脑血疏口服液对脑出血大鼠血肿体积及神经功能的影响

刘志华 吴 鸿

(河南省中医院脑病科，河南 郑州 450002)

脑血疏口服液对脑出血大鼠血肿体积及神经功能的影响

刘志华 吴 鸿1

(河南省中医院脑病科，河南 郑州 450002)

目的 探讨脑血疏口服液对脑出血(ICH)模型大鼠血肿体积及神经功能的影响。方法 77只雄性SD大鼠，随机分为ICH对照组(n=35)、ICH实验组(n=35)及假手术组(n=7)，ICH对照组和实验组使用Ⅳ型胶原酶造模，术后12 h给予ICH实验组脑血疏口服液灌胃1 ml/kg，其他两组给予同等剂量的生理盐水灌胃。治疗后将ICH对照组和实验组分为1、2、4、7、14 d 5个亚组，每组7只，采用Longa法对两组不同时间的神经功能进行评估，并测量脑血肿体积的变化。结果 治疗后7 d和14 d，ICH实验组大鼠Longa评分显著低于ICH对照组(均P<0.05)，治疗后4～14 d ICH实验组大鼠血肿体积显著小于ICH对照组(均P<0.05)。结论 脑血疏口服液治疗ICH大鼠疗效确切，能显著促进血肿的吸收，恢复大鼠神经功能。

脑血疏口服液；脑出血

脑出血(ICH)是一种原发性非外伤性脑实质内出血的急性脑血管病，起病急骤、发展迅速、致死和致残率高，发病30 d内的死亡率高达约46%，存活的患者也大多存在不同程度的神经功能损伤症状，其中超过80%的患者在发病6个月内生活不能自理，超过50%的患者终生残疾，生存质量受到极大影响，也给家庭造成了沉重的负担〔1〕。迄今为止，ICH的发病机制尚未完全阐明，其病理改变既包括了血肿对周围组织的机械压迫和血肿的占位效应对脑组织造成的直接破坏，也包括了血肿的继发性损伤〔2〕。因为出血迅速，机械压迫和占位效应已经产生损伤，因此对ICH的治疗不能解决血肿对脑组织的直接损伤作用，但是普遍认为对于ICH的继发性神经损伤的治疗能取得较好疗效〔3〕。目前，ICH的治疗主要依靠甘露醇等脱水剂，缺乏神经保护药物，疗效不甚理想。脑血疏口服液是根据中医名著《医林改错》和《金匮要略》中的方剂调整而成〔4〕，具有活血、化瘀的作用。本研究应用脑血疏口服液治疗ICH模型大鼠，观察其对神经功能和血肿体积影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 SD雄性大鼠77只，体重200～250 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司〔合格证号:SCXK(沪)2009-0005,清洁级〕。动物饲喂在实验室(生物安全防护水平为BSL-1)，实验室温度恒定(24.2±1.1)℃，相对湿度50%～70%，维持12 h光照节律，自由摄食、饮水。所有大鼠依据随机数字表法分为ICH对照组(n=35)、ICH实验组(n=35)及假手术组(n=7)。

1.2 实验试剂和仪器 Ⅳ型胶原酶购自美国Sigma公司，脑血疏口服液购自山东沃华医药科技股份有限公司(国药准字Z20070059)，10%水合氯醛购自成都科龙化工试剂厂，生理盐水和4%多聚甲醛购自美国Hyclone公司，1 μl微量注射器购自上海医用激光仪器厂，大鼠脑立体定位仪购自深圳瑞沃德生命科技有限公司，高速冷冻切片机购自沈阳龙首电子仪器有限公司，倒置显微镜及电子成像系统购自日本Olympus公司。

1.3 造模方法 所有大鼠适应性喂养7 d后，禁食禁水8 h。10%水合氯醛360 mg/kg腹腔注射，待大鼠进入麻醉状态后，头部备皮，俯卧位将大鼠头部固定于立体定位仪上，沿正中矢状缝纵行切开头部皮肤，钝性分离皮下组织，用过氧化氢溶液棉球轻轻擦掉骨膜，充分暴露冠状缝和前囟，在冠状缝前1 mm中线右侧3 mm处用牙科钻钻开颅骨。ICH组处理方法：将预先润洗过的微量注射器吸取Ⅳ型胶原酶2 μl缓慢匀速注射进脑组织尾状核内，注射时间约为3 min，留针15 min，缓慢抽出注射器。假手术组处理方法：进针后不注射，留针15 min后抽出注射器。术后所有大鼠封闭颅骨缺口，缝合头皮，并给予庆大霉素0.3 ml肌注，预防感染，并将大鼠送回笼中继续饲养。

1.4 治疗方法 术后12 h，ICH实验组给予脑血疏口服液灌胃，1 ml/kg，2次/d；ICH对照组及假手术组给予同等剂量生理盐水灌胃，2次/d。

1.5 观察指标 ICH实验组及对照组大鼠分别于治疗后1、2、4、7、14 d进行神经功能评估，然后断头处死，测量血肿体积，每次分组处理，每组7只。

1.5.1 神经功能评价 术后12 h、治疗1、2、4、7、14 d后，采用Longa法〔5〕对大鼠进行神经功能评估：无神经病学症状，0分；左前肢伸展不全，1分；行走时左侧旋转，2分；行走时左侧跌倒，3分；行走不能，4分。术后12 h评分≥1分说明ICH模型制备成功，评分<1的大鼠则剔除，按分组原则随机抽样补齐动物后重新制备模型。

