FOXQ1和CyclinD1在胃癌中的表达及其临床意义

陈丽丽 曹学全 卢洪胜 杨朝晖 范广民 章辉 顾华敏

FOXQ1和CyclinD1在胃癌中的表达及其临床意义

陈丽丽 曹学全 卢洪胜 杨朝晖 范广民 章辉 顾华敏

目的 研究叉头框蛋白Q 1（FOXQ1）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）在胃癌中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化EnVision法检测80例胃癌组织和25例癌旁组织中FOXQ1和CyclinD1的表达情况，分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果 胃癌组织中FOXQ1和CyclinD1阳性表达率均高于癌旁组织（均P＜0.05）；在不同肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移及不同临床分期者之间的差异均有统计学意义（均P＜0.05），而在不同年龄、性别、肿瘤大小及分化程度者之间的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。胃癌组织中FOXQ1阳性表达率与CyclinD1阳性表达率呈正相关（P＜0.05）。结论 FOXQ1和CyclinD1高表达在胃癌的发生、发展中起作用，联合检测FOXQ1和CyclinD1可用于判断胃癌的浸润、转移潜能及患者的预后。

胃癌 FOXQ1 CyclinD1 免疫组织化学

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展与多基因突变及多类型传导途径异常有关。叉头框蛋白Q1（forkhead box Q1，FOXQ1）是一个具有高度保守的叉头框（FOX）结构的转录因子，在肿瘤的侵袭和远处转移过程中起重要作用[1]。细胞周期蛋白D1（CyclinD1）是肿瘤细胞增殖周期G1/S期限制点的调控因子，与肿瘤发生、发展有关[2]。本研究采用免疫组化EnVision法检测FOXQ1和CyclinD1在胃癌和胃癌旁组织中的表达情况，结合随访资料，分析其与临床病理因素的关系及两者表达的相关性，进一步探讨它们在胃癌发生、发展过程中的可能作用机制。

1 对象和方法

1.1 对象 收集台州市中心医院2010年11月至2014年11月行根治手术的80例胃癌患者的切除标本。患者男43例，女37例，年龄35～85岁，中位年龄65岁；患者术前均未接受化疗和放疗，术后均经病理检查确诊。检测所取肿瘤组织均为肿瘤中心非坏死部分，同时取25例距离肿瘤组织边缘＞5cm癌旁组织作为对照。所有组织标本取出后均迅速用10%的中性甲醛溶液固定，常规脱水、二甲苯透明、浸蜡、石蜡包埋保存。参照2010年WHO组织学标准分级分为高分化（管状腺癌Ⅰ级）11例，中分化（管状腺癌Ⅱ级）40例，低分化(管状腺癌Ⅲ级) 29例。参照2010年UICC修订的TNM分期标准判定为Ⅰ期14例，Ⅱ期19例，Ⅲ期22例，Ⅳ期25例。

1.2 实验试剂 鼠抗人单克隆FOXQ1抗体购自Abcan公司，兔抗人单克隆CyclinD1抗体购自上海基因科技有限公司，En VisionTM试剂盒和DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 免疫组化检测 采用En Vision二步法检测FOXQ1和CyclinD1的表达。石蜡切片，常规脱蜡至水，切片浸于3%H2O2溶液中3min，柠檬酸高压抗原修复10min，一抗4℃孵育过夜，通用型二抗-HRP聚合物，37℃孵育30min，滴加DAB显示，显微镜下观察显色情况，苏木素复染，0.1%盐酸乙醇分化，PBS冲洗返蓝，乙醇脱水、透明、中性树胶封固。用已知阳性切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果评定 免疫组化阳性信号为浅黄色至棕黄色颗粒。根据染色细胞百分率和染色程度对免疫组化检测结果进行评定和分析：每例观察5个以上高倍视野（× 400），计数不少于1 000个细胞中的阳性细胞数，计算阳性细胞率，FOXQ1和CyclinD1表达阳性标准参考Liang等[3]的判定标准：阳性细胞率≤10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；染色强度浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将阳性细胞率得分和染色强度得分相乘即为最后得分，0～3分定义为阴性，4～12分定义为阳性。

