单核细胞趋化蛋白-1基因多态性与浙江局部地区汉族人群2型糖尿病的相关性研究

马江波 许鑫 马改改 沈洁 黄青华 施育平

单核细胞趋化蛋白-1基因多态性与浙江局部地区汉族人群2型糖尿病的相关性研究

马江波 许鑫 马改改 沈洁 黄青华 施育平

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因多态性与浙江局部地区汉族人群2型糖尿病（T2DM）的相关性。方法 采用病例对照研究，选取浙江局部地区汉族人群中T2DM患者208例（T2DM组）和健康体检者209例（对照组），采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测受试者CCL2 rs1024611（-2518A/G）的基因型，并用DNA测序法鉴定部分结果。结果CCL2 rs1024611基因多态性与T2DM发生相关，T2DM组和对照组G基因频率差异有统计学意义（P＜0.01），T2DM组和对照组GG基因型频率差异有统计学意义（P＜0.01），多因素logistic回归分析显示，GG基因型频率可显著降低T2DM风险（校正后OR=0.201，95%CI：0.077～0.526，P＜0.01）。结论 CCL2 rs1024611基因多态性与T2DM发生相关，其中GG基因型可能是T2DM的保护性因素，G等位基因可能降低汉族浙江局部地区汉族人群T2DM的风险。

单核细胞趋化蛋白-1 2型糖尿病 单核苷酸多态性

1 对象和方法

1.1 对象 选择2009年10月至2014年10月入住浙江省人民医院内分泌科的T2DM患者208例，男143例，女65例，年龄55～76（65.8±10.1）岁。符合1999年WHO关于T2DM诊断标准，同时排除感染、心脑血管疾病、自身免疫性疾病、非糖尿病引起的肾功能衰竭、恶性肿瘤患者。选择性别、年龄相匹配的同期浙江省人民医院门诊健康体检者209例作为对照组，男143例，女66例，年龄53～74（63.9±10.6）岁。本研究所有受试者均为中国浙江地区汉族人，个体之间无血缘关系。两组性别、年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。所有入选者均征得本人或其家属同意并签署知情同意书。本研究获得浙江省人民医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 白细胞基因组DNA提取 所有对象采集晨起空腹静脉血5ml 2管，其中一管测定血糖、糖化血红蛋白（HbA1c）、血脂等，另一管以EDTA抗凝，以溶液盐析法提取DNA，TE溶解，-80℃保存。

1.2.2 CCL2 rs1024611多态性检测 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术方法参考文献[8-10]。应用上游引物5′-TCT CTC AGC CCA GCA CTG ACC-3′和下游引物 5′-GAG TGT TCA CAT AGG CTT CTG-3′扩增包含CCL2 rs1024611（-2518A/ G）位点的DNA片段234 bp。当-2518位点为G等位基因时，PCR产物由限制性内切酶PvuⅡ（加拿大生工公司）切割产生2个片段：159 bp和75 bp。随机选择20%的T2DM组和20%的对照组，将每个样本的PCR扩增片段送至上海生工生物工程有限公司，采用ABI_3730XL测序仪（美国ABI公司）进行单向测序。DNA测序图谱中多态性位点仅有一个G或A峰，表示其为纯合GG或AA型；出现双峰则表示其为杂合GA型测序得到的基因型与采用PCR-RFLP得到的基因型进行比对，详见图1。

图1 CCL2rs1024611（-2518A/G）琼脂糖电泳及测序结果[a：M：DL500 DNA分子标志物；1、4、5、6、7：AG型；2、8：AA型；3：GG型；b：小方框位置为多态性位点]

1.3 统计学处理 应用SPSS 19.0统计软件。运用Hardy-Weinberg平衡检验确认研究样本的群体代表性。计量资料以表示，组间比较采用t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。以比值比（OR）及其95%可信区间（CI）表示相对风险度。通过非条件logistic回归分析校正危险因素后估算基因型与表型的相关性。未校正的OR值和校正后的OR值分别采用单因素分析和多因素logistic回归分析。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡检验 CCL2 rs1024611在对照人群中的基因分型符合Hardy-Weinberg平衡规律（CCL2：χ2=2.01，P=0.156），表明对照人群的基因分布可反映整体人群基因的分布情况。

