Th17细胞在宫颈癌患者外周血中的比例及临床意义

张园，孙榕，冯阳春，黄艳春

(1 新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐 830011；2 新疆博州人民医院)

Th17细胞在宫颈癌患者外周血中的比例及临床意义

张园1，孙榕2，冯阳春1，黄艳春1

(1 新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐 830011；2 新疆博州人民医院)

目的 探讨外周血Th17细胞数量与宫颈癌发生、发展的关系。方法 选取宫颈癌初治患者50例(宫颈癌组)，宫颈上皮内瘤变(CIN)患者25例(CIN组)，成年体检健康女性25例(对照组)。采用流式细胞术检测各组外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例；分析Th17细胞比例与宫颈癌患者临床病理参数的关系。结果 宫颈癌组、CIN组和对照组外周血Th17细胞比例分别为(2.02±0.46)%、(1.36±0.31)%、(0.58±0.19)%，组间两两比较P均<0.01；外周血Th17细胞比例与宫颈癌患者国际妇产联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、脉管浸润均呈正相关(r分别为0.74、0.43、0.54，P均<0.05)，与组织分化程度无关(P>0.05)。结论 宫颈癌患者外周血Th17细胞数量增多；Th17细胞增多可促进宫颈癌的发生、发展。

宫颈癌；Th17细胞；外周血；流式细胞术

宫颈癌的发病率在女性生殖系统恶性肿瘤中居首位，其发病率和病死率呈逐年升高的趋势[1,2]。Th17细胞是近年来新发现的一类辅助性T细胞，因能够特异性地分泌细胞因子IL-17而得名。IL-17具有强烈的促炎症作用，能够招募中性粒细胞并使其活化，其与肿瘤发生、发展的关系是近些年来肿瘤免疫领域的热点问题[3]。由于肿瘤类型和实验动物模型的不同，目前关于Th17细胞在肿瘤发生、发展中的作用的观点尚不统一。本研究探讨Th17细胞在宫颈癌发生、发展中的作用和意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年1～12月在新疆医科大学附属肿瘤医院妇科住院的宫颈癌初治患者50例作为宫颈癌组，年龄41～69(54.23±6.99)岁；鳞癌38例，腺癌12例；国际妇产联盟(FIGO)分期Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期15例，Ⅳ期10例。另选取同期住院的宫颈上皮内瘤变(CIN)患者25例(CIN组)，年龄34～67(51.54±5.78)岁；其中CIN Ⅰ级8例，CIN Ⅱ级10例，CIN Ⅲ级7例。选取成年体检健康女性25例作为对照组，年龄25～61(48.59±6.11)岁。三组年龄具有可比性。所有研究对象无自身免疫性疾病史，无传染病史以及其他恶性肿瘤。

1.2 外周血Th17细胞比例检测 采用流式细胞术。采集研究对象外周静脉血3 mL，并肝素抗凝。在加入200 μL肝素钠抗凝全血的无菌试管中，加入等量RPMI 1640培养基(Gibco公司)、含小牛血清(杭州四季青生物公司)混匀，加入2 μL Leukocyte Activation Cocktail(美国BD公司)，37 ℃、5% CO2刺激培养4～6 h(每2 h混匀一次)，加入10 μL CD4-PC5(美国Beckman coulter公司)及同型对照进行细胞表面分子染色，加入溶血素500 μL混匀室温避光10 min，PBS洗涤弃上清，经固定和破膜后(固定破膜剂试剂盒为ebioscience公司)，加入IL-17-PC7抗体(美国BioLegend产品)20 μL及同型对照进行胞内抗体染色，室温孵育30 min，加入500 μL PBS重悬细胞，上机检测(FC500流式细胞仪，美国Beckman coulter公司)。CD4+IL-17+细胞代表Th17细胞。分析外周血Th17细胞比例与宫颈癌患者临床病理参数的关系。

2 结果

2.1 各组外周血Th17细胞比例比较 宫颈癌组、CIN组和对照组外周血中Th17细胞比例分别为(2.02±0.46)%、(1.36±0.31)%、(0.58±0.19)%，组间两两比较P均<0.01。见插页Ⅱ图6。

2.2 外周血Th17细胞比例与宫颈癌患者临床病理参数的关系 宫颈癌患者外周血Th17细胞水平与患者FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润有关(P均<0.05)，与组织分化程度无关(P>0.05)。Th17细胞比例与FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润均呈正相关(r分别为0.74、0.43和0.54，P均<0.05)。详见表1。

表1 外周血Th17细胞比例与宫颈癌患者临床病理参数的关系

3 讨论

高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是WHO公认的宫颈癌致病因素之一[4]。多数情况下HPV感染可通过体液和细胞免疫应答被清除，当机体免疫力失调，不能启动有效的免疫应答时则无法彻底清除HPV感染，导致宫颈癌的发生[5]，故机体免疫功能的状态与宫颈癌的发生密切相关。Th17细胞是2005年发现的能特异分泌IL-17的新型CD4+T细胞亚群[6]，近年来成为肿瘤免疫领域研究的热点。

IL-17细胞因子包括六个同源性家族成员[7]，按其发现的顺序依次命名为IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E(亦称IL-25)和IL-17F，目前仅IL-17A、IL-25和IL-17F的促炎性因子作用得以确认，IL-17A与IL-17F在功能和数量上占主导地位，IL-17A是目前研究重点。本研究采用的流式细胞术抗体亦为抗IL-17A，能反映IL-17细胞因子的表达水平。Th17细胞被认为与肿瘤的发生、发展有着密切关系。Kryczek等[8]研究显示，卵巢癌患者外周血及癌组织中Th17细胞表达明显升高，并且通过IL-17和IFN-γ之间的协同作用，Th17细胞可刺激CXCL9和CXCL10生产招募效应T细胞到肿瘤微环境中。有研究发现，从黑色素瘤[9]、乳腺癌[10]和结肠癌[11]的肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)中发现Th17细胞升高，提示CD4+Th17细胞增多可能是肿瘤患者的一般特征[12]。鼻咽癌患者外周血及肿瘤组织中Th17细胞明显多于正常鼻咽组织和健康对照者外周血，说明Th17细胞在鼻咽癌肿瘤微环境中的高表达可能与巨噬细胞抑制因子有密切关系[13]。

