天台乌药散对输卵管的影响

李林潞，陈悦，赵维哲，王洋，柴玉卓，张胜

(北京中医药大学基础医学院，北京 100029)



天台乌药散对输卵管的影响

李林潞，陈悦，赵维哲，王洋，柴玉卓，张胜*

(北京中医药大学基础医学院，北京 100029)

目的：观察天台乌药散对输卵管阻塞模型SD大鼠输卵管的影响。方法：将正常SD雌性大鼠40只按体质量均衡和随机原则分为正常对照组、模型组、妇炎康组、天台乌药散组。正常对照组在大鼠输卵管局部注射生理盐水，模型组和两个实验组注射苯酚胶浆，手术9天后，正常对照组给予等量蒸馏水灌胃，妇炎康组给予7.3 g/(kg·d)妇炎康混悬液灌胃，天台乌药散组给予0.35 g/(kg·d)天台乌药散灌胃，1次/天，持续20天。第21天分离子宫，检测输卵管肌张力；HE染色观察各组大鼠输卵管和卵巢的损伤及修复情况。结果：正常对照组和妇炎康组离体输卵管肌张力明显高于模型组(P<0.01)， 天台乌药散组离体输卵管肌张力明显高于模型组(P<0.05)；妇炎康组及天台乌药散组大鼠输卵管及卵巢病理组织形态学较模型组有显著改变。结论：天台乌药散对于输卵管阻塞有明显的治疗作用，并可改善输卵管肌张力。

天台乌药散；肌张力；不孕症

世界卫生组织规定，夫妻双方性生活正常，1年未避孕未怀孕称为不孕症[1]。近年来，随着社会压力的增加，生活节奏的加快以及自然环境的恶化，我国不孕症的发病率呈现出上升趋势且逐渐呈现低龄化趋势[2]。不孕症已成为影响家庭和谐和社会稳定的医学问题[3]。在女性不孕的病因中，输卵管因素居首要地位，发生率约为43.6%，其原因与盆腔及生殖道感染、盆腔手术、流产等有关[4]。近年来中医发挥其整体观念，辨证论治的特点，在不孕症的辨证分型、治疗用药等方面取得了一定的进展，对不孕症的临床研究有一定的指导意义[5]。天台乌药散作为中医药学的经典方剂，用于治疗小肠疝气，但目前对其现代应用及其作用机制方面的报道较少，本研究观察了天台乌药散对输卵管阻塞模型SD大鼠的作用，并探讨其发挥作用的可能机制。

1 实验资料

1.1 材料

1.1.1 动物

SD大鼠40只，雌性，体质量(210±10)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号SCXK(京)2012-0001。实验期间饲养在三级动物室，温度(25±1)℃。

1.1.2 实验用药物

乌药、木香、小茴香、青皮、高良姜、槟郎、川楝子、巴豆(北京同仁堂中药店)；妇炎康丸(吉林省中研药业有限公司，国药准字：Z20025527，水蜜丸)，使用前研成粉末，配成0.14 g/ml(相当于成人1日用量4倍)的混悬液。

中药材经浸泡、煎煮、浓缩等处理使药物终质量浓度为含生药量0.73 g/ml；所得药液置4℃冰箱保存备用。

1.1.3 实验用试剂

苯酚胶剂液化苯酚(Amresco)5 ml，黄芪树胶(国药集团化学试剂有限公司)1 g，甘油(Genebio)4 ml，加蒸馏水至20 ml，配成25%的苯酚胶浆；二甲苯(北京化学试剂工厂)；LOCKE氏液：无水氯化钙(北京药理精细化学品有限公司)0.266 g/L，碳酸氢钠(北京化学试剂工厂)1.7 g/L， 氯化钠(北京化学试剂工厂)7.103 g/L，葡萄糖(北京化学试剂工厂)1.98 g/L， 氯化钾(中国上海试剂一厂)0.41 g/L， 磷酸二氢钾(北京红星化工厂)0.187 g/L， 六水合氯化镁(沪试)0.244 g/L。

1.1.4 仪器

显微镜(Olympus)；电子读数分析天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)；手术灯；剪刀；手术剪；眼科镊；止血钳；持针器；手术缝合针；线；纱布；1 ml、5 ml、10 ml注射器；烧杯；量筒；灌胃针；切片机(leizt)；电热恒温培养箱(湖北省黄石市医疗器械厂)。

