“附子走而不守”性能表征的实验研究

褚雪镭，杨兴言，甄蓉蓉，王彦芳，秦林

(山东中医药大学，山东 济南 250355)



“附子走而不守”性能表征的实验研究

褚雪镭，杨兴言，甄蓉蓉，王彦芳*，秦林

(山东中医药大学，山东 济南 250355)

目的：通过比较观察附子以及附子配伍干姜后对正常小鼠的影响，研究“附子走而不守”的性能表征。方法：采用小鼠肛温、抗疲劳游泳、毒性实验、心电图检测以及温度趋向性等实验，比较观察正常空白组、附子组、附子干姜组(2:1、1:1组)对正常小鼠上述实验指标的影响。结果：与正常空白组比较，附子组平均体温明显降低，平均体能减弱，抗疲劳游泳时间缩短，心率、心电图幅度均呈下降趋势，LD50全部死亡。而附子配伍干姜则能明显改善其反应。结论：附子“走而不守”之性，体现在使正常老鼠的代谢加快，出汗量增加，从而导致肛温、体能、心率降低，甚至死亡等毒性表征。提示临床单用本品需尤为谨慎。

附子走而不守；小鼠肛温；抗疲劳游泳；附子致死毒性；温度趋向性

附子为毛茛科植物乌头(AconitumcarmichaeliDebx)的子根的加工品。味辛甘、性大热、有毒，归心、肾、脾经，具有回阳救逆，补火助阳，散寒止痛之功效。对于“附子走而不守”之性能，历代医家早有论述，如元代王好古言：“附子，入手少阳三焦、命门之剂，浮中沉，无所不至，味辛大热，为阳中之阳，故行而不止，非若干姜止而不行也”，并曰“附子善走，过于发散。”(《汤液本草》)；朱震亨谓：“附子之性走而不守，但取其健悍走下之性，以行地黄之滞，可致远尔。”(《丹溪心法》)；清代汪昂也有“附子辛甘有毒，大热纯阳。其性浮而不沉，其用走而不守，通行十二经，无所不至。”(《本草备要》)之言。近年来诸多学者从药理、毒理实验以及化学成分检测等方面，对附子进行了研究[1-9]，但是如何认识附子“走而不守”，其临床或实验反应如何，仍有待于进一步明确。

本项目在前人研究的基础上，以中医药理论和药理学方法为指导，以附子与附子配伍干姜做比较，探讨了“附子走而不守”的性能表征，以期为临床提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物

健康昆明种系小鼠，雌雄各半，体质量(30±5)g。购于山东大学实验动物中心。动物饲养于清洁级动物室，明暗周期12 h，自由饮食饮水，室内温度22～26℃，湿度50%～60%。

1.2 实验药物

附子(Radix Aconiti Praeparata)，产地四川，购于济南漱玉平民大药房有限公司；干姜(rhizome zingiberis)，产地四川，购于济南漱玉平民大药房有限公司。经山东中医药大学中药教研室周凤琴教授鉴定，符合《中国药典》标准。

1.3 实验仪器

常用手术器械、MPA-2002生物信号分析系统(上海奥尔科特生物科技有限公司)；电子温度计(东莞市黄江百绿电子厂，KD-204)；电子天平(北京赛多利斯仪器系统有统公司，BS223S型)；心电图仪(上海奥尔科特生物有限公司生产的MPA2002生物信号分析系统)；动物温度趋向性行为学智能检测系统(山东中医药大学自制)。

1.4 实验方法

1.4.1 中药水煎剂的制备

附子水煎液：取附子30 g，加8倍蒸馏水煎煮，至口尝无麻后过滤，经65℃水浴浓缩成100%的附子水煎液,即1 ml水煎液含1 g附子。

附子干姜2:1水煎液：取附子20 g、干姜10 g，制备原理同附子水煎液。

附子干姜1:1水煎液：取附子15 g、干姜15 g，制备原理同附子水煎液。

水煎液放入冰箱储存。

1.4.2 实验动物分组

实验小鼠称重、编号并按随机数字表法分为4组：正常空白组(简称空白组)、附子组、附子干姜2:1组、附子干姜1:1组，10只/组。

1.4.3 小鼠体温测定

在实验前12 h对小鼠禁食，排净排泄物，防止检测体温有误。空白组、附子组、附子干姜2∶1组、附子干姜1∶1组小鼠分别给予生理盐水、附子水煎液、附子干姜2∶1水煎液、附子干姜1:1水煎液灌胃，根据小鼠体质量计算给药量。给药剂量为0.6 ml/20 g。

给药30 min后，用电子体温计检测小鼠直肠温度。检测前，先将胶布缠在体温计表头2 cm位置，以防止在检测时因体温表插入深浅不同而引起误差。

1.4.4 小鼠抗疲劳游泳实验

水煎剂灌胃30 min后，将小鼠放入水温30℃、水深30 cm的水槽中游泳，记录小鼠游泳时间。用木棒轻轻搅动水面保证小鼠持续游泳。小鼠放入水槽时开始计时，当小鼠沉入水中不再浮出水面超过10 s时停止计时。

1.4.5 小鼠致死毒性实验(LD50实验)

先进行预实验，得出小鼠0和100%死亡率的附子剂量。

取100只小鼠，随机分成空白对照组和9个剂量组，每组雌雄各5只。禁食12 h后一次性给予0.9%的生理盐水和不同剂量的附子水煎液灌胃(0.3 ml/10 g)，连续观察7 d，记录小鼠的毒性反应症状、死亡数和死亡时间。

