日粮中高剂量植酸酶对肉鸡生长性能、骨骼矿化和钙磷沉积的影响

■ 陈冠华 张金龙 张 宁 瞿红侠 韩进诚* 王志祥 陈建成 陈村年

（1.商丘师范学院生命科学学院，河南商丘476000；2.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；3.河南正本清源科技发展股份有限公司，河南商丘476000）

磷是家禽日粮配制成本中处于第三位的营养素，日粮中磷含量影响家禽生长和骨骼的发育和矿化。日粮中磷缺乏时，动物会出现生长性能受到抑制和骨骼发育不良症状[1]。玉米-豆粕型日粮中，植酸磷约占总磷的40%～60%，家禽自身对植酸磷的消化率约为30%[2]。家禽日粮中通常添加植酸酶来促使植酸磷降解，来增加总磷沉积，进而减少日粮中非植酸磷添加量[3-4]。饲料工业中低磷日粮中推荐的植酸酶添加水平一般为 500～1 000 IU/kg[3，5]；研究显示，家禽日粮中添加高剂量植酸酶几乎能降解全部的植酸磷[6]。然而关于肉鸡日粮中添加高剂量植酸酶能降低多少非植酸磷添加目前还存在着争议。

25-羟基维生素D3（25-OH-D3）是维生素D3的同工体，家禽日粮中25-OH-D3生物学效价约是维生素D3的2倍[7]。25-OH-D3已被我国农业部批准允许在猪和家禽日粮中使用。肉鸡日粮中25-OH-D3单独添加或与植酸酶同时添加能减少排泄物中钙和磷的含量，提高家禽磷利用率[8-10]。本试验旨在研究含25-OH-D3低磷日粮中添加高剂量植酸酶对1～42日龄肉鸡生长性能、骨骼矿化、血浆生化指标和钙磷沉积率的影响，为低磷日粮中合理添加植酸酶科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

选取1日龄健康、体重均匀[（44.88±1.31）g]的罗斯308肉鸡公雏250只，随机分为5个处理，每处理5个重复，每重复10只。试验期1～42日龄。肉鸡进行笼养（200 cm×50 cm×35 cm）。饲喂粉状配合饲料，自由采食，充足饮水，按常规免疫程序进行免疫接种。

1.2 试验日粮与试验设计

本试验采用的基础日粮营养水平参考NRC（1994）[11]和《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004）[12]中肉鸡营养需要推荐值。试验设计5种日粮，1个对照组中非植酸磷（NPP）含量为0.45%/0.35%；4个试验组按照2×2因子设计试验：2个NPP含量（1～21日龄，NPP含量分别为0.35%和0.25%；22～42日龄，NPP含量分别为0.25%和0.15%），2个植酸酶添加水平为1 000 IU/kg和10 000 IU/kg。基础日粮组成和营养水平见表1。

25-OH-D3添加剂购自山东海能生物工程有限公司，25-OH-D3添加剂（粉剂）商品纯度为1.25%，该公司采用Waters2695高效液相色谱仪器测定的25-OH-D3含量为5.0×105IU/g（1 μg/kg=40 IU/kg）。

1.3 样品收集与分析

1.3.1 生长性能测定

肉鸡分别在21日龄和42日龄空腹称重，每天记录各重复肉鸡采食量、死亡鸡只数，死亡鸡只称重扣除采食量。统计试验期采食量，计算平均采食量（g）、平均体增重（g/d）、料重比（平均采食量/平均体增重）和死亡率。

1.3.2 代谢试验测定

分别于11～14日龄和31～34日龄收集全部粪尿排泄物，进行钙磷代谢试验。以每个重复笼为试验单元，连续收集96 h新鲜排泄物，收集的排泄物在剔除毛屑杂物后，立即放入-20℃冰箱冷冻，以备分析排泄物中钙和磷含量。日粮和排泄物样品分别采用EDTA滴定法测定钙（Ca）含量，钼黄比色法测定总磷（TP）含量。Ca和TP沉积率计算公式为：