1.2 分组及造模、给药

将动物按质量均衡和随机的原则分为正常对照组、模型组、妇炎康组、天台乌药散组。40只SD大鼠适应性饲养1周，于第8天以1%戊巴比妥钠4 ml/kg腹腔注射麻醉，减去下腹正中毛，碘酒，酒精消毒皮肤，由下腹部正中切口2.5 cm，暴露子宫。模型组、妇炎康组、天台乌药散组在距离卵巢1 cm处向卵巢方向进针缓缓注入25%苯酚胶剂0.04 ml，术毕，分层关腹，消毒术区，将其侧卧放入鼠笼中，待其自然苏醒。正常对照组，在同一部位注入0.04 ml生理盐水，其余操作同前，作为假手术对照组。手术9天后，进行灌胃，正常对照组和模型组给予等量蒸馏水灌胃，妇炎康组给与7.3 g/(kg·d)妇炎康混悬液灌胃，天台乌药散组给予0.35 g/(kg·d)天台乌药散灌胃，均1次/天，持续20天。

1.3 取材

各组动物于最后给药后第2天称体质量，断颈，距卵巢0.5 cm处分离、剪下1 cm长的输卵管。

1.4 肌张力测定

实验前先将适量的水注入恒温浴槽中，温度控制在39℃。麦氏浴皿中加入10 ml LOCKE氏液。另外用烧杯盛满LOCKE氏液，放在恒温浴槽内保温，以便在实验中更换浴管中的LOCKE氏液。将输卵管两端用4号手术线结扎，一端固定于含10 ml LODKE氏液(pH值为7.2～7.4)的麦氏浴皿底部(麦氏浴皿置于39℃恒温水浴槽中)，将浴槽充气连接换能器的输卵管前负荷为5 g，平衡10 min收缩平稳后记录90 min自发收缩。

1.5 输卵管切片HE染色

将输卵管肌条置于10%甲醛溶液中固定，石蜡包埋，常规HE染色，各级酒精脱水，二甲苯透明，树脂胶封固。光镜下观察各组大鼠输卵管组织形态学变化。

1.6 卵巢切片HE染色

将卵巢组织置于10%甲醛溶液中固定，石蜡包埋，常规HE染色，各级酒精脱水，二甲苯透明，树脂胶封固。光镜下观察各组大鼠卵巢组织形态学变化。

1.7 统计学处理

2 结果

2.1 各组大鼠子输卵管平滑肌张力比较

正常对照组和妇炎康组离体输卵管肌张力明显高于模型组(P<0.01)， 天台乌药散组离体输卵管肌张力明显高于模型组(P<0.05)。见表1。

表1 各组离体输卵管肌张力水平比较

注：与模型组比较，1)P<0.01，2)P<0.05。

2.2 各组大鼠输卵管切片HE染色

输卵管形态学观察，光镜下观察，可见输卵管的肌层和浆膜层并无明显差别，肌层与黏膜层结构分层明显，黏膜层差异较为明显，特别是黏膜上皮。正常对照组大鼠输卵管上皮细胞多呈单层柱状较为整齐排列，部分上皮细胞变性、坏死、脱落，并见有淋巴细胞浸润、嗜酸性粒细胞(图1-1)。模型组大鼠输卵管黏膜层损伤较为严重，大量上皮细胞变性、坏死、脱落，纤毛短小、稀疏、部分脱落，上皮细胞相对疏松排列杂乱，胞核排列不规整，核仁不清晰，并见有淋巴细胞浸润、嗜酸性粒细胞(图1-2)。妇炎康组大鼠输卵管黏膜上皮多呈单层柱状整齐排列，纤毛细胞游离面纤毛长而密集，核仁清晰，胞质丰富，少量上皮细胞变性脱落，并见有淋巴细胞浸润、嗜酸性粒细胞(图1-3)。天台乌药散组大鼠输卵管黏膜上皮多呈单层柱状整齐排列，纤毛细胞游离面纤毛长而密集，核仁清晰，胞质丰富，部分上皮细胞变性脱落，并见有少量淋巴细胞浸润、嗜酸性粒细胞(图1-4)。

图1 各组大鼠输卵管切片HE染色图

2.3 各组大鼠卵巢切片HE染色

卵巢形态学观察，光镜下观察，正常对照组可观察到大量黄体、成熟卵泡，少量闭锁卵泡。卵母细胞可见清晰的细胞核，其周围由颗粒细胞构成，颗粒细胞形态正常，分布规则，无明显坏死脱落(图2-1)。模型组的黄体数目较少，成熟卵泡数目较少，闭锁卵泡数目较多。间质小血管扩张充血以及红细胞渗出。卵母细胞核不清晰，卵泡腔颗粒层颗粒细胞大量增生，并见有大量坏死，脱落(图2-2)。妇炎康组的黄体数目增加，成熟卵泡数目增加，闭锁卵泡数目明显减少。卵母细胞核不清晰，泡腔颗粒层颗粒细胞增生，并见有部分坏死，脱落(图2-3)。天台乌药散组的黄体数目明显增加，成熟卵泡数目明显增加，闭锁卵泡数目明显减少。卵母细胞核不清晰，卵泡腔颗粒层颗粒细胞增生，并见有部分坏死，脱落(图2-4)。