1.4.6 小鼠心电图检测

水煎剂灌胃小鼠，观察小鼠的死亡时间和死亡过程中心电图的变化。

心电图记录：记录小鼠Ⅱ导联心电图。增益1000，滤波50，时间常数0.1 S。检测心电图心率、R波幅度、心电图漏博和R波倒置状况。

1.4.7 温度趋向性实验

本实验在冷热板示差法[10]的基础上加以改进，采用动物温度趋向性行为学智能检测系统，观察小鼠温度趋向性行为。室温(24±2)℃下，设置自动温度控制系统不同温区的底板温度(低温板25℃，高温板40℃)，待冷热板的温度达到预设温度，小鼠灌胃30 min后，分别将各组小鼠放入相应的冷热板中，监测其冷热板冷热温区趋向活动, 并对活动轨迹进行全程记录。

停留比例(%)=高温区停留时间(s)/总监测时间(s)×100%

1.5 统计学处理

2 实验结果

2.1 各组小鼠肛温测定结果

体温的高低标志着机体热量代谢的盈亏。实验过程中肉眼观察，给药30 min后，附子组小鼠皮毛和垫料明显湿润，出汗量、饮水量、尿量明显多于空白组和配伍组。附子组小鼠肛温与空白组和配伍组比较均有显著差异。提示附子降低小鼠肛温可能与出汗量较多有关。见表1。

表1 对小鼠肛温的影响

注：与正常空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与附子干姜2∶1组比较，#P<0.05；与附子干姜1∶1组比较，&&P<0.01。

2.2 小鼠抗疲劳游泳实验结果

小鼠游泳时间的长短可以反映小鼠抗疲劳的程度[11]。给药30 min后进行游泳。结果发现：附子组小鼠游泳时间明显短于对照组和配伍组，与对照组和配伍组比较差异均有显著性意义，提示附子缩短了小鼠抗疲劳游泳的时间，附子组小鼠明显易疲劳。见表2。

表2 对小鼠抗疲劳游泳的影响

注：与正常空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与附子干姜2∶1组比较，#P<0.05；与附子干姜1∶1组比较，&&P<0.01。

2.3 附子急性毒性实验

通过LD50实验发现，附子灌胃后小鼠全部死亡，但死亡时间差异较大，最短20 min，最长10 h,大约平均6 h。其致死原因，可能与小鼠大量出汗，导致阳气外脱有关。

2.4 附子对小鼠心电图的影响

2.4.1 对心率的影响

实验结果显示随灌胃时间的延长，附子组小鼠心率下降最明显，与正常空白组和配伍组比较有明显差异。结果见图1。

图1 灌胃后小鼠心率随时间的变化注：与空白组比较， **P<0.01；与附子干姜2∶1组比较，##P<0.05；与附子干姜1∶1组比较，&&P<0.01。

2.4.2 对幅度的影响

图2显示，附子组小鼠心电图振幅变化大，呈显著下降趋势，与时间成正比。差异有显著性意义。

图2 灌药后小鼠心电图幅度随时间的变化注：与空白组比较，**P<0.01；与附子干姜2∶1组比较，##P<0.05；与附子干姜1∶1组比较，&&P<0.01。

2.5 对小鼠温度趋向行为的影响

图3显示,附子组小鼠热区停留比例与正常空白组相近。配伍组热区停留比例明显降低，小鼠趋寒性感知增强。而与附子干姜配伍组比较，附子组小鼠高温区停留比例>50%，提示附子组小鼠体内热量不及配伍组，其结果也能反应“附子无姜不热”、附子“走而不守” 的性能特点。

图3 附子及附子配伍干姜水煎剂对正常小鼠热区停留比例的影响注：与空白组比较， **P<0.01；与附子干姜2∶1组比较，##P<0.05；与附子干姜1∶1组比较，&&P<0.01。

3 讨论

综上所述，附子能明显增加正常小鼠出汗量，表现为降低体温，减弱体能，使心电图异常甚至死亡等毒性反应。说明对于正常小鼠，附子“走而不守”的性能，主要体现在附子对于机体的毒性反应。实验证明附子“走而不守”之性可能因大辛大热，驱汗外泄，导致阳气外脱，故临床单用本品需尤为谨慎。而配伍干姜后，小鼠体温、体能、心电图等呈平稳趋势，毒性明显减弱，小鼠耐寒性明显增加。

附子“走而不守”，一方面体现于毒性表征，表现在体温、体能降低，心率减慢甚至亡阳死亡。以往研究也证实，附子主要作用于中枢神经系统、心脏、肌肉组织[12]，应用不当可能导致严重后果，本项目研究与之相符。但是另一方面，中医临床通过与相关药物配伍，附子“走而不守”之性又表现了积极意义。如附子与熟地黄配伍，可制熟地黄之滋腻，使熟地黄补而不滞；附子与干姜配伍可回阳救逆，抢救亡阳证，故有“有姜无附，难收斩将夺旗之功; 有附无姜，难取坚壁不动之效”之言(《本经疏证》)。因此，附子临床用药要配伍严谨，既要防止和制约其走散之性，又要善于利用附子“走而不守”之性，通过合理配伍以趋利避害。

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山东中医药大学大学生研究训练计划(SRT)项目(No.2015401);山东中医药大学实验教学研究课题(No.2014-011)

褚雪镭(1995-)，女，山东中医药大学2013级中西医临床医学专业学生。

王彦芳*(1984-)，女，讲师，主要研究方向：中西医结合基础。

2016-05-12

R285.5

A

1002-2406(2016)06-0005-03

修回日期：2016-06-10