牛子宫内膜炎细菌的分离、鉴定与治疗

吴金鹏,范建新

牛子宫内膜炎细菌的分离、鉴定与治疗

吴金鹏1,范建新2

(1.黑龙江省巴彦县黑山镇畜牧发展服务中心151800；2. 黑龙江省巴彦县松花江乡兽牧发展服务中心151800)

母牛子宫内膜炎为子宫黏膜急性发炎，如不及时治疗，炎症易于扩散，引起子宫肌炎、子宫浆膜炎或子宫周围炎，并常转化为慢性炎症，导致母牛不孕。子宫内膜炎是造成母牛不孕的主要原因之一，严重影响着母牛的繁殖，而且增加饲料消耗和治疗费，会造成巨大的经济损失。

产房卫生条件差，临产母牛的外阴、尾根部污染粪便而未彻底洗净消毒；助产或剥离胎衣时，术者的手臂、器械消毒不严，胎衣不下腐败分解，恶露停滞等，均可引起产后子宫内膜感染。产后早期能引起子宫炎的细菌有：化脓性放线菌、坏死梭杆菌、拟杆菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、变形杆菌、假单胞菌、梭状芽孢杆菌。

1 材料与方法

1.1 材料

本次实验选用的为不同地区养牛场患有子宫内膜炎的奶牛105头作为研究对象。

1.2 方法

1.2.1 采集病样

选取临床确诊为患有子宫内膜炎的奶牛，对其阴户进行清洗消毒，并使用一次性输精管一支，用棉球沾湿75%的酒精进行擦拭消毒，然后通过把握直肠法将输精管向牛子宫内插入。而在输精管另一侧，将输精管直接接上，并数次在牛子宫内抽吸，这样输精管内就能吸入少量的子宫分泌物。此时将输精管抽出，其外部的粘附物使用75%的酒精棉球擦拭干净，然后剪下含有牛子宫分泌物的一段，将其放入无菌试管中，实施密封备用。在这个过程中，要尽可能进行确保无菌操作，以防感染。

1.2.2 细菌的分离、鉴定与治疗

首先，在牛鲜血平皿或者绵羊鲜血平皿上，对子宫分泌物进行接种，培养18～24 h。其次，在长出细菌的培养皿中，挑选出一些优势菌落，接着对这些菌落进行分离纯化培养。在这个过程中，可以接种一些马丁肉汤，以促进纯化较难的菌种，20 min剧烈摇动之后，再于平皿中进行接种培养，直至将单个菌落分离出来。三是细菌纯化结束之后，进行革兰氏染色，同时按照菌体大小、菌落形态以及抗酸染色等，初步对细菌进行分类，然后在鉴别培养基中，如麦康凯琼脂平皿、却甫曼琼脂平皿、爱德华琼脂平皿中，分别进行改良和培养。最后是在此前提下，进行一系列的生化实验，如OF实验、氧化酶、接触酶等，以便对各科之间的细菌、非发酵型细菌以及发酵型细菌进行合理的分类。也可按照染色特点、细菌形等进行分类，而鉴定则采用生化鉴定编码，这样就能根据各科/属真菌/细菌生化鉴定编码等，将鉴定结果查找出来。

1.2.3 药物敏感试验

从杭州天和微生物试剂有限公司购买MH琼脂培养基与药敏纸片。质控菌从中国兽医药品监察所购买，主要为ATCC25923金黄葡萄球菌、ATCC27853铜绿假单胞菌、ATCC25922大肠杆菌。按相关临床要求以及药敏试验选取规则，所选择的抗菌药片为：头孢呋辛（呋）、恩诺沙星（恩）、新生霉素（生）、卡那霉素（卡）、环丙沙星（环）、先锋V（V）、氧氟沙星（嗪）、庆大霉素（庆）、链霉素（链）、四环素（四）、菌必治（菌）、复达欣（欣）、青霉素G（青）、氨苄青霉素（氨）、林可霉素（林）、氯霉素（氯）、红霉素（红）、多粘菌素（多）。

实验通过药敏纸片供试片琼脂扩散法（K-B法）完成。

2 结果

2.1 鉴定结果

本次实验通过分离鉴定105头牛的子宫内膜炎细菌，其中，只有两头牛的子宫分泌物中，没有病原菌分离出来，其余102头牛子宫内的分泌物中，均有病原菌分离出来，且分离出的菌株有200个，病原菌35种。其中，肠杆菌科细菌的分离率为43.5%，相对较高，而非发酵细菌的分离率为17.5%，弧菌科细菌的分离率为23%。另外，还有真菌、链球菌以及葡萄球菌等分离出来，占到了分离菌种总数的16%左右。通过分离牛子宫内膜炎细菌的实验可以看出，目前牛患有的子宫内膜炎中，存在两种感染形式，即单一感染和混合感染。

2.2 药敏试验结果

通过药敏试验结果得出，非发酵型细菌、弧菌科细菌以及肠杆菌科细菌等，对于青霉素以及氨苄青霉素等产生的耐药性相对较强；而对于链霉素、四环素、先锋V、卡那霉素、头孢呋辛、氯霉素、新霉素以及多粘霉素等，也出现了程度不同的耐药菌株，但是对庆大霉素、恩诺沙星等，出现的反应则较为敏感。另外，链球菌以及葡萄球菌等，对青霉素产生的耐药性非常强，而对于新生霉素、新霉素、链霉素以及卡那霉素等，产生的耐药性的程度具有较大的不同。

3 讨论

本次实验中，对于真菌、弧形菌、变形杆菌、不动杆菌、假单胞菌、链球菌、葡萄球菌以及肠杆菌等的分离鉴定，与引起牛子宫内膜炎的病原菌，例如变形杆菌、放线菌、金黄色葡萄球菌、克雷伯氏菌、沙门氏菌、大海沧杆菌、摩氏杆菌、链球菌、假单胞杆菌等大体一致，但是又存在一定的差异，而这可能与牛所处的环境以及卫生条件等有关。由于时间的限制，本次实验没有分离培养厌氧菌，而从患有子宫内膜炎的牛子宫分泌物中分离出了多种病原菌，这些病原菌并不能直接作为导致牛子宫内膜炎的致病因子。对于是何种或者哪几种病原菌导致牛患有子宫内膜炎，则还需进行深入的研究。

S858.23

B

1005-2739（2017）02-0041-02

2016-12-19

吴金鹏（1972-），男，本科，兽医师，主要从事畜牧兽医工作。