生理发育的一般情况密切相关，还与子代的表观遗传修饰异常以及对子代的长期观察具有一定的关联性。因此，我们今后的研究方向应该以冻融卵巢移植子代表现遗传信息的改变为主。

[1] 吴 昊,蔡玉芳,张 红,等.FSH干预对小鼠玻璃化冻融移植卵巢血流重建的影响.宁夏医科大学学报[J],2014,36(5)∶478-505.

[2] 张 红,马文叶,杨延周,等.小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH干预对VEGF及αvβ3表达的影响.生殖与避孕[J],2015,35(4)∶230-236.