四大品种菊花中不同成分含量比较

陈韵姿，李子鸿，李怀国，刘东文

（佛山市中医院，广东佛山528000）

四大品种菊花中不同成分含量比较

陈韵姿，李子鸿，李怀国，刘东文

（佛山市中医院，广东佛山528000）

【目的】比较亳菊、贡菊、滁菊、杭菊等四大品种菊花中主要活性成分的含量。【方法】采用高效液相色谱法对菊花中的绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸及木犀草苷进行含量测定。测定前2项指标的色谱条件：色谱柱为Diamonsil-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈为流动相A，以质量分数为0.4%的醋酸溶液为流动相B进行梯度洗脱，流速为1.0 mL· min-1，检测波长为330 nm，柱温30℃，进样量为10 μL；测定木犀草苷的色谱条件：色谱柱为苯基硅烷键合硅胶为填充剂Agilent ZORBAX SB-phenyl（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈—20 g/L磷酸溶液为流动相；流速为1.0 mL·min-1，检测波长为350 nm，柱温30℃，进样量5 μL色谱。【结果】绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量顺序为：亳菊＞滁菊＞杭菊＞贡菊，含量差异有统计学意义（P＜0.05）；木犀草苷含量顺序为：滁菊＞亳菊＞贡菊＞杭菊，含量差异均无统计学意义（P＞0.05）。【结论】四大品种菊花中绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量有明显差异，而木犀草苷含量差异不大。

菊花/生产与制备；绿原酸/分析；3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸/分析；木犀草苷/分析；色谱，高效液相

菊花为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序，是常用的药食同源中药。菊花含挥发油、菊甙、腺嘌呤、胆碱、氨基酸、黄酮类、酚酸类及刺槐素等活性成分[1-2]，具有抗菌、抗病毒、抗炎、降血压、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用[2-3]。2010年版《中国药典》（一部）收载亳菊、滁菊、贡菊、杭菊，以绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸及木犀草苷作为其含量指标。本研究利用高效液相色谱法对以上4种菊花中上述3种活性成分含量进行了比较研究，现报道如下。

1 材料

1.1 试剂与仪器绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753-200413）；3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111782-200801）；木犀草苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111720-200607）。试剂均为分析纯。AS2060B型超声仪（昆山市超声仪器有限公司），FA1004电子天平（上海天美天平仪器有限公司），LC-10ATVP高效液相色谱仪（日本岛津公司）。

1.2 药品与鉴定亳菊购自安徽亳县、滁菊购自安徽滁县、贡菊购自安徽歙县、杭菊购自浙江桐乡当地的药材公司，经中药鉴定员骆万翔鉴定为菊花。

2 方法与结果

2.1 绿原酸[4]与3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸[5]的含量测定

2.1.1 供试品溶液的制备分别称取菊花粗粉（过一号筛）约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%（体积分数，下同）甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，挥干溶剂，残渣用50%甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品16.00 mg、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸对照品16.50 mg置25 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇分别制成每1 mL含绿原酸0.64 mg、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸0.66 mg的对照品溶液，于冰箱10℃以下保存。

2.1.3 色谱条件色谱柱为Diamonsil-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈为流动相A，以质量分数为0.4%的醋酸溶液为流动相B，按表1规定进行梯度洗脱；流速为1.0 mL·min-1，检测波长为330 nm，柱温为30℃，进样量为10 μL。色谱结果见图1。

表1 流动相梯度洗脱程序Table 1 Gradient elution program of mobile phase A and B

图1 绿原酸及3，5-0-双咖啡酰基奎宁酸对照品（a）与样品（b）的HPLC图谱Figure 1 HPLC results for chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid reference（a）and the sample（b）

2.1.4 线性关系分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3 mL置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，得到绿原酸0.032、0.064、0.096、0.16、0.192 mg/mL和3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸0.033、0.066、0.099、0.165、0.198 mg/mL的系列对照品溶液，按照2.1.3项色谱条件，以绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸浓度为横坐标，对照品峰面积为纵坐标进行线性回归。得到绿原酸的回归方程为Y=15 824X+344.87（r=0.999 8，n=5），3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸的回归方程为Y=15 337X +347.66（r=0.999 7，n=5）。结果表明，绿原酸在0.032～0.192 mg/mL浓度范围内，3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸在0.033～0.198 mg/mL浓度范围内，线性关系良好。

2.1.5 精密度试验分别取绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸对照品溶液各2 μL，按照2.1.3项的色谱条件连续进样6次，绿原酸峰面积平均值为849.65[相对标准偏差（sR）为0.25%]，3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸峰面积平均值为853.57（sR为0.16%），表明该方法精密度高。