图2 各组大鼠卵巢切片HE染色图

3 讨论

目前输卵管因素已经成为造成女性不孕的主要原因，占女性不孕症的30%～50%。西医认为其主要原因为慢性输卵管炎症，输卵管结核，盆腔、宫腔术后黏连等[6]。中医学对于输卵管阻塞造成成的妇科炎症无专门称谓，但根据其临床特点可归属于“癥瘕”“妇人腹痛”“无子”等范畴[7]。西医以抗炎、反复输卵管通液、腹腔镜下黏连分离等治疗为主，但治疗效果并不满意，且反复输卵管通液或腹腔镜下黏连分离会导致一系列手术并发症甚至发生宫外孕，一些患者对手术难以接受[8]。而近几年的研究表明中医药能明显改善输卵管内环境，促进输卵管功能的恢复，对盆腔慢性炎症有很好的疗效，对输卵管性不孕有很好的治疗作用，且副作用小，易被不孕症患者接受[9-13]，同时中药提高卵巢功能，治疗卵巢早衰、多囊卵巢综合症等疾病效果明显[14-21]。

天台乌药散最早出自《圣济总录》，原名乌药散[22]。本方由天台乌药、木香、小茴香、青皮、高良姜、槟郎、川楝子、巴豆等组成，具有行气疏肝，散寒止痛之功，常用于治疗寒滞肝脉之小肠疝气，少腹引控睾丸而痛，偏坠肿胀，苔白，脉弦；亦治妇女痛经，瘕聚等属寒凝气滞者。常用于治疗腹股沟斜疝和直疝、睾丸炎、附睾炎、胃肠功能紊乱等。天台乌药散以辛温之乌药为君，疏肝行气，散寒止痛，理脾胃元气。又用青皮疏肝、木香行气、高良姜暖下、茴香散寒，从而加强了乌药行气散寒之功。槟榔下气导滞，直达下焦，有破坚推荡之力。巴豆与川楝子同用且在用法上均被炒用，既增强了行气疏肝之功用，又避免了川楝子苦寒之性。有关本方的应用报道并不多，现有的临床报道指出天台乌药散加减在治疗前列腺炎、慢性阑尾炎、妇科炎症等疾病中有一定疗效[23-25]。

妊娠是新个体产生的过程，包括受精与着床、妊娠的维持、胎儿的生长等，而卵巢及输卵管功能的正常是不可缺少的要素。本实验在成功建立输卵管阻塞的基础上发现，天台乌药散汤剂的灌服可改善大鼠输卵管黏膜层损伤，并改善卵巢功能，增加黄体及成熟卵泡数量。同时现代研究证实卵子需在输卵管的运动和纤毛的作用下逐渐移动，其中输卵管平滑肌收缩活动是卵子在输卵管内转运的主要推动力，故输卵管的肌张力在很大程度上影响排卵和受孕。本实验采用临床上常用的妇炎康作为治疗效果的参考，实验结果显示天台乌药散组输卵管阻塞程度、输卵管肌张力及卵巢功能的改善情况均略低于妇炎康组，但本方完全按照记载使用，不排除对本方进行加减后可以治疗妇科炎症的可行性。综上所述，天台乌药散在治疗妇科炎症方面具有一定的应用价值，在对其进行加减后的治疗效果令人期待，有待进一步研究。

[1] 刘燕,邹小娟,陈家旭,等.基于内容分析法的不孕症中医证候文献研究[J].中华中医药杂志,2015,30(7):2345-2348.

[2] 彭晓丽.不孕症患者年轻化的高发因素及护理干预[J].世界最新医学信息文摘,2015,15(28):209.

[3] 付泽明.女性不孕症病因的研究进展[J].中国计划生育学杂志,2014,22(6):430-432.

[4] 焦岩,刘云.女性不孕症658例病因分析[J].现代医药卫生,2012,28(1):46.

[5] 杨业军.不孕症的病因分析及中医辨证施治[J].航空航天医学杂志,2014,25(11):1586-1587.

[6] 旷红艺,朱莉莉.中西医结合治疗输卵管阻塞性不孕的临床观察研究[J].光明中医,2014,19(3):505-507.

[7] 贾磊,王希浩.中医药治疗慢性盆腔炎实验研究概述[J].中医研究,2011,24(10):73-76.

[8] 祝燕莉,胡晓华.活血通管汤治疗输卵管阻塞性不孕症临床研究[J].中医学报,2012,27(4):504-505.

[9] 张少聪,周伟生.名老中医验方治疗输卵管阻塞性不孕症概况[J].中华中医药学刊,2010,28(3):489-491.