表1 日粮组成及营养水平（风干基础）

营养物质沉积率（%）=[（食入营养物质的量-排出营养物质的量）/食入营养物质的量]×100。

1.3.3 血浆生化指标测定

21日龄和42日龄时，在每重复组随机选取接近该重复平均体重的1只肉鸡进行屠宰试验。用1 mg/ml肝素钠溶液润湿注射器，心脏采血5 ml，3 000 g离心10 min，血浆冷冻保存（-20℃）。用岛津CL-8000全自动生化分析仪测定血浆钙浓度和血浆无机磷浓度。

1.3.4 骨骼指标测定

屠宰试验中，剥离两侧股骨、胫骨和跖骨。将骨骼放入样品袋密封，冷冻保存（-20℃）。将左侧骨骼（股骨、胫骨和跖骨）在沸水中煮3～5 min，去除残余肌肉、腓骨，剥离干净后，无水乙醇浸泡36 h，无水乙醚浸泡36 h，除去水分和脂肪。烘箱中105℃烘干24 h，用分析天平称量骨骼重量。用游标卡尺测定腿部左侧骨骼长度和直径（骨骼长度1/2处）。将骨骼压碎，放入坩埚，在茂福炉中600℃灰化36 h，以测定灰分重量。骨骼样品分别采用EDTA滴定法测定钙（Ca）含量，钼黄比色法测定磷（P）含量。用西北农林科技大学数显万能试验机（CMT-5504，深圳市新三思材料检测有限公司）测定腿部右侧骨骼（股骨、胫骨和跖骨）折断力（即骨骼强度），参数设置：跨度40 mm，单位负荷50 kg，位移速度10 mm/min。

1.4 统计分析

以每重复为试验单元，采用SAS 9.0数据统计软件对试验数据进行ANOVA分析，Tukey’s法进行多重比较，P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡生长性能的影响（见表2）

由表2可知，日粮中NPP含量显著影响1～42日龄肉鸡平均体增重和1～21日龄肉鸡平均采食量（P＜0.05）；日粮中植酸酶添加水平显著影响肉鸡平均体增重和平均采食量（P＜0.05），料重比和死亡率无显著影响（P＞0.05）。日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时，1～42日龄肉鸡平均体增重显著降低（P＜0.05）；与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，肉鸡平均体增重和平均采食量显著提高（P＜0.05）。与日粮中NPP含量为0.45%/0.35%相比，日粮中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶或0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg对1～42日龄肉鸡生长性能无显著的影响（P＞0.05）。

表2 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡生长性能的影响

表2 （续） 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡生长性能的影响

2.2 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡骨骼参数的影响（见表3～表5）

由表3、4和5可知，日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时，42日龄肉鸡股骨和胫骨灰分重量、钙含量和磷含量以及跖骨直径和磷含量显著降低（P＜0.05）。与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，肉鸡胫骨长度、股骨重量和灰分重量以及跖骨长度显著提高（P＜0.05）。与日粮中NPP含量为0.45%/0.35%相比，日粮中0.25%/0.15%NPP+1 000 IU/kg植酸酶时，肉鸡骨骼（股骨、胫骨和跖骨）灰分重量、灰分含量、钙含量和磷含量显著降低（P＜0.05）；日粮中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶、0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg或0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg对42日龄肉鸡骨骼（除跖骨磷含量外）无显著的影响（P＞0.05）。

2.3 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡血浆指标及钙和磷沉积率的影响（见表6）

由表6可知，日粮中NPP含量和植酸酶水平显著影响42日龄肉鸡血浆无机磷浓度（P＜0.05）。日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时，42日龄肉鸡血浆无机磷浓度显著降低（P＜0.05）。与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，肉鸡血浆无机磷浓度显著提高（P＜0.05）。

表3 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡股骨参数的影响

表3 （续） 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡股骨参数的影响

表4 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡胫骨参数的影响

表4 （续） 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡胫骨参数的影响

表5 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡跖骨参数的影响

表5 （续） 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡跖骨参数的影响

表6 高剂量植酸酶对肉鸡血浆钙和血浆无机磷浓度及钙和磷沉积率的影响

由表6可知，日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时，31～34日龄肉鸡钙沉积率和11～14日龄肉鸡磷沉积率显著提高（P＜0.05）；与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，11～14日龄肉鸡钙磷沉积率显著提高（P＜0.05）。与日粮中NPP含量为0.45%/0.35%相比，日粮中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶时，11～14日龄和31～34日龄肉鸡磷沉积率显著提高（P＜0.05）。

