补血生津颗粒质量标准建立

毛盛芳

（江西省南昌市洪都中医院制剂中心，南昌 330008）

补血生津颗粒质量标准建立

毛盛芳

（江西省南昌市洪都中医院制剂中心，南昌 330008）

目的 建立补血生津颗粒的质量标准。方法 用薄层色谱法(TLC)对补血生津颗粒中的黄芪、当归进行定性鉴别，采用高效液相色谱法(HPLC)测定补血生津颗粒中当归的主要活性成分阿魏酸的含量，结果 TLC法专属性强，斑点清晰；HPLC法测当归中阿魏酸的含量，条件适宜，分离效果好，阿魏酸在0.0382～0.382 ug范围内呈良好的线性关系，平均回收率为94.0%，RSD值为0.37%。结论 所建立的方法专属性强，操作简单，稳定灵敏，重现性好，可作为补血生津颗粒的质量控制方法。

补血生津颗粒；质量标准；黄芪；当归

补血生津颗粒是由黄芪、当归、白芍、白术、熟地黄等八味中药材组成，主要有益气，补血，养血，生津等功效，用于治疗气血两亏，面色萎黄，食欲不振，四肢乏力等症。在骨折愈合、养血补血方面有着独特的疗效。为确保补血生津颗粒的质量，采用薄层色谱法对方中黄芪和当归进行定性鉴别，以高效液相色谱法分析测定当归药材中阿魏酸的含量，方法专属性强，操作简单，稳定灵敏，重现性好，能有效地控制补血生津颗粒的质量。具体方法如下。

1 仪器和试药

1.1 仪器 Waters高液相色谱仪（2487检测器、Empower工作站），Diamonsil C18 5um反相色谱柱 (4.6×250 mm)，Apollo C18 5um反相色谱柱 (4.6×250 mm)，FA2004电子分析天平，TG332A半微量分析天平、Sartorius BT25S电子天平、UV-2101紫外分光光度计、SK250H超声清洗仪。

1.2 试药 黄芪甲苷对照品（批号：110781-201309）为中国药品生物制品检定所提供。阿魏酸对照品（批号：110773-201313）购自中国药品生物制品检定所。补血生津颗粒批号：20150314、20150321、20150329（本院自制），硅胶G（青岛海洋化工厂），D101型大孔树脂柱（内径1.5 cm，长12 cm） （上海摩速科学器材公司），乙腈、甲醇为色谱纯；乙酸乙酯、磷酸为分析纯；水为超纯水，所用试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 黄芪薄层鉴别 取本品15 g，研细，加甲醇50 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20 ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，通过D101型大孔树脂柱（内径1.5 cm，长12 cm），依次用水100 ml、40%乙醇100 ml洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇100 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液15 μl和对照品溶液5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.1.2 当归薄层鉴别 取本品5 g，研细，加水30 ml，用0.5 mol/L的硫酸溶液调节PH至2～3，用乙酸乙酯提取3次，每次20 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液15 μl和对照品溶液2～5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正已烷-三氯甲烷-冰醋酸（6∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁和1%铁氰化钾混合溶液（用时等量混合）。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）为流动相，检测波长为320 nm，柱温为35℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。

2.2.2 溶液的制备 对照品溶液： 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含阿魏酸10 μg的溶液，即得对照品溶液。供试品溶液：取本品研细，取约4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水50 ml，超声处理（功率250 W，频率59 kHz）20分钟，滤过，用少量水洗涤残渣和滤器，合并滤液，用磷酸调PH值为1～2，再用乙酸乙酯振摇提取4次，每次25 ml，合并乙酸乙酯提取液，80℃水浴蒸干，残渣加甲醇溶解至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。阴性对照溶液：除当归药材外，取处方中其它各味药材，按处方比例及生产工艺制成不含阿魏酸的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.3 系统适用性试验 分别精密吸取阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液各20 μl，分别进行高效液相色谱实验，并记录色谱图，见图1、图2、图3。结果表明：本色谱条件下，阿魏酸主峰与其他组分峰完全分离，保留时间适宜；而不含阿魏酸的阴性溶液色谱中，在对照品相应位置无色谱峰，说明阴性样品无干扰。

