客家黄酒延缓皮肤衰老作用的研究

罗铝铿，邹浩元，姚海荣，邓秋华

（嘉应学院医学院，广东梅州514015）

客家黄酒延缓皮肤衰老作用的研究

罗铝铿，邹浩元，姚海荣，邓秋华

（嘉应学院医学院，广东梅州514015）

研究客家黄酒对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠皮肤衰老作用的影响。方法：采用腹腔注射D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型，分别灌胃蒸馏水和不同浓度的黄酒，每天1次，连续灌胃45 d，测定小鼠皮肤中的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性，皮肤含水量，皮肤羟脯氨酸（hydroxyproline，hyp）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量。结果表明，客家黄酒能显著提升衰老小鼠皮肤含水量、羟脯氨酸含量并降低MDA含量。客家黄酒具有延缓皮肤衰老的作用。

客家黄酒；皮肤；羟脯氨酸；含水量

黄酒是我国特有的酒类品种，具有独特的保健功能，目前研究较多的是绍兴黄酒。有报道发现绍兴黄酒具有较强的抗氧化能力[1]，含有丰富的多酚、黄酮、多糖及小分子肽类，能够拮抗注射D-半乳糖引起的衰老小鼠体内抗氧化能力的降低，延缓衰老[2]，此外黄酒中还含有丰富的γ-氨基丁酸，对帕金森症、老年痴呆症等老年退行性疾病等症状具有显著的改善效果[3]。

客家黄酒，又名月子酒，是我省客家地区传统食品，历史悠久，深受人们喜爱。客家黄酒以红曲、糯米为原料经过发酵、火炙、陈酿等步骤制成，属甜型半甜型黄酒，具有独特的风味和保健功能[4-5]。客家黄酒与绍兴黄酒在成分上既有相似又有不同之处。前期研究发现，客家黄酒中多酚、黄酮、酚酸含量均高于绍兴黄酒，不同品牌客家黄酒对DPPH自由基、超氧自由基、羟自由基、ABTS自由基均具有清除能力，显著优于绍兴黄酒[6]。民间认为客家黄酒具有滋补的功效，日常服用则可美容养颜，使肌肤红润光泽，尤其适合于女性饮用，对产后及月经期后的妇女效果尤佳，但现阶段这一说法仍未有任何实验依据支持。本研究拟建立小鼠D-半乳糖急性衰老模型，研究饮用客家黄酒对皮肤衰老的影响，为客家黄酒的科学饮用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

实验动物：18～20 g雌性昆明种小鼠48只，广东省实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2013-0002。

样品与试剂：客家黄酒：14%vol，以中国居民膳食指南中推荐每人每日最大酒精摄入量25 g/50 kg为1倍剂量折算相应给药量，制取相应倍数的客家黄酒浓缩液。

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD），试剂盒（批号：20160402）；谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px），试剂盒（批号：20160402）；羟脯氨酸（hydroxyproline，hyp），试剂盒（批号：20160402）；丙二醛（malondialdehyde，MDA），试剂盒（批号：20160402）。以上试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

仪器设备：721型紫外可见光分光光度计，北京普析通用仪器有限公司。

1.2 实验方法

小鼠随机分为4组：空白对照组、模型对照组、客家黄酒低剂量组、客家黄酒高剂量组。模型对照组及给药组按500 mg/kg腹腔注射D-半乳糖，空白对照组注射等体积蒸馏水，连续注射45 d。同时客家黄酒低剂量组灌胃2.5倍客家黄酒，高剂量组灌胃5倍客家黄酒，模型对照组和空白对照组灌胃等体积蒸馏水，连续灌胃45 d。

末次给药后禁食12 h，处死小鼠，取颈部皮肤0.2 g，按1∶9加入生理盐水，冰上匀浆，3000 r/min离心10 min，取上清液待用。试剂盒法测定皮肤匀浆液中的SOD、GSH-Px活性。取颈部皮肤适量，试剂盒法测定皮肤中Hyp、MDA含量，烘干法测定皮肤含水量。

所有数据采用SPSS 22.0进行分析比较。表中参数用X±s表示，差异显著水平为P＜0.05，差异极显著水平为P＜0.01。

2 结果与分析

2.1 客家黄酒对皮肤含水量的影响

客家黄酒对皮肤含水量和Hyp含量的影响见表1。由表1可知，和空白对照组相比，模型对照组含水量显著下降。和模型对照组相比，客家黄酒低剂量组、高剂量组含水量均呈上升趋势，其中高剂量组极其显著上升（p＜0.01）。和空白对照组相比，模型对照组Hyp含量显著下降。和模型对照组相比，客家黄酒不同剂量组Hyp含量均有上升趋势，高剂量组Hyp含量显著上升。