3 讨论

3.1 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡生长性能的影响

本试验显示，日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时1～42日龄肉鸡体增重显著降低。这和Liu等[1]和Li等[13]研究结果一致。这表明，日粮中NPP含量不足会抑制肉鸡生长性能。与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，肉鸡体增重和采食量显著提高。前人研究显示，肉鸡日粮中添加高剂量植酸酶能促进降解几乎全部植酸磷[14]，原因可能是植酸酶水解植酸，提高植酸磷消化率；而25-OH-D3提高了肉鸡对磷的吸收能力，进而增加家禽体内磷沉积，最终改善肉鸡生长性能。本研究显示，与日粮中0.45%/0.35%NPP相比，日粮中0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg植酸酶、0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg植酸酶和0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg植酸酶时，肉鸡体增重、采食量、料重比和死亡率无显著影响。这和Taheri等[15]和Manobhavan等[16]的研究结果一致。这表明，低磷日粮中添加适宜水平的植酸酶能达到和正常日粮中磷含量对肉鸡生长性能的促进效果。

3.2 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡骨骼参数的影响

本试验显示，日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时42日龄肉鸡股骨和胫骨灰分重量、钙含量和磷含量以及跖骨直径和磷含量显著降低。这和Viveros等[17]研究结果一致。与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，肉鸡股骨重量和灰分重量以及胫骨和跖骨长度显著提高。这和前人研究结果高剂量植酸酶和25-OH-D3能提高骨骼矿化相一致[9，18-19]。原因可能是高剂量植酸酶和25-OH-D3能增加植酸磷水解和提高对磷的吸收，进而促进肉鸡骨骼的矿化。与对照组日粮中NPP含量为0.45%/0.35%相比，日粮中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg、0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg和0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg时，42日龄肉鸡股骨、胫骨和跖骨的骨骼矿物无显著影响（除跖骨磷含量外）；日粮中0.25%/0.15%NPP+1 000 IU/kg时，42日龄肉鸡灰分重量、灰分含量、钙含量和磷含量显著降低。这表明，在低磷日粮中添加高剂量植酸酶能满足肉鸡骨骼矿化对磷的需要。

3.3 含25-OH-D3日粮中高剂量植酸酶对肉鸡血浆指标及钙和磷沉积率的影响

本试验显示，日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时无显著影响42日龄肉鸡血浆钙浓度，这和前人的研究结果一致[3]。与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，42日龄肉鸡血浆无机磷浓度显著提高，但未显著影响血浆钙浓度。这和Manobhavan等[16]的研究结果一致。原因可能是高剂量植酸酶能促进日粮中更多的植酸磷的降解进而提高肉鸡血浆无机磷浓度[3]。与对照组日粮中NPP含量为0.45%/0.35%相比，日粮中0.25%/0.15%NPP+10 000 IU/kg、0.35%/0.25%NPP+1 000 IU/kg和 0.35%/0.25%NPP+10 000 IU/kg时，42日龄肉鸡血浆钙浓度和血浆无机磷浓度无显著影响。这表明，低磷日粮中添加高剂量植酸酶能达到正常日粮磷含量肉鸡血浆钙浓度和血浆钙无机磷浓度。

本试验显示，日粮中NPP含量由0.35%/0.25%降低到0.25%/0.15%时，11～14日龄肉鸡磷沉积率和31～34日粮肉鸡钙沉积率显著提高。这和Viveros等[17]的研究结果一致。与日粮中添加1 000 IU/kg植酸酶相比，植酸酶为10 000 IU/kg时，11～14日龄肉鸡钙和磷沉积率显著提高。Zeller等[19]研究报道显示，低磷日粮中由500 IU/kg提高到12 500 IU/kg时，21日龄肉鸡植酸磷降解由67%提高到92%，肠道磷吸收率由31%提高到52%。与对照组日粮中NPP含量为0.45%/0.35%相比，日粮中为0.25%/0.15%+10 000 IU/kg植酸酶时，肉鸡磷沉积率显著提高。

4 结论

以生长性能和骨骼矿化为评价指标，1～42日龄肉鸡日粮中NPP含量为0.35%/0.25%时，植酸酶适宜添加量为1 000 IU/kg；NPP含量为0.25%/0.15%时，植酸酶适宜添加量为10 000 IU/kg。