化学发光酶免疫分析法及ELISA用于丙型肝炎抗体检测的效果对比观察

周华强

广东省仁化县人民医院检验科，广东仁化 512300

化学发光酶免疫分析法及ELISA用于丙型肝炎抗体检测的效果对比观察

周华强

广东省仁化县人民医院检验科，广东仁化 512300

目的探讨化学发光酶免疫分析法和ELISA在丙型肝炎抗体中的检测效果。方法选取我院2014年12月～2015年11月接收的丙型肝炎患者332例，随机分为对照组和观察组患者各166例，抽取患者血液，检测其丙型肝炎抗体。其中，对照组患者采用ELISA法的检测其阳性检出率，观察组患者则采用化学发光酶免疫分析法检测其阳性检出率。结果化学发光酶免疫分析法对该抗体为97.6%阳性检出率，显著高于ELISA法的92.8%，具有统计学差异（P＜0.05）。此外，化学发光酶免疫分析法检出抗AMA-M2抗体的概率是78.3%，明显高于ELISA法的阳性检出率12.7%；化学发光酶免疫分析法对于抗3 E抗体的阳性检出率为72.9%，明显高于ELISA法的阳性检出率13.3%；化学发光酶免疫分析法检出阳性抗SP100抗体概率是38.0%，明显高于ELISA 法的阳性检出率14.5%；化学发光酶免疫分析法检出阳性抗PML抗体概率为56.0%，高于ELISA法的11.4%；化学发光酶免疫分析法检出阳性抗GP210抗体的概率为48.2%，明显高于ELISA法的阳性检出率6.0%，具有统计学差异（P＜0.05）。结论化学发光酶免疫分析法在丙型肝炎抗体检测中阳性检出率明显的好于ELISA法检测，可以推广于丙型肝炎抗体的检验。

化学发光酶免疫法；ELISA；丙型肝炎抗体

化学发光免疫分析是联合化学发光检测和免疫反应，检测各种体内多种物质的方法[1]。化学发光免疫分析法按照不同的标记方法分为化学发光标记免疫分析法和化学发光酶免疫分析法[2]。酶联免疫吸附试验，是利用抗原抗体共价键合[3]。底物溶液加入之后，底物所含的供氢体可在酶的存在下使底物由无色还原型变为有色氧化型[4]。所以，免疫反应是否发生可经是否变化来确定。丙型肝炎的传播会通过针刺以及吸毒和输血，劳累、饮酒等会对丙型肝炎病情有不良影响[5]。

表2 两种方法检测后相关丙型肝炎抗体检出率比较[n（%）]

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2014年12月～2015年11月接收的丙型肝炎患者332例，随机分为对照组和观察组患者各166例，对照组患者采用ELISA法的检测其阳性检出率，观察组患者则采用化学发光酶免疫分析法检测其阳性检出率。纳入标准为：首先病理确诊为丙型肝炎；年龄20～80岁；没有严重的心肾并发症；有完整的临床资料；其次，所有患者的血清标本采集均符合要求；最后，所有患者都签署知情书。其中，对照组患者有男89例，女77例；年龄23～78岁，平均（53.8±3.2）岁；观察组患者有男87例，女79例；年龄24～77岁，平均（54.1±3.0）岁，两组患者的一般资料相比较无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

观察组患者采用化学发光酶免疫分析法。化学发光酶免疫分析是根据血清通过化学发光酶免疫分析进行判定阳性率，即首先发光微孔板的包被采用经基因重组的HCV特异性抗原，随后加入观察组患者的血清样本，则固相抗原与观察组患者血清样本中HCV抗体结合为复合物，之后和HRP酶标记的抗人IgG抗体作用，这样酶标抗原抗体复合物得以形成，洗涤，加入鲁米诺，一种化学发光底物，其在双氧水碱性缓冲液的环境中，通过氧化和HRP酶的催化，最终成为激发态中间体，激发态的中间体回到基态时发出光子，利用发光信号仪测定其发光值，HCV阳性抗体的含量即可被间接算出。对照组患者采取ELISA法，首先采集对照组患者的空腹静脉血，在4h内低温离心分离血清，监测血清的相关指标。在微孔条预包被基因表达HCV抗体，与血清中的抗HCV抗体反应，然后加入HRP标记羊抗人-IgG的酶标记抗体与之结合，之后用TMB作用显色。结果若S/CO值不小于1为阳性，S/CO值小于1为阴性，其中，ELISA试剂盒由森贝伽生物科技有限公司生产，由郑州安图生物工程有限公司生产的LUMO半自动分析仪作为化学发光酶免疫分析法的检测仪器。