1.5.2 血肿体积测量 将处死后的大鼠取出全脑，生理盐水冲洗后置于4%多聚甲醛溶液中固定24 h，固定后将大鼠脑组织固定于高速冷冻切片机上，以注射器进针通道为中心行冠状面连续切片，层厚0.5 mm，切片用石蜡包埋、苏木素-伊红(HE)染色，在光学显微镜下观察并照相，应用图像分析系统计算血肿体积，血肿体积=切片厚度(mm)×切片出血灶面积(mm2)×切片数量〔3〕。

1.6 统计学方法 应用SPSS17.0软件，计量资料组间比较采用t检验。

2 结 果

2.1 神经功能评分 术后12 h ICH组大鼠出现不同程度的左侧肢体功能障碍，且Longa评分≥1分，而假手术组大鼠则没有肢体活动异常，提示造模成功。治疗后1～14 d ICH实验组和对照组的Longa评分均呈现逐渐下降的趋势，且治疗后1～4 d，ICH实验组和对照组大鼠Longa评分未见统计学差异(P>0.05)，治疗后7 d和14 d ICH实验组大鼠Longa评分显著低于ICH对照组(均P<0.05)。见表1。

2.2 血肿体积变化 取大鼠脑组织时，ICH对照组和实验组大鼠均可在右侧尾状核处观察到不同程度的血肿，并伴随血肿周围组织肿胀和中线位移等表现。血肿体积随饲喂时间增加逐渐减小，治疗后1～2 d两组大鼠血肿体积无统学差异(P>0.05)，治疗后4～14 d ICH实验组大鼠血肿体积显著小于ICH对照组(均P<0.05)。见表1。

组别Longa评分(分)1d2d4d7d14d脑血肿体积(mm3)1d2d4d7d14dICH对照组3.28±0.512.85±0.712.57±0.782.28±0.631.42±0.7154.83±2.0651.35±2.3848.62±3.3144.61±3.5933.57±4.16ICH实验组3.14±0.452.71±0.642.14±0.611.51±0.520.71±0.4453.65±2.2749.36±3.8643.75±3.6836.17±3.8821.73±3.74t值0.5450.3881.1492.4942.2491.0181.1612.6034.2245.600P值0.5960.7050.2730.0280.0440.3290.2680.0230.0010.000

3 讨 论

ICH的病因主要有高血压、动脉硬化等，主要发生在40岁以上人群中，其中50岁以上人群是高发人群；但近年来研究发现ICH发病呈现年轻化的趋势〔6〕。目前的治疗方法主要有药物治疗、手术治疗和辅助治疗，其中手术治疗虽能及时清除病灶，但是并不能逆转已经受损的神经功能，并且手术造成的出血也可能损伤患者其他脑组织。因此，目前缺乏循证医学的明确证据，手术治疗方法仍存在争议；辅助治疗包括降血压、降颅内压、维持水盐平衡、调节体温等，对血肿的消除没有直接作用，仅能保护神经功能不受进一步损伤〔7〕。

中医治疗讲究辨证施治，对中风的治疗历史悠久，有针灸和中药内服外敷等，传统中医中没有将缺血性中风和出血性中风进行有效区分，二者虽然症状相同，却各具特点，因此以往采取中药治疗并未获得良好疗效〔8〕。脑血疏口服液由《医林改错》中的补阳还五汤加上《金匮要略》中的大黄蟅虫丸调整而来，主要成分为黄芪、水蛭、牡丹皮、石菖蒲、大黄、牛膝、川芎等〔4〕。本研究将其应用于Ⅳ型胶原酶致ICH大鼠治疗，结果显示脑血疏口服液治疗ICH大鼠疗效显著，有助于血肿吸收，促进神经功能恢复。现代医学研究表明ICH后继发性的脑水肿引起的占位效应是影响患者预后的重要危险因素，早期由于血凝块收缩，血液中的液体成分外渗导致水肿发生，随后由于出血导致的凝血酶活化，促进细胞毒性水肿形成，并影响血脑屏障功能，进一步导致血管源性水肿〔9〕，凝血酶的活化在这一过程中发挥了重要作用。现有研究表明黄芪提取物黄芪苷对于凝血酶激活途径中的凝血酶受体基因的表达具有显著的抑制作用，可以从源头上阻断这一病理改变的进展，减轻脑出血后继发性水肿造成的损伤〔10〕。此外，水蛭素也具有特异性凝血酶抑制剂的功能，与黄芪苷发挥协同作用，有效控制了继发性水肿对脑神经功能造成的损伤〔11〕。脑血疏口服液中的其余几位药材还具有益气、活血、化瘀的功能，其中大黄、石菖蒲组成的中药灌肠应用于治疗高血压性ICH患者也取得了良好的疗效〔12〕，提示本方剂组方合理，疗效确切。

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11 王新高,赵性泉.脑血疏口服液治疗急性脑出血的配对研究〔J〕.中西医结合心脑血管病杂志,2015;13(7):937-8.

12 罗 卫,刘晓燕,胡珍渊,等.中西医结合治疗高血压性脑出血术后认知功能障碍临床观察〔J〕.现代中西医结合杂志,2013;22(16):1749-50.

〔2015-11-19修回〕

(编辑 袁左鸣)

刘志华(1966-)，男，主任医师，主要从事神经内科方面的研究。

R743

A

1005-9202(2017)01-0047-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.01.021

1 河南省中医院中心试验室