2.1.6 稳定性试验取同一批菊花药材，按照2.1.1项方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12 h按照2.1.3项色谱条件进样测定绿原酸和3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸的含量。结果显示，绿原酸峰面积的sR为1.01%，3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸峰面积的sR为0.93%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.1.7 重复性试验取同一批次的菊花药材，分别按照2.1.1项的方法制成6份供试品溶液，按照2.1.3项色谱条件进样测定，6份样品绿原酸含量的sR为1.22%，3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的sR为1.05%，表明该方法重复性良好。

表2 绿原酸的加样回收率试验结果Table 2Results of recovery test of chlorogenic acid

表3 3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸的加样回收率试验结果Table 3Results of recovery test of 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid

2.1.8 加样回收率试验精密称取同一批次的菊花药材6份，分别加入一定量的绿原酸和3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸对照品，按照2.1.1项方法制备供试品溶液，按照2.1.3项色谱条件进样测定，绿原酸的平均回收率是99.88%，sR为1.04%，3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸平均回收率是99.75%，sR为1.24%（结果见表2～3）。

2.1.9 样品含量测定分别精密称取样品4批各1 g，按照2.1.1项的方法制备供试品溶液，按照2.1.3项色谱条件进样测定，计算含量。数据以均数±标准差表示，经单因素方差分析，结果见表4。

表4 四种菊花绿原酸与3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量测定结果Table 4Determination of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid in four kinds of Flos Chrysanthemi，n=3）

表4 四种菊花绿原酸与3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量测定结果Table 4Determination of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid in four kinds of Flos Chrysanthemi，n=3）

样品亳菊滁菊贡菊杭菊w绿原酸/（mg·g-1）2.48±0.19 2.41±0.23 2.22±0.35 2.31±0.30 w3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸/（mg·g-1）8.82±0.18 8.38±0.25 8.01±0.33 8.13±0.29

2.2 木犀草苷的含量测定[6-7]

2.2.1 供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入石油醚（30～60℃）20 mL，超声处理10 min；弃去石油醚，药渣挥干，精密加入70%（体积分数，下同）甲醇25 mL，密塞；称定质量，超声处理40 min，放冷；再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量；摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取木犀草苷对照品12.50 mg置于50 mL容量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含木犀草苷0.25 mg的对照品溶液。

2.2.3 色谱条件色谱柱为苯基硅烷键合硅胶为填充剂Agilent ZORBAX SB-phenyl（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈—20 g/L磷酸溶液为流动相；流速为1.0 mL·min-1，检测波长为350 nm，柱温30℃，进样量5 μL色谱。结果见图2。

2.2.4 线性关系分别精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、6.0 mL置10 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，得到木犀草苷0.025、0.05、0.075、0.125、0.15 mg/mL系列对照品溶液，按照2.2.3项色谱条件进样测定，以木犀草苷浓度为横坐标，对照品峰面积为纵坐标进行线性回归。得到木犀草苷的回归方程为Y=19 798X+391.61（r=0.9999，n=5），结果表明，木犀草苷在0.025～0.15 mg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验取木犀草苷对照品溶液，照2.2.3项下的色谱条件连续进样6次，木犀草苷峰面积平均值为880.93（sR为0.35%），表明该方法精密度高。

图2 木犀草苷对照品（a）与样品（b）的HPLC图谱Figure 2HPLC results for galuteolin reference（a）and the sample（b）

2.2.6 稳定性试验取同一批次的菊花药材，按照2.2.1项的方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12 h按照2.2.3项色谱条件进样测定木犀草苷的含量，木犀草苷峰面积的sR为1.42%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验取同一批次的菊花药材，分别按照2.2.1项的方法制成6份供试品溶液，按照2.2.3项的色谱条件进样测定，结果显示6份样品木犀草苷含量sR为1.92%，表明该方法重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验精密称取同一批次的菊花药材6份，分别加入一定量的木犀草苷对照品，按照2.2.1项的方法制备供试品溶液，按照2.2.3项色谱条件进样测定，木犀草苷的平均回收率是99.95%，sR为1.02%，结果见表5。

表5 木犀草苷的加样回收率试验结果Table 5Results of recovery test of galuteolin

2.2.9 样品含量测定分别精密称取样品2批，各1 g，按2.1.1项的方法制备供试品溶液，按2.2.3项的色谱条件进样测定并计算含量。数据以均数±标准差表示，经单因素方差分析，结果见表6。

表6 四种菊花木犀草苷的测定结果Table 6Determination of galuteolin in four kindsof Flos Chrysanthemi，n=3）

表6 四种菊花木犀草苷的测定结果Table 6Determination of galuteolin in four kindsof Flos Chrysanthemi，n=3）

样品亳菊滁菊贡菊杭菊w木犀草苷/（mg·g-1）0.84±0.24 0.86±0.21 0.83±0.20 0.82±0.22

3 讨论

3.1 液相色谱条件的选择在测定绿原酸与3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量时曾采用乙腈为流动相A，以10 g/L磷酸溶液为流动相B，但分离效果不理想，后将流动相B改为质量分数为0.4%的醋酸溶液，达到了最佳的分离效果。

3.2 四大品种菊花主要成分的含量比较2010年版《中国药典》（一部）规定菊花中含绿原酸不得少于0.20%，含木犀草苷不得少于0.08%，含3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸不得少于0.70%。本研究结果表明，本实验的样品含量全部符合药典规定，其中亳菊中绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量最高，滁菊其次，贡菊最低，差异有统计学意义（P＜0.05）；滁菊中木犀草苷含量最高，亳菊其次，杭菊最低，差异无统计学意义（P＞0.05）。亳菊以疏风散热，解暑明目见长；滁菊偏于祛风润燥，二者活性成分含量较高，提示药用配方可主要选择这2种菊类。贡菊清香可口，解暑除烦，清肝明目，多用于饮料；杭菊在历史上作为茶点饮料用，有“茶菊”之名。本研究结果表明贡菊和杭菊的活性成分均较亳菊与滁菊低，验证了二者更适合食用。

［1］程宏英，冯启余，曹玉华，等.菊花中活性成分的高效液相色谱测定与指纹图谱研究［J］.分析科学学报，2007，23（3）：257.

［2］雷载权.中药学［M］.上海：上海科学技术出版社，2002：44.

［3］黄泰康.常用中药成分与药理手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1999，1566.

［4］孙英英，崔永霞，刘伟.HPLC对不同品种菊花中绿原酸含量的测定［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（24）：83.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：70.

［6］姜文青，张亚中，金斌.HPLC同时测定黄山贡菊和七月菊中的4种化学成分［J］.中成药，2015，37（10）：2211.

［7］朱丽，卢化.HPLC法测定药用菊花中木犀草素的含量［J］.湖北中医杂志，2010，32（2）：74.

【责任编辑：黄玲，侯丽颖】

Comparison of Component Contents in Four Kinds of Flos Chrysanthemi

CHEN Yunzi，LI Zihong，LI Huaiguo，LIU Dongwen
（Foshan Hospital ofTraditional Chinese Medicine，Foshan 528000 Guangdong，China）

ObjectiveTo compare the contents of main active components in four kinds of Flos Chrysanthemi，including Boju，Gongju，Chuju，and Hangju.MethodsHigh performance liquid chromatography was applied for the determination of the contents of chlorogenic acid，3，5-O-dicaffeoyl quinic acid and galuteolin in Flos Chrysanthemi.And the chromatography for the former indexes determination was performed on a Diamonsil-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）with an isocratic gradient elution using acetonitrile as the mobile phase A and a mass fraction of 0.4%of aqueous acetic acid solution as the mobile phase B.The flow rate was 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was set at 330 nm，the column temperature was 30℃，and the injection volume was 10 μL；the chromatography for galuteolin determination was performed on an Aglient ZORBAX SB-phenyl column（4.6 mm×250 mm，5 μm）using acetonitrile 20 g·L-1phosphoric acid solution as the mobile phase. the flow rate was 1.0 mL·min-1，the detection warelength was set at 350 nm，the column temperature was 30℃，and the injection volumn was 5 μL.ResultsThe contents of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid were in the decreasing sequence from Boju，Chuju，Hangju to Gongju，the differences being significan（P＜0.05）. Galuteolin content was in the decreasing sequence from Chuju，Boju，Gongju to Hangju，the differences being not significant（P＞0.05）.ConclusionThe contents of chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoyl quinic acid varygreatly in 4 kinds of Flos Chrysanthemi，but the content of galuteolin is similar in the 4 kinds ofFlos Chrysanthemi.

Flos Chrysanthemi/production&preparation；chlorogenic acid/analysis；3，5-O-dicaffeoyl quinic acid/analysis；galuteolin/analysis；chromatography，high performance liquid

R284.1

A

1007-3213（2016）06-0871-04

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.06.026

2016-07-13

陈韵姿（1982-），女，主管药师，医学学士；E-mail：wincechen@163.com