1.3 观察指标

对所有检测人员的丙型肝炎抗体的阳性检出率及其对抗AMA-M2抗体、抗3E抗体、抗SP100抗体、抗PML抗体的检出率做出详细的记录和评估。

1.4 统计学分析

处理数据采用的是用SPSS18.0统计学软件，计数资料选择χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 所有患者经两种方法检测后丙型肝炎抗体的阳性检出率的比较

两种方法检测后，166例丙型肝炎患者化学发光酶免疫分析法监测出丙型肝炎抗体162例（97.6%），显著高于ELISA法的92.8%，两组数据有统计学差异（P＜0.05）。具体见表1。

表1 两种方法检测后丙型肝炎抗体的阳性检出率的比较[n（%）]

2.2 两种方法检测后相关丙型肝炎抗体检出率比较

化学发光酶免疫分析法检出阳性抗AMAM2抗体、抗3 E抗体、抗SP100抗体、抗PML抗体以及抗GP210抗体概率为78.3%、72.9%、38.0%、56.0%以及48.2%，明显高于ELISA法的阳性检出率12.7%、13.3%、14.5%、11.4%以及6.0%，两组数据有统计学差异（P＜0.05）。见表2。

3 讨论

丙型肝炎病毒的慢性感染会引发坏死和纤维化的肝脏慢性炎症，有些患者甚至会出现肝硬化和肝细胞癌，严重危机患者的身心健康和生命安全[6]。丙型肝炎的传播会通过输血以及注射、性传播、母婴传播等途径，也会进入人体经皮肤破损处或黏膜[7]，此类传播是一种很广泛的传播方式[8]，比如非一次性注射器的使用、消毒不严格的牙用器械的使用、剃须刀以及牙刷等的公用等[9]。丙肝病毒的复制能力以及病毒多肽的免疫原性和基因型等病毒因素与人体的体液以及细胞和先天性免疫反应等宿主因素[10]，此外，饮酒、劳累和免疫抑制剂因素也会给丙型肝炎带来不良影响[11]。该病的临床表现有急性丙型病毒性肝炎、慢性丙型病毒性肝炎和肝硬化[12]。其中急性丙型病毒性肝炎急性丙型肝炎病情对于成年人来说病情较轻，急性无黄疸型肝炎居多，谷丙转氨酶ALT升高为主[13]。儿童则有近一半可自发性的清除丙型肝炎病毒。

免疫球蛋白抗体是受到刺激的人体免疫细胞和抗原的结合形成的。抗AMA抗体是无种属以及器官特异性的自身抗体，靶抗原是抗AMA抗体的线粒体，作为抗AMA亚型抗体，靶抗原的2-酮酸脱氢酶复合物在M2抗体线粒体内膜上，自体免疫性肝病的诊断率会得以很大的提高。抗PML抗体和抗SP100抗体均为核点型荧光染色模型，该模型的联合检测能够显著提高对肝炎的诊断率。除此之外，对肝病诊断有很高的特异性的还有抗GP210抗体，该抗体对肝病诊断的特异性高于95%以上。

丙型肝炎阳性抗体患者的血液中含有有传染性丙型肝炎病毒[14]。患者在大约60d的病毒潜伏期后，仅约四分之一的患者有食欲不振以及劳累和黄疸等病症，多数患者仍然没有发病的感觉，肝硬化的出现会在丙型肝炎病毒感染后约二十年后。故而，多数人不会察觉到被病毒感染。丙型肝炎患者在急性感染后，病毒RNA会出现在血清中，因此，早期诊断可以通过检查病毒RNA[15]。丙型肝炎病毒在体内潜藏两个月后，可在患者血液中检出丙型肝炎抗体。然而，丙型肝炎抗体不能消除入侵病毒，即没有保护作用[16]。本研究表明，化学发光酶免疫分析法检出阳性抗体概率高于ELISA法。

综上可知，化学发光酶免疫分析法在丙型肝炎抗体检测中阳性检出率明显的好于ELISA法检测，可以推广于丙型肝炎抗体的检验。

[1] 卢香云，程江，包建玲，等.ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体最佳临界值及其可疑区间[J].现代预防医学，2015，42（10）：1841-1844.

[2] 杨清梅，黄志伟，贾伟建，等.丙肝病毒核心抗原与丙肝抗体联合检测在丙型肝炎诊断中的应用[J].实用医学杂志，2015，31（9）：1470-1471.

[3] 张慧丽，于斐，张静，等.化学发光酶免疫分析法快速测定牛奶中恩诺沙星的含量[J].中国食品卫生杂志，2011，23（5）：398-401.