本研究CIN与宫颈癌患者外周血中Th17细胞数量均明显高于对照组，提示Th17细胞在CIN及宫颈癌变的相关免疫机制中起到一定作用，且可能与宫颈癌的发生、发展密切相关。Kimura等[14]研究发现，许多肿瘤细胞通过葡萄糖代谢产生大量的乳酸，激活IL-23/IL-17炎性通路，诱发炎症，促进肿瘤的发生、发展。本研究发现，宫颈癌患者外周血Th17细胞数量随临床分期及分化程度的加重而升高，提示Th17细胞的在宫颈癌发生、发展过程中表现为促肿瘤生长的作用，其数量在一定程度上反映肿瘤浸润与转移潜能，可能与宫颈癌生物学行为恶化及不良预后有关。有研究发现[15]，肿瘤组织中Thl7细胞增多能增加组织微血管密度，促进肿瘤血管上皮细胞生成。这可能是其促进肿瘤生长及转移的重要机制之一。本研究发现，有淋巴结转移、脉管浸润宫颈癌患者Th17表达水平显著高于无淋巴结转移及脉管浸润者，提示Th17细胞数量与淋巴结转移、脉管浸润密切相关，Th17表达高者更易发生淋巴结转移和(或)脉管浸润；对于外周血Th17细胞增多的宫颈癌患者术前应高度警惕淋巴结转移与脉管浸润可能，需更彻底的手术治疗。

综上所述，宫颈癌患者外周血Th17细胞数量与疾病的发生、发展有密切关系，可作为宫颈癌的临床分期和判断患者机体免疫状态的指标，对预测肿瘤的转移潜能、判断疾病预后具有一定意义。

[1] Siegel R, Miller K, Jemal A.Cancer statistics[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(1):7-30.

[2] Chen W, Zheng R, Baade P, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2016,66(2):115-132.

[3] Guéry L, Hugues S. Th17 Cell Plasticity and Functions in Cancer Immunity[J]. Biomed Res Int, 2015,2015:314620.

[4] Molijn A, Jenkins D, Chen W, et al.The complex relationship between human papillomavirus and cervical adenocarcinoma[J]. Int J Cancer, 2016,138(2):409-416.

[5] Gutierrez-Xicotencatl L, Salazar-Pina DA, Pedroza-Saavedra A, et al. Humoral Immune Response Against Human Papillomavirus as Source of Biomarkers for the Prediction and Detection of Cervical Cancer[J]. Viral Immunol, 2016,29(2):83-94.

[6] Harrington LE, Hatton RD, Mangan PR, et al. Interleukin 17-producing CD4+effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages[J]. Nat Immunol, 2005,6(11):1123-1132.

[7] Han Q, Das S, Hirano M, et al. Characterization of Lamprey IL-17 Family Members and Their Receptors[J]. J Immunol, 2015,195(11):5440-5451.

[8] Kryczek I, Banerjee M, Cheng P, et al. Phenotype, distribution, generation, and functional and clinical relevance of Th17 cells in the human tumor environments[J]. Blood, 2009,114(6):1141-1149.

[9] Diller ML, Kudchadkar RR, Delman KA, et al. Complete response to high-dose IL-2 and enhanced IFNgamma+Th17 : TREG ratio in a melanoma patient, 2016[J]. Melanoma Res, 2016,26(5):535-539.

[10] Benevides L, Cardoso C, Tiezzi D, et al. Enrichment of regulatory T cells in invasive breast tumor correlates with the upregulation of IL-17A expression and invasiveness of the tumor[J].Eur J Immuno, 2013,43(6):1518-1528.

[11] Karczewski J, Mazur M, Rychlewska-Hanczewska A, et al. Role of Th17 lymphocytes in pathogenesis of colorectal cancer [J]. Postepy Hig Med Dosw (Online), 2014,22(68):42-47.

[12] Su X, Ye J, Hsueh EC, et al. Tumor microenvironments direct the recruitment and expansion of human Th17 cells[J]. J Immunol, 2010,184(3):1630-1641.

[13] Li J, Mo HY, Xiong G, et al. Tumor microenvironment macrophage inhibitory factor directs the accumulation of interleukin-17-producing tumor-infiltrating lymphocytes and predicts favorable survival in nasopharyngeal carcinoma patients[J]. J Biol Chem, 2012,287(42):35484-35495.

[14] Kimura Y, Nagai N, Tsunekawa N, et al. IL-17A-producing CD30(+) Vdelta1 T cells drive inflammation-induced cancer progression[J]. Cancer Sci, 2016,107(9):1206-1214.

[15] Hou F, Li Z, Ma D, et al. Distribution of Th17 cells and Foxp3-expressing T cells in tumor-infiltrating lymphocytes in patients with uterine cervical cancer[J]. Clin Chim Acta, 2012,413(23-24):1848-1854.

新疆医科大学附属肿瘤医院科研启动基金项目(肿2014-04)。

黄艳春(E-mail： huangyanchun0619@sohu.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.04.013

R711.74

B

1002-266X(2017)04-0043-03

2016-05-24)