不同品种大枣对DNFB诱导小鼠超敏反应的抑制作用

王淑萍，张静泽，张志丹， 高文远，陈 虹

(1.武警后勤学院附属医院，天津 300162； 2.武警后勤学院，天津 300162； 3.天津大学药物科学与技术学院，天津 300072)

实验研究

不同品种大枣对DNFB诱导小鼠超敏反应的抑制作用

王淑萍1，张静泽2*，张志丹3， 高文远3，陈 虹2

(1.武警后勤学院附属医院，天津 300162； 2.武警后勤学院，天津 300162； 3.天津大学药物科学与技术学院，天津 300072)

目的：研究不同品种大枣对二硝基苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响；评价不同品种大枣在免疫抑制作用上的差异。方法：将昆明小鼠随机分为对照组、DTH组与不同品种大枣给药组，通过致敏剂DNFB诱发DTH模型，检测不同品种大枣给药后模型小鼠耳廓重量的变化，同时测定肝指数、脾指数、胸腺指数进行综合评价。结果：实验表明行唐大枣、山东长枣、诺羌大枣、宁夏滩枣能够明显抑制DNFB引起的超敏反应，同时，还可对免疫器官胸腺起到保护作用。结论：不同产地大枣的免疫活性存在差异。

大枣，DNFB诱导小鼠，超敏反应

现代研究表明大枣有多种药理活性，主要表现在免疫调节、抗氧化、抗衰老、保肝降脂、抗肿瘤等方面。前期研究对不同产区的不同品种大枣进行了化学成分的含量测定，结果表明不同产区不同品种大枣的化学成分表现出极强的种间差异性，因而其药理作用也可能会出现显著性差异。因此，需进一步对不同品种大枣的药理药效作用进行测定，获得丰富数据，一方面从活性方面对大枣品种品质进行评价，丰富大枣资源研究，也为企业保健品、食品开发的原料筛选提供依据；另一方面，结合化学成分和活性进行关系探讨，以期进一步阐明药理活性的物质基础。

免疫调节作用是大枣的显著药理活性之一。研究表明，大枣多糖水提物可以显著提高大鼠体内单核巨噬细胞系统的吞噬功能以及促进淋巴细胞的增殖[1,2]，此外，大枣提取物还具有抗过敏作用[3, 4]。因此本研究从免疫调节作用入手，采用DNFB所致小鼠超敏反应实验评价不同品种大枣的药理活性[5]。

1 仪器与材料

1.1 实验材料 免疫调节作用所使用实验材料为大枣ZiziphusjujubaMill的不同地区样品，见表1。分别精确取10 g样品粉末，加50 ml纯净水制成混悬物，给药。选择阿归养血糖浆作为阳性对照药。

1.2 仪器 Sartorius BS210S分析天平(0.1 mg)，购自北京赛多利斯仪器系统有限公司；Sartorius CP 225D分析天平(0.01 mg)，购自北京赛多利斯仪器系统有限公司；754紫外-可见分光光度计，购自天津普瑞斯仪器有限公司；ZDHW型电热套，购自河北黄骅中兴仪器有限公司；KQ3200DB型数控超声清洗仪，购自昆山市超声仪器有限公司。

表1 6种大枣收集信息

1.3 试药 实验所用的主要试剂见表2。

表2 主要试药

1.4 实验动物 昆明小鼠，雌性，体重18～22 g，105只，由中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK-2007-004号。在温度20～22 ℃，光照12 h/黑暗12 h条件下饲养，自由饮食、饮水。

2 实验方法

2.1 动物分组及处理 将105只小鼠分别称重，平均分为15组，每组7只，分别为空白组、模型组、阳性对照组(阿归补血糖浆)和给药组(河北低剂量、河北高剂量、山东低剂量、山东高剂量、新疆低剂量、新疆高剂量、宁夏低剂量、宁夏高剂量、甘肃低剂量、甘肃高剂量、陕西高剂量)。每鼠腹部皮肤用硫化钡脱毛，范围3 cm×3 cm，用DNFB溶液50 μl均匀涂抹致敏。阳性对照组给予不同剂量阿归补血糖浆，低剂量灌服5 mg/kg、高剂量灌服7.5 mg/kg；给药组给予不同品种大枣样品，致敏后每天灌服大枣粉末水混悬液，低剂量组灌服400 mg/kg，高剂量组灌服800 mg/kg，连续5 d，1次/d，5 d后用DNFB溶液10 μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击。攻击后24 h称体重，颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下8 mm的耳片，称重。小鼠处死后，解剖取小鼠肝脏、脾脏、胸腺，分别称重、计算肝指数、脾指数、胸腺指数。

2.2 统计分析 使用SPSS V17.0软件对所得实验数据进行方差分析、显著性分析、简单相关性分析和偏相关分析。

3 结果与讨论

结果如表3所示，从体重差、肝指数、脾指数来看，模型组、阳性药以及各给药组与空白组相比，均不具有显著性差异，表明DNFB诱导的迟发型超敏反应对小鼠体重、肝、脾不会产生影响，样品对造模后小鼠也无明显影响。而对于胸腺指数，模型组显著低于空白组，表明DNFB诱导的超敏反应会对小鼠免疫器官胸腺造成损害，从而抑制胸腺的生长，但阳性药及各给药组的胸腺指数与空白组无明显差异，表明各品种大枣及阳性药可保护受损脏器，促进胸腺的生长。对于此模型的重要指标耳肿度，DNFB可引起迟发型超敏反应，造成小鼠耳肿胀。阳性药则能够抑制DNFB诱导的超敏反应。而给药组各品种除陕西、甘肃产大枣外，均对此超敏反应有抑制作用，特别是行唐大枣、山东长枣、诺羌大枣高剂量组和宁夏滩枣高剂量组，能够达到与阳性对照药相同的免疫抑制效果。此实验表明，行唐大枣、山东长枣、诺羌大枣、宁夏滩枣具有明显的免疫调节作用。

表3 不同产区大枣对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响

注：显著性差异比较为任意两组间的比较，a～d 表示显著性差异P<0.05，从数值高的开始标a,和两两组间比较，有差异的标b，没差异的标a；再比较b,有差异的标c，无差异的标b,以此类推。两组数据进行比较凡无相同字母者表明具有显著性差异，有相同字母出现则表明无显著性差异。

本论文首次采用DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应模型，对各产区代表品种大枣进行了免疫调节作用的研究，结果表明行唐大枣、山东长枣、诺羌大枣、宁夏滩枣能够明显抑制DNFB引起的超敏反应，且能达到与阳性药相同的抑制效果，同时，还可对免疫器官胸腺起到保护作用，减少其受损。

1 张庆，雷林生，林勤保，等.大枣多糖体外抗补体活性及促进小鼠脾细胞的增殖作用[J].中药药理与临床，1998，14(5)：19-21

2 张庆，雷林生，杨淑琴，等.大枣中性多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响[J].第一军医大学学报，2001，21(6)：426-428

3 郭乃丽，苗明三.大枣多糖对气血双虚模型小鼠全血细胞和血清粒-巨噬细胞集落刺激因子水平的影响[J].中国临床康复，2006，10(15)：146-147

4 顾有方，李卫民，李升和，等.大枣多糖对小鼠四氛化碳诱发肝损伤防护作用的实验研究[J].中国中医药科技，2006，13(2)：105-107

5 姚满林，增要赢，狄静芳，等.米诺环素对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的抑制作用[J].现代免疫学，2009，29(2)：134-135

2016-09-18

R967

A

1006-5687(2016)06-0001-03

*通讯作者：张静泽，E-mail：zhangjingze1977@163.com。