[4] 马玲，韦建兴，陆忠础，等.磺胺二甲嘧啶间接竞争化学发光酶免疫分析法的建立及应用[J].中国食品卫生杂志，2014，26（5）：455-460.

[5] 王江南，陈秀荣，李健，等.ELISA法检测抗-HCV-IgG抗体以及FQ-PCR检测血清HCV-RNA在丙型肝炎诊断中的应用价值[J].广东医学，2015，36（24）：3797-3801.

[6] 廖峭，许茹，王敏，等.广州无偿献血人群中丙型肝炎抗体阳性者HCV基因型与病毒载量的关系[J].中国免疫学杂志，2012，28（3）：242-245.

[7] 徐成军，张翠萍，王晓宏，等.生存质量分析在干扰素治疗慢性丙型肝炎疗效评价中的应用[J].中国全科医学，2015，18（31）：3837-3841.

[8] 刘晓宇，章晓联.丙型肝炎病毒感染人肝细胞系对多种唾液酸转移酶和半乳糖基转移酶表达的影响[J].中国生化药物杂志，2015，35（10）：5-10.

[9] 李士红，佟青，张丽坤，等.三种方法检测丙型肝炎病毒抗体结果一致性比较[J].中国消毒学杂志，2015，32（7）：736-737.

[10] 沈红元，陈玉蓉，沈建林，等.乙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒重叠感染患者生化免疫指标变化与临床意义[J].中华医院感染学杂志，2015，25（13）：2889-2890，2893.

[11] 范艳，孟玮，朱立鑫，等.化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ[J].食品科学，2015，36（12）：209-212.

[12] 孙翠明，闻颖.丙型肝炎患者外周血单核细胞中IFNAR2 mRNA表达的研究[J].中国医科大学学报，2013，42（11）：1016-1018，1035.

[13] 李新建.酶联免疫法检测血清丙肝抗体的测量不确定度的评估[J].中国输血杂志，2013，26（7）：630-632. [14] 夏勇，李齐光，唐希才，等.间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析[J].实用医学杂志，2011，27（13）：2449-2451.

[15] 邵维杰，肖艳群，陈慧英，等.酶联免疫吸附试验定性检测乙肝表面抗原测量不确定度评定的探讨[J].检验医学，2009，24（7）：545-547.

[16] 王琳琳，杨娜，袁悦，等.人叶酸受体自身抗体IgG酶联免疫吸附试验检测方法的建立及评价[J].北京大学学报（医学版），2014，46（3）：483-487.

Effect contrast observation of chemiluminescence enzyme immunoassay and ELISA for hepatitis C antibody detection

ZHOU Huaqiang
Clinical Laboratory, Renhua County People's Hospital, Guangdong, Renhua 512300, China

ObjectiveTo study the effect of chemiluminescence enzyme immunoassay and ELISA for the testing of hepatitis C antibody.Methods332 cases of hepatitis C patients cured in our hospital from December 2014 to November 2015 were randomly divided into control group and observation group with 166 cases in each. The blood of patient was extracted, and the hepatitis C antibody of patient was detected. In the control group, the positive detection rate was detected by ELISA method, and the positive detection rate of the patients in the observation group was detected by the chemiluminescence enzyme immunoassay method.ResultsThe positive detection rate of hepatitis C antibody was 97.6%, which was significantly higher than that of ELISA method. The positive rate of hepatitis C antibody was 93.4%, and the difference was statistically significant (P＜ 0.05). Furthermore, the CLEIA for anti AMA-M2 antibody positive rate was 78.3%, the positive rate was significantly higher than that of ELISA method with12.7%. Chemiluminescence enzyme immunoassay for anti 3E antibody positive rate was 72.9%, the positive rate was significantly higher than that of ELISA method with13.3%. Chemiluminescence enzyme immunoassay for anti SP100 antibody positive rate was 38%, which was higher than that of ELISA method with 14.5%. Chemiluminescence enzyme immunoassay for anti PML antibody positive rate was 56%, which was higher than that of ELISA 11.4%. Chemical analysis method for anti GP210 antibody positive rate was 48.2% luminescence enzyme immunoassay, the positive rate was significantly higher than that of ELISA with 6%.ConclusionThe CLEIA in hepatitis C antibody test is significantly better than that of ELISA method. It can be extended to hepatitis C antibody test.

Chemiluminescence enzyme immunoassay; Enzyme linked immunosorbent assay; Hepatitis C antibody

R446.6

B

2095-0616（2016）19-125-03

2016-06-14）