2.2 两组对象一般资料的比较 在T2DM组中BMI、TG及LDL-C水平均高于对照组（均P＜0.05），而HDLC水平低于对照组（P＜0.05）。T2DM组中空腹血糖和HbA1c高于对照组（P＜0.05），详见表1。

表1 两组对象一般资料的比较

2.3 两组CCL2 rs1024611（-2518A/G）基因型和等位基因频率的比较 两组CCL2 rs1024611的基因型和等位基因频率分布见表2。T2DM组和对照组G基因频率差异有统计学意义（P＜0.01）。T2DM组和对照组GG基因型频率差异有统计学意义（P＜0.01），经非条件logistic回归分析校正BMI及血脂水平后，CCL2-2518 GG基因型能显著降低发生T2DM的风险，为T2DM的保护性因素。

表2 两组CCL2rs1024611（-2518A/G）基因型和等位基因频率的比较

3 讨论

T2DM呈复杂性遗传模式，即多个基因变异加上环境因素的影响共同决定疾病的易感性。近年提出的T2DM的炎症学说，认为T2DM是一种慢性非特异性炎症过程。而MCP-1对各种炎症细胞有趋化激活作用。本研究分析了浙江局部地区汉族人群CCL2 rs1024611（-2518A/G）基因多态性与T2DM的关系，研究结果表明，CCL2 rs1024611(-2518A/G)基因多态性与汉族人群T2DM发生相关，其中GG基因型可能是T2DM的保护性因素，G等位基因可能降低浙江局部地区汉族人群T2DM的风险。

对于MCP-1-2518A/G基因多态性与T2DM的关联研究国内外也有相关报道。本研究中对照组AA、AG、GG基因型分别为22.0%、44.5%、33.5%，这与Jiang等[9]报道的中国人群（病例数416）研究结果无统计学差异，然而与国外Simeoni[11]、Zietz等[12]报道的研究结果相比，G等位基因频率高于高加索人群，提示该基因变异存在种族异质性。

2004年，Simeoni等[11]对大样本量的高加索人群研究后发现，血浆MCP-1水平升高与胰岛素抵抗和T2DM发生呈显著正相关，MCP-1 G-2518等位基因作为一种胰岛素抵抗和T2DM负效因子有统计学意义。Jing等[9]对中国人群的研究亦与本研究结果一致，均表明G等位基因可能为T2DM的保护性因素。然而，Zietz等[12]对高加索人群的另一项研究却未发现MCP-1-2518A/G基因多态性与T2DM相关。其原因可能有：首先，部分研究样本量太小，导致统计效能低，其研究结果可信度不高；其次，糖尿病的不同表型可能有不同的遗传发病机制，目前已有多项研究报道MCP-1基因多态性与糖尿病微血管病变、糖尿病肾病、糖尿病大血管病变等糖尿病并发症相关，若纳入研究的T2DM表型不一致，是否合并糖尿病并发症可能导致结果的差异。

关于MCP-1基因多态性与T2DM关联的机制研究主要集中在不同基因型其MCP-1表达水平的差异方面。研究表明，MCP-1-2518A/G位点的基因多态性影响炎症刺激反应中MCP-1的表达水平[6]。Simeoni等[11]研究也表明，T2DM患者体内MCP-1水平显著高于正常对照。MCP-1是炎症趋化因子CC亚族的一员，对各种炎性细胞尤其是单核/巨噬细胞具有趋化激活作用，研究发现脂肪组织可以产生MCP-1，当脂肪沉积到达一定阈值时，来自脂肪细胞的因子，如TNF-α、MCP-1等引起巨噬细胞激活和浸润，激活的巨噬细胞分泌各种炎症因子，后者可损伤脂肪细胞胰岛素敏感性，同时刺激周围单核细胞和巨噬细胞进一步激活和浸润脂肪，最终引起全身胰岛素抵抗[5]。因此作为一种重要的前炎症细胞因子，MCP-1在炎症-胰岛素抵抗型-糖尿病的病理生理过程中起着重要作用。然而，Zietz等[12]研究却发现，T2DM患者体内MCP-1水平显著升高，但MCP-1-2518A/G基因型和等位基因频率与非糖尿病人群比较差异无统计学意义，与MCP-1水平也无相关性，提示MCP-1水平可能只是MCP-1-2518A/G基因型影响T2DM的发生和发展的部分原因，关于其完整和详尽的机制还有待进一步的研究。

