“募络配穴”针刺干预对急性缺氧应激损伤的保护作用*

李永平，曹志东，张 莹，王文娟，洒玉萍，武 娟

(青海大学，青海 西宁 810000)



“募络配穴”针刺干预对急性缺氧应激损伤的保护作用*

李永平，曹志东，张 莹，王文娟，洒玉萍，武 娟

(青海大学，青海 西宁 810000)

目的 探讨手厥阴心包经“募络配穴”针刺干预对急性缺氧应激损伤的影响及其作用机制。方法 采用常压密闭缺氧和高原低压缺氧实验动物模型，观察穴位针刺干预对常压密闭缺氧实验小鼠存活时间；检测高原低压缺氧实验大鼠血清LD、MDA含量和LDH、SOD 活性，并观察对模型大鼠心脏组织显微结构的影响。结果 针刺干预膻中、内关有明显的抗缺氧作用，与对照组比较，可显著延长常压缺氧小鼠的存活时间，降低大鼠血清LD、MDA含量、LDH活性，升高SOD活性，改善心肌组织结构。结论 针刺膻中、内关，具有提高实验动物缺氧耐受的作用， 能预防高原缺氧对机体的损伤，可能与血清SOD活性提高、膜脂质过氧化产物MDA含量降低、机体乳酸积累减少有关。为“募络配穴”治疗缺氧相关疾病提供了依据。

募络配穴 针刺 干预 缺氧 保护

配穴法为针灸疗效的关键因素之一，为临床医生针灸组方常用的方法，体现了穴位之间的相互联系及穴位的特异性疗效。募穴是脏腑之气汇聚于胸腹部的腧穴，络穴沟通表里两经，主治表里两经病证。募穴和络穴在临床上单独应用可以治疗相应脏腑的病证，查阅文献未见两者配伍应用的报道。本研究根据中医经络理论对急性缺氧的认识，立足“气虚血瘀”的基本病机，选择最先受累的脏器心为研究抓手，取手厥阴心包的募穴膻中和络穴内关配伍，组成“募络配穴法”，探讨“募络配穴”针刺干预对急性缺氧的影响及其作用机制。探明募络配穴的协同效应，为这一新的的配穴方法临床应用提供实验依据。为高原缺氧研究提供新的干预措施。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

KM小鼠24只，雌雄各半，体重20±2 g，购自甘肃中医学院科研实验中心，许可证号SCXK(甘)2011-0001；SD大鼠42只，雌雄各半，体重200±20 g，购自西安交通大学医学院实验动物中心，许可证号SCXK(陕)2012-003。

1.1.2 主要试剂

LD试剂盒、LDH试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒(南京建成生物工程公司)；钠石灰(上海纳辉干燥试剂厂)。

1.1.3 主要仪器

RT-6000型酶标仪、RT-3000自动洗板机(深圳雷杜)，TU-1810紫外分光光度计(普析通用)，TGL16台式冷冻离心机(湖南湘仪)，TH-86-150-WA超低温保存冰箱(北京天寒)，YDS-10型液氮罐(成都金凤)。

1.2 方法

1.2.1 穴位针刺干预对常压密闭缺氧小鼠存活时间的影响

取小鼠24只，适应饲养3日后分为：①空白对照组；②非穴位针刺组；③穴位针刺组，非穴位针刺组选择一个非穴位部位每天针刺1次，穴位针刺组根据“动物针灸穴位图谱”选择膻中、内关每天采用传统补法针刺并留针10 min，于末次针刺后 1 h将各组小鼠分别放入装有5 g钠石灰的125 mL广口瓶中(每瓶只放1只小鼠)，用凡士林涂抹封闭，使之不漏气，立即计时至小鼠停止呼吸为止，记录小鼠存活时间。

1.2.2 穴位针刺干预对急性高原缺氧模型大鼠相关生化指标的影响

取42只SD大鼠，适应饲养3日后分为：低海拔对照组(12只、在青海大学医学院中医药省级重点实验室饲养)；高海拔急性缺氧组(共30只，运往青海省果洛州达日县造模，海拔：4100m)。高海拔急性缺氧组又分为缺氧模型组、非穴位针刺组(非穴位部位针刺)、穴位针刺组(毫针针刺膻中穴、内关