1.5 统计学处理 采用SPSS17.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验，FOXQ1和CyclinD1表达的相关性分析采用Spearman相关。

2 结果

2.1 FOXQ1与CyclinD1在胃癌和癌旁组织中的表达 FOXQ1的阳性表达主要在细胞质，部分细胞核亦有表达（图1）；CyclinD1的阳性表达在细胞核（图2）。两者在胃癌组织中的阳性表达率均明显高于癌旁组织（均P＜0.05），见表1。

图1 胃癌组织中FOXQ1的阳性表达（En Vision二步法，× 400）

图2 胃癌组织中CyclinD1的阳性表达（En Vision二步法，× 400）

表1 FOXQ1与CyclinD1在胃癌和癌旁组织中的表达

2.2 FOXQ1、CyclinD1表达与胃癌临床病理特征的关系 胃癌组织中FOXQ1与CyclinD1阳性表达率在不同TNM分期、浸润深度及是否有淋巴结转移者之间，差异均有统计学意义（均P＜0.05），而在不同年龄、性别、肿瘤大小及分化程度者之间的差异均无统计学意义（均P＞0.05），详见表2。

表2 FOXQ1﹑CyclinD1表达与胃癌临床病理特征的关系[例（%）]

2.3 胃癌组织中 FOXQ1与 CyclinD1表达的相关性 80例胃癌组织中FOXQ1与CyclinD1表达均阳性者41例，均阴性者26例，胃癌组织中FOXQ1与CyclinD1表达呈正相关，详见表3。

表3 FOXQ1与CyclinD1在胃癌组织中表达的相关性（例）

3 讨论

Fox家族是一类庞大而功能广泛的转录因子，参与胚胎发育、细胞周期调控、糖类和脂类代谢、生物衰老、免疫调节等多种生物学过程，其突变和表达异常与发育畸形、代谢性疾病有关。FOXQ1基因属于FOX家族成员之一，在胃癌、乳腺癌、大肠癌、肺癌等肿瘤的发生、发展中的作用国内外均有研究。Lin等[5]报道，在胃黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤中高表达Shigekawa等[6]研究发现，FOXQ1与乳腺癌的进展密切相关。国内学者研究显示FOXQ1在大肠癌组织中表达水平较高，尤其是高恶性程度的和晚期大肠癌，而在伴有淋巴结转移的或远处转移的晚期大肠癌组织中表达水平也明显增高[7]。本研究结果显示，FOXQ1在胃癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05），提示FOXQ1高表达在胃癌的发生过程中起了作用。在不同TNM分期、浸润深度及是否有淋巴结转移者之间，胃癌组织中FOXQ1阳性表达率的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。表明FOXQ1表达与胃癌的浸润深度、是否有淋巴结转移和TNM分期密切相关。这一结果与Liang等[3]对胃癌的研究结果一致。

CyclinD1作为细胞周期调控中一种较为重要的因子在细胞增殖调节中起了重要作用。它定位于染色体11q13上，含295个氨基酸，在细胞周期关键限速点转换期中，通过对相应转换分子进行激活转换，促使细胞DNA合成，从而发挥出加速细胞增殖的正性调节作用，是细胞增殖G1/S期的重要控件。Lan等[8]研究表明CyclinD1在胃癌组织中的阳性表达率远远高于癌旁组织，与胃癌的发生、发展有关。林孟波等[9]也报道CyclinD1在胃癌组织的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，在TNM分期为晚期和淋巴结转移的胃癌中的表达率明显高于TNM分期为中早期和淋巴结未转移者。本研究结果显示，CyclinD1在胃癌组织中的阳性表达率明显高于胃癌旁组织，差异有统计学意义；在不同TNM分期、浸润深度及是否有淋巴结转移者之间CyclinD1阳性表达率的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。提示CyclinD1高表达与胃癌的发生、发展和预后密切相关，与上述研究结果相一致。

