黄花远志根和叶提取物对急性肝损伤小鼠的保护作用

谢伟容，高斐雄，林燕燕，陈素慧，郭献忠

(1. 漳州卫生职业学院，漳州 363000； 2. 泉州市德化县世豪农业黄花远志种植基地，泉州 362500)

黄花远志根和叶提取物对急性肝损伤小鼠的保护作用

谢伟容1，高斐雄1，林燕燕1，陈素慧1，郭献忠2

(1. 漳州卫生职业学院，漳州 363000； 2. 泉州市德化县世豪农业黄花远志种植基地，泉州 362500)

目的: 研究黄花远志根和叶提取物对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤小鼠的保护作用。方法: 采用CCl4诱导化学性急性肝损伤模型，测定小鼠肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，观察小鼠肝脏病理学变化。结果:黄花远志根(4 g、2 g生药/kg)和叶(4 g、2 g生药/kg)提取物能显著降低CCl4致小鼠急性肝损伤ALT和AST的升高，明显改善CCl4对肝组织的病理损伤。结论:黄花远志根和叶对CCl4致小鼠急性肝损伤具有保护作用。

黄花远志，四氯化碳，急性肝损伤

黄花远志(Polygala arillta Buch Ham)为远志科远志属植物。黄花远志花为总状或圆锥状花序，叶片披针形、倒卵状披针形或长圆形，果实阔肾形。根皮具有清热解毒、祛风除湿、补虚消肿等功效[1]，民间广泛应用于治疗月经不调、肝炎、肺炎、风湿疼痛、产后虚弱等[2]。

黄花远志民间以保肝作用用药广泛，多以根茎入药，其叶作为保肝茶应用。但有关黄花远志对肝损伤保护作用的药效实验研究尚未见报道。本文通过黄花远志根和叶提取物对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤动物模型的影响，对其抗急性肝损伤的作用进行研究。

1 材料

1.1 药品与试剂 黄花远志由泉州市德化县世豪农业黄花远志种植基地提供。四氯化碳(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，联苯双酯滴丸(批号A02140828，浙江万邦药业股份有限公司)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司)。

1.2 动物 ICR小鼠(合格证号2015000504019)，清洁级，雌雄各半，体质量18～20 g，上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2012-0002。

1.3 仪器 T6新世纪紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；高速台式冷冻离心机(湖南湘仪实验室开发有限公司)；电子分析天平(德国赛多利斯集团)。

2 方法

2.1 黄花远志提取物的制备 取黄花远志干燥根和叶，按照1∶8的料液比，用85%乙醇提取2次，合并2次滤液，浓缩至浸膏，备用。

2.2 模型的制备及给药方法 取健康小鼠72只，随机分为9组，即正常对照组、模型组、阳性对照组(联苯双酯，200 mg/kg)、黄花远志根高、中、低剂量组及黄花远志叶高、中、低剂量组，每组8只。阳性对照组、黄花远志根高、中、低剂量组(折合黄花远志干燥根分别为4、2和1 g/kg)和黄花远志叶高、中、低剂量组(折合黄花远志干燥叶分别为4、2和1 g/kg)灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续10 d。末次给药后，每只小鼠腹腔注射6 ml/kg花生油配制的5% CCl4溶液[3]。摘眼球取血后处死小鼠，迅速取出肝脏备检。

2.3 生化指标的测定 待小鼠血样充分凝固后， 4 ℃ 3 500 r/min离心10 min，分离血清，取血清检测ALT、AST的活性。

2.4 肝脏指数的测定 小鼠肝脏用4 ℃生理盐水冲洗后，滤纸拭干，电子分析天平称质量并计算肝脏指数[肝脏指数=肝脏质量(g)/体重(g)×100%]。

2.5 肝脏组织的病理切片观察 取小鼠右叶相同位置肝组织，用4 ℃生理盐水冲洗后，滤纸拭干，以10%中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察肝组织切片的病理变化[4]。

3 结果

3.1 黄花远志提取物对小鼠CCl4急性肝损伤模型肝脏指数的影响 实验结果表明，模型组肝脏指数较正常对照组显著增加(P<0.05)，表明CCl4引起小鼠肝脏明显肿大。与模型组比较，阳性对照组、黄花远志根高、中、低剂量组和黄花远志叶高剂量组小鼠肝脏指数均显著降低(P<0.05)。黄花远志根和叶各剂量组与阳性对照组比较，肝脏指数均无显著性差异。结果见表1。

表1 黄花远志提取物对小鼠CCl4急性肝损伤模型肝脏系数的影响±s，n=8)

与模型组比较，*P<0.05

3.2 黄花远志提取物对小鼠CCl4急性肝损伤模型肝功能的影响 结果表明，模型组较正常对照组血清ALT和AST显著升高(P<0.05)，说明CCl4致小鼠急性肝损伤造模成功。与模型组比较，阳性对照组、黄花远志根高、中剂量组和黄花远志叶高、中剂量组均能显著降低CCl4所引起的ALT和AST 的升高(P<0.05或P<0.01)，黄花远志根低剂量组和叶低剂量组对CCl4所引起的ALT和AST 的升高无显著影响。结果见表2。