2.2 客家黄酒对皮肤SOD和GSH-Px活性的影响

客家黄酒对皮肤SOD和GSH-Px的影响见表2。从表2可知，和空白对照组相比，模型对照组SOD活性呈上升趋势。和模型对照组相比，客家黄酒给药组各组均有下降趋势，其中高剂量组显著下降（p＜0.05），高、低剂量组呈量效关系。和空白对照相比，模型对照组GSH-Px显著上升（p＜0.05）。和模型对照组相比，客家黄酒给药组各组GSH-Px均显著下降(p＜0.05)，客家黄酒高、低剂量组呈量效关系。

2.3 客家黄酒对皮肤MDA含量的影响

客家黄酒对皮肤MDA的影响见表3。从表3可知，和空白对照组相比，模型对照组MDA含量上升极其显著。和模型对照组相比，客家黄酒给药低剂量组呈下降趋势，高剂量组和模型对照组相比显著下降（p＜0.05），高、低剂量组呈量效关系。

3 讨论

D-半乳糖在机体内代谢生成醛糖和过氧化氢，过量可损伤机体产生衰老现象[7]。和自然衰老模型相比，D-半乳糖急性衰老模型造模时间短，皮肤变化指标与自然衰老模型相似度极高，是目前美容功效评价经典的动物模型[8]。皮肤含水量和羟脯氨酸含量是目前常用的皮肤衰老检测指标。

皮肤水分流失会导致皮肤干燥、萎蔫，缺乏弹性，出现皱纹[9]，表现为皮肤老化，因此皮肤衰老与含水量密切相关[10]。本研究中，模型对照组相比空白对照组含水量显著下降，表明造模成功。和模型对照组相比，给药组均有不同程度的上升，其中客家黄酒高剂量组上升极其显著，表明饮用客家黄酒具有一定的保水功效。

年龄增长导致的胶原蛋白流失是皮肤松弛的主要原因。羟脯氨酸是胶原蛋白特有的氨基酸之一，约占胶原蛋白的13%，随着年龄的增高游离Hyp含量下降[11]。通过测定皮肤和血清中Hyp含量变化常作为动物衰老的生化指标之一[12]。和空白对照组相比，模型对照组Hyp含量显著下降。和模型对照组相比，给药组均有不同程度的上升，其中客家黄酒高剂量组含量上升极其显著（p＜0.01），表明客家黄酒具有抑制衰老引起的Hyp含量下降的作用。

机体内有不同的抗氧化保护系统，用以清除体内的自由基[13]，最主要的有：清除自由基的酶类，如SOD、GSH-Px等，和主要来源于膳食的外源性抗氧化剂[14-15]。从实验结果来看，m模型对照组MDA显著上升，而客家黄酒组MDA含量显著下降，表明客家黄酒具有清除皮肤内自由基的作用。模型对照组SOD、GSH-Px活性相比空白对照组上升，其中GSH-Px活性上升具有显著性（p＜0.05），而和模型对照组相比，给药组SOD、GSH-Px活性均显著下降。这可能是由于注射D-半乳糖后小鼠体内自由基增多，为清除过量的自由基，模型对照组小鼠体内产生了氧化应激作用，故SOD、GSH-Px较空白对照组上升。而客家黄酒中含有抗氧化活性物质，属于来源于膳食的外源性抗氧化剂，起到了一定的清除自由基的作用，减轻了机体清除自由基的压力，故SOD、GSH-Px活性较模型对照组低,和空白对照组无差异。这一实验结果表明，客家黄酒中既含有抗氧化活性物质又能升高抗氧化酶类的活性，在不同情况下其作用不同。

综上所述，客家黄酒具有清除皮肤自由基，升高雌激素水平，延缓皮肤衰老的作用，该研究成果将为客家黄酒的科学饮用和进一步研究开发提供理论依据。

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Anti-aging Effects of Hakka Yellow Rice Wine on Skin

LUO Lvkeng,ZOU Haoyuan,YAO Hairong and DENG Qiuhua
（Medical School,Jiaying College,Meizhou,Guangdong 514015,China）

The anti-aging effects of Hakka yellow rice wine on the skin of subacute aging mice induced by D-galactose were evaluated.Subacute aging mice models were constructed by intraperitoneal injection of D-galactose.Then intragastric administration of distilled water and Hakka yellow rice wine(different alcohol content)respectively once a day for 45 d was performed.Then SOD,GSH-Px,hydroxyproline, MDA,and skin moisture content in mice skin were measured.The results suggested that Hakka yellow rice wine could effectively increase skin moisture content and hydroxyproline content and reduce MDAcontent.Accordingly,Hakka yellow rice wine had anti-aging effects on skin.

Hakka yellow rice wine;skin;hydroxyproline;moisture content

TS262.4；TS261.4；TS261.7

A

1001-9286（2017）03-0121-03

10.13746/j.njkj.2017007

广东省创新强校工程课题（CXQX055）；全国大学生创新创业训练计划（201510582020）；梅州市产业研究与技术开发资金（201411）；广东省医学科研基金（B2016062）。

2017-01-10

罗铝铿(1987-)，女，讲师，硕士，主要研究方向为中药药理学与健康产品研发，E-mail：aalkeng@126.com。