图1 阴性对照溶液色谱图

图2 对照品溶液色谱图

图3 供试品溶液色谱图

2.2.4 标准曲线和线形范围 精密称定阿魏酸对照品1.91 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇至刻度；精密量取1 ml、3 ml、5 ml、7 ml、10 ml，分别置10 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液各20 μl，在上述色谱条件下测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=6000000x-21404，R=0.9998。阿魏酸在0.0382～0.382 μg范围内呈良好的线性关系，

2.2.5 稳定性试验 取阿魏酸对照品溶液（9.55 ug/ml），按“2.2.1”色谱条件，每隔2 h进样一次，测定阿魏酸峰面积，得到其峰面积的RSD为2.0%，结果表明阿魏酸峰面积在8 h内无明显变化，阿魏酸对照品稳定性好。

2.2.6 重复性试验 取同一批样品精密称定5份，按供试品溶液的制备方法进行制样，按“2.2.1”项下方法进行检测，样品重复性良好，测得该批样品阿魏酸含量分别为0.0136，0.0136，0.0135，0.0136，0.0137 mg/ g，RSD为0.37%。

2.2.7 精密度试验 取同一浓度的阿魏酸对照品溶液（9.55 μg/ml），依照“2.2.1”项下方法重复进样6次，分别测定阿魏酸的峰面积，求其六次峰面积的RSD值均为1.8%，证明仪器精密度良好。

2.2.8 回收率试验 准确称取已知含量 (0.0136 mg/g）的本品约0.5 g，共五份，分别加入一定量的对照品溶液，照“2.2.1”项下方法试验，计算回收率，平均回收率为94.0%，符合要求。

2.2.9 样品测定 分别取七批补血生津颗粒，按“2.2.1”项下方法测定，以标准曲线法计算样品中阿魏酸的含量，结果见表1。

表1 七批样品测定结果

3 讨论

3.1 供试品溶剂的制备

3.1.1 溶剂的选择 分别以甲醇和稀乙醇、水饱和的正丁醇、乙酸乙酯、乙醚4种溶剂提取供试品溶液，对其提取效果进行比较，结果用乙酸乙酯溶剂所提取的供试品溶液较纯净，色谱图中杂峰少，样品分离好，色谱图中阿魏酸主峰峰面积大，峰形较好，基线平稳，出峰时间适宜。

3.1.2 超声时间的比较 提取供试品溶液时，比较了超声振荡时间对阿魏酸含量的影响，分别超声处理10、20、30 min，结果三种超声时间中超声20 min与超声30 min含量结果基本一致，考虑到样品中阿魏酸见光不稳定易分解，因此选择超声20 min作为提取条件。

3.2 流动相的选择 分别采用乙腈-0.05 mol/l磷酸二氢钾溶液（15∶85）和乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）作为流动相，比较出峰情况，结果发现以乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）为流动相的主峰保留时间适宜，峰形较好。故选择乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）为本方法的流动相。

4 结论

采用薄层色谱法对方中黄芪、当归进行定性鉴别，方法操作简单，专属性强，能有效控制制剂质量。

采用高效液相色谱法测定当归的含量，方法稳定、灵敏，重现性良好，故可作为质量标准。

根据“2.2.9”样品测试结果，同时考虑到当归药材产地、采收季节的差异及批量生产中各种因素的影响，我们制定本品每袋含阿魏酸不得少于0.10 mg。

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Quality Standards Establishment on Buxue Shengjin Granule

MAO Chengfang
(Preparations Center,Hongdu Hospital of TCM,Nanchang 330008,China)

Objective To establish the quality standards of Buxue Shengjin granule.Methods Using thin layer chromatography (TLC),qualitative identification of astragalus and angelica in Buxue Shengjin granule was carried out,and high performance liquid chromatography (HPLC)was developed for the determination of main active ingredient ferulic acid of angelica sinensis in Buxue Shengjin granule.Results The TLC method is specific,and the spots are clear.HPLC method for angelica ferulic acid content,the condition is appropriate,the separation effect is good,within the scope of ferulic acid in 0.0382~0.382 ug,has good linear relationship,the average recovery is 94.0%,and RSD values is 3.7%.Conclusion The method is specific,simple,sensitive and stable,reproducible,and can control the quality of Buxue Shengjin granule.

Buxue Shengjin granule;quality standards;chemistry of Chinese materia medica;thin layer chromatography

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.23.063

1672-2779（2016）-23-0138-03

李海燕 本文校对：张 洁

2016-07-31）