表2 黄花远志提取物对小鼠CCl4急性肝损伤模型肝功能的影响±s，n=8)

与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

3.3 黄花远志提取物对小鼠CCl4急性肝损伤模型肝脏组织病理学的影响 显微镜下观察正常对照组小鼠肝小叶结构完整，肝索呈放射状排列，清晰可辨，肝细胞结构和形态正常，排列整齐，未见肝细胞坏死、变性等病理改变(图1A)。模型组小鼠肝小叶结构破坏，索状排列紊乱，肝细胞呈不同程度肿胀坏死、变性，胞浆疏松透亮，部分细胞核固缩溶解，大量炎细胞浸润(图1B)。阳性对照组肝细胞坏死减轻，细胞排列较为整齐(图1C)。黄花远志根高、中剂量组肝小叶破坏程度和肝细胞水肿程度明显减轻，肝细胞排列较整齐，损伤程度较轻(图1E和图1F)；黄花远志叶高、中剂量组对肝损伤的保护程度较黄花远志根高、中剂量组弱(图1G和图1H)；黄花远志根和叶低剂量组与模型组比较，肝细胞的损伤程度有轻度改善(图1F和图1I)。

A．正常对照组 B.模型组 C. 阳性对照组 D.根高剂量组 E.根中剂量组 F.根低剂量组 G.叶高剂量组 H.叶中剂量组 I.叶低剂量组图1 黄花远志提取物对小鼠CCl4急性肝损伤模型肝脏组织病理学的影响(HE染色，×400)

4 讨论

远志属植物在我国有丰富的自然资源，含有多种生物活性的化学成分，如皂苷类、口山酮类、寡糖酯类化合物以及香豆素、木质素、黄酮、生物碱、酚类配糖体等[5]。黄花远志是远志科远志属药材，民间食用具有较好的保肝抗肝炎作用。多以根茎入药，其叶以保肝茶食用，以充分提高其利用价值。

目前，对于黄花远志的药理作用和活性成分研究较薄弱，因此具有深入研究的潜力。本研究首次以CCl4致小鼠急性肝损伤动物模型，对黄花远志根和叶提取物抗急性肝损伤的作用进行研究。实验结果表明，CCl4肝损伤模型组小鼠肝组织破坏严重，血清ALT、AST显著升高；黄花远志根高剂量组(4 g生药/kg)、根中剂量组(2 g生药/kg)和叶高剂量组(4 g生药/kg)、叶中剂量组(2 g生药/kg)小鼠肝细胞受损程度明显减少，血清ALT、AST显著降低；根低剂量组(1 g生药/kg)和叶低剂量组(1 g生药/kg)小鼠肝细胞损伤程度有轻度改善，血清ALT、AST也有一定程度降低。表明黄花远志根和叶具有保护肝细胞、对抗肝损伤的作用，且呈浓度依赖性。但是，黄花远志根和叶的最大给药剂量还需进一步研究和探讨。

综上所述，黄花远志根和叶对CCl4所致急性肝损伤模型具有降低血清ALT、AST，保护肝损伤作用。为黄花远志抗急性肝损伤的研究提供了药效学依据，并为对其进一步研究和开发奠定基础。

1 刘贤铭,王铁僧,姚淦．江浙闽台地区远志类药用植物资源整理及鉴定[J].时珍国医国药,2006,17(20):243

2 毛士龙,廖时萱,张灿坤.民间药黄花远志化学成分研究[J].中国民族民间医药杂志,1994,(8):35-36

3 黄静,李胜立,赵宏伟,等.霍山石斛多糖对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用[J].中国中药杂志,2013,38(4):528-532

4 许金鹏,张慧慧,李朝品,等.原卟啉钠对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(5):168-172

5 李萍,闫明,李平亚.远志属植物化学成分及生物活性研究进展[J].特产研究,2004,(3):56-61

药品质量与检验

Protective effects of extraction of roots and leaves from polygala arillta on CCl4-induced acute hepatic injury in mice

Xie Weirong1,Gao Feixiong1,Lin Yanyan1,Chen Suhui1,Guo Xianzhong2

(1.Zhangzhou Health Vocational College , Zhangzhou 363000;2.Planting Base of Polygala arillta, Quanzhou 362500)

Objective： To study the protective effects of extraction of roots and leaves from Polygala arillta against CCl4-induced liver injury in mice. Methods： The models of acute liver injury were induced by CCl4in mice. The liver index, serum activities of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) were determined, respectively. Liver tissue sections were examined under a light microscope. Results： In the model of acute liver injury induced by CCl4in mice, roots (4 g/g and 2 g/kg) and leaves (4 g/kg and 2 g /kg) from Polygala arillta markedly decreased the elevated serum levels of ALT and AST. The extraction of roots and leaves from Polygala arillta effectively improved the tissue lesion of liver. Conclusion： Polygala arillta has a significantly hepatoprotective effect on CCl4-induced acute liver injury in mice.

Polygala arillta, CCl4, acute liver injury

2016-11-24

福建省中青年教师教育科研项目(No.JA14438)

R967

A

1006-5687(2016)06-0015-03