[10] 康开彪,潘文.中医药治疗输卵管阻塞性不孕症的现状[J].甘肃中医,2010,23(12):73-74.

[11] 刘丽,白椿宇,李世大,等.膈下逐瘀冲剂对输卵管炎性不孕大鼠模型Bcl-2和ICAM-1蛋白表达的影响[J].中医药信息,2015,32(3):43-45.

[12] 杨璇,李元琪,李伟莉,等.徐志华治疗输卵管阻塞性不孕症60例总结[J].安徽中医药大学学报,2014,33(3):25-27.

[13] 鲁琳,许丽绵,严英,等.中医标本同治法治疗不同证型输卵管阻塞性不孕症的疗效分析[J].辽宁中医杂志,2012,39(6):1009-1013.

[14] 罗慧慧,李大剑.卵巢早衰的中医药治疗近况[J].云南中医中药杂志,2014,35(10):86-88.

[15] 高金金,侯丽辉,李妍.应用补肾化痰法治疗多囊卵巢综合征的研究进展[J].中医药信息,2016,33(2):112-114.

[16] 贾翠敏.中药加艾灸治疗脾肾阳虚型多囊卵巢综合症不孕60例临床观察[J].中医临床研究,2012,4(16):47-48.

[17] 李兰,左冬冬.自拟理坤汤联合克龄蒙对肾虚型卵巢早衰患者性激素水平的影响[J].中医药信息,2015,32(4):90-92.

[18] 李艳秋，苑程鲲，侯丽辉.侯丽辉教授诊疗多囊卵巢综合征的临证经验总结[J].中医药学报，2016,44(1):115-117.

[19] 匡洪影，冯文婷，徐芳,等.中医药治疗多囊卵巢综合征不孕症治疗的进展及优势[J].中医药学报，2015,43(5):112-114.

[20] 鲁彩霞，苑程鲲，侯丽辉.补肾化痰方治疗胰岛素抵抗PCOS的临床研究[J].中医药学报，2015,43(6):58-61.

[21] 李慕白，刘畅，匡洪影，等.小檗碱对多囊卵巢综合征患者子宫内膜胰岛素信号分子的调节作用[J].中医药学报，2016,44(2):30-32.

[22] 聂晶.天台乌药散考源[J].江西中医学院学报,2001,13(2):65.

[23] 程可佳.天台乌药散治疗Ⅲ型前列腺炎临床观察[J].中国医药导报,2009,6(34):52-53.

[24] 徐恩歧,王乃峰,谢永侠.天台乌药散治疗慢性阑尾炎40例[J].齐鲁护理杂志,2004,10(9):721.

[25] 孙莲,苏静芝.天台乌药散加减治疗妇科炎症100例体会[J].中国社区医师(医学专业),2010,12(7):101.

Effect of Tiantai Wuyao San on Fallopian Tube

LI Lin-lu,CHEN Yue,ZHAO Wei-zhe,WANG Yang,CHAI Yu-zhuo,ZHANG Sheng*

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To observe the effect of Tiantai Wuyao San on fallopian tubes in SD rat models. Methods:Forty female SD rats were randomly divided into four groups: normal group, model group, Fuyankang group and Tiantai Wuyao San group. Rats in normal group received the injection of saline into both sides of their tubes. Rats in other three groups were injected with phenolatabrine paste. Nine days after operation,normal group and model group were given the same volume of distilled water by intragastric administration;Fuyankang group was treated by Fuyankang suspension at the dosage of 7.3 g/(kg·d);Tiantai Wuyao San group was treated by Tiantai Wuyao San at the dosage of 0.35 g/(kg·d) respectively,with once a day and for 20 days. On the 21stday, animals were sacrificed and tubes were separated solely and their smooth muscle contraction force was measured. After tubes were removed, paraffin section and HE staining were made. Results:There was a significant difference between normal group and Fuyankang group according to fallopian tube smooth muscle contraction (P<0.01),and there was a significant difference between Tiantai Wuyao San group and model group (P<0.05). Compared with those in model group,the fallopian tube and ovary pathological histology in Tiantai Wuyao San group and Fuyankang group were significantly improved. Conclusion:Tiantai Wuyao San has an obvious effect in the treatment of fallopian tube obstruction, and can improve tubal smooth muscle contraction.

Tiantai Wuyao San; Muscle contraction;Infertility

2014年国家级大学生创新创业训练计划项目(No.201410026054)

李林潞(1992-)，女，北京中医药大学2011级中西医结合临床专业学生。

张胜*(1963-)，男，副教授，主要研究方向：心脏生理学。

2016-03-18

R285.3

A

1002-2406(2016)06-0031-04

修回日期：2016-04-10