综上所述，本研究从一定角度揭示了 CCL2 rs1024611基因多态性可能与浙江局部地区汉族人群T2DM发生相关，其中GG基因型可能是T2DM的保护性因素，G等位基因可能降低浙江局部地区汉族人群T2DM的风险，但由于T2DM属多基因遗传性疾病，每个易感基因的作用可能都是微小的，而且本研究的研究人群并非来自社区，虽然有明确的排除标准，但住院患者糖尿病并发症发生率显然大于一般人群，这对研究结果造成了一定的偏倚。因此，有必要扩大研究对象的数量，为进一步从基因水平揭示MCP-1基因与糖尿病的关系提供依据。

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（本文编辑：严玮雯）

Association of monocyte chemoattractant protein-1 gene polymorphism with risk of type 2 diabetes mellitus in Han population in Zhejiang province

MA Jiangbo,XU Xin,MA Gaigai,et al. Department of Endocrinology,Zhejiang Provincial People's Hospital, Hangzhou 310009，China

【 Abstract】 Objective To investigate the association of monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)gene rs1024611 (-2518A/G)polymorphisms with risk of type 2 diabetes mellitus(T2DM)in Han population of Zhejiang province. Methods A total of 208 patients with T2DM and 209 healthy control subjects in Han population of Zhejiang province were enrolled in this study.Genotyping wasperformed by polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism and subsequently confirmed by DNA sequencing.Odds ratio(OR)and 95%confidence intervals(CI)were calculated for the risk of genotypes and alleles. Results MCP-1 gene polymorphism rs1024611(-2518A/G)was conformed to the Hardy-Weinberg equilibrium.The statistical differences in the G allele(43.7%vs.55.7%,P＜0.01)and GG genotype(19.2%vs.33.5%,P＜0.01) were found between T2DM patients and controls.The GG genotype was associated with a decreased risk of T2DM(OR=0.201, 95%CI:0.077-0.526,P＜0.01). Conclusion The MCP-1 gene rs1024611(-2518A/G)may be associated with T2DM susceptibility in Han population of Zhejiang province;GG genotype may be the protect factor for T2DM and G allele may reduce the risk of T2DM.

Monocyte chemoattractant protein-1 Type 2 diabetes mellitus Single nucleotide polymorphism

310009 杭州，浙江省人民医院内分泌科（马江波、沈洁、黄青华）；浙江大学医学院附属儿童医院儿童保健科（许鑫）；浙江大学医学院附属第二医院心内科（马改改、施育平）

施育平，E-mail：shiyuping007@hotmail.com不一致，且针对汉族人群的该基因多态性缺少系统性研究，目前仅有Jing等[9]针对江苏地区人群（病例数416）进行过系统研究。笔者拟探讨CCL2 rs1024611基因多态性与浙江局部地区汉族人群T2DM易感性的关系，在不同人群中对该基因多态性与T2DM相关性进行验证，进一步探讨T2DM发生的病理生理机制。

2016-01-18）

2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）是一种由遗传因素和环境因素共同参与、相互作用所导致的慢性复杂代谢性疾病。近年来一些学者发现许多炎症因子与胰岛素抵抗、T2DM及其并发症的发生、发展密切相关，进而提出了T2DM的炎症学说，认为T2DM是一种慢性非特异性炎症过程[1-4]。单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）是炎症趋化因子CC亚族的一员，对各种炎性细胞尤其是单核/巨噬细胞具有趋化激活作用，研究发现MCP-1作为一种胰岛素反应因子，在炎症-胰岛素抵抗-T2DM的病理生理过程中起着重要作用[5]。人类CCL2基因位于染色体17q11.2-q12上，位于远端调控区的SNP位点rs1024611（-2518A/G）能影响MCP-1的表达[6]。近年来有国内外研究报道，MCP-1-2518A/G基因多态性与胰岛素抵抗、T2DM及其并发症相关[7-9]，然而研究结果尚