本研究进一步发现，胃癌组织中FOXQ1表达与CyclinD1表达呈正相关，其表达水平与胃癌的浸润、转移及临床分期密切相关。表明FOXQ1可能通过调控CyclinD1，参与细胞周期调节，促进肿瘤细胞增殖，在胃癌的发生、发展中起作用。FOXQ1与CyclinD1表达的联合检测可以应用于临床判断胃癌的转移潜能及患者的预后。

[1]Zhang H,Meng F,Liu G,et al.Forkhead transcription factor foxq1 promotes epithelial-mesenshymal transition and breast cancer metastais[J].Cancer Res,2011,71(4):1292-1301.

[2]Musgrove E A,Caldon C E,Barraclough J,et al.CyclinD as a therapeutic target in cancer[J].Nat Rev Cancer,2011,11(8):558-572.

[3]Liang S,Yan X,Wang B,et al.Increased expression of FOXQ 1 is aprognostic marker for patients with gastric cancer[J].Tumor Biol, 2013,34(5):2605-2609.

[4]徐园,姚海波,金益,等.JMJD2C和HIF-1α在胃癌组织中的表达及其临床意义[J].中华医学杂志,2013,93(42):3375-3378.

[5]Lin L,Min M,Bi C F,et al.Primary gastrointestinal diffuse large Bcell lymphoma:an immunohistochemical and prognostic study of 90 cases[J].Chin J Pathol,2011,40(4):220-226.

[6]Shigekawa T,Ijichi N,Ikeda K,et al.FOXP1,an estrogen-inducible transcription factor,modulates cell proliferation in breast cancer cells and 5-year recurrence-free survival of patients with tamoxifen-treated breastcancer[J].Horm Cancer,2011,2(5):286-297.

[7]骆赞,魏正强,向相,等.Foxq1与E-cadheri蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义[J].中国老年学杂志,2014,4(34):2076-2078.

[8]Lan B,Xu D P,Lin YK.Expression of cyclinD1 and P53 in gastric earcinoma[J].pract J Cancer,2002,17(1):26-28.

[9]林孟波,王金泗,薛芳沁,等.Analectic-3和CyclinD1在胃癌中表达与预后分析[J].现代诊断与治疗,2013,24(16):3602-3603.

Expression of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma and its clinical significance

CHEN Lili,CAO Xuequan,LU Hongsheng,etal.Department of Pathology,Taizhou Central Hospital,Taizhou 318000, China

【 Abstract】 Objective To investigate the expression and clinical significance of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma. Methods The expression of FOXQ1 and CyclinD1 in 80 samples of gastric carcinoma and 25 samples of pericancerous tissue was detected by immunohitochemical EnVision method，and its relationship with clinical pathological features was analyzed. Results The positive expression rates of FOXQ1 and CyclinD1 in gastric carcinoma tissues were significantly higher than those in corresponding percicancerous gastric mucosa(both P＜0.05).The positive expression rates of FOXQ1 and CyclinD1 were correlated with the depth of tumor invasion,lymph node metastasis and clinical stage(both P＜0.05), but not correlated with age,sex,tumor size or degree of differentiation(P＞0.05).The expression of FOXQ1 in gastric carcinoma was positively correlated with the expression of CyclinD1(P＜0.05). Conclusion The high expression of FOXQ1 and CyclinD1 may be involved in the occurrence and development of gastric cancer,the combined detection of FOXQ1 and CyclinD1 can be used to determine the invasive and metastatic potential of gastric carcinoma and the prognosis of the patients.

Gastric carcinoma FOXQ1 CyclinD1 Immunohistochemistry

2016-01-19）

（本文编辑：沈叔洪）

318000 台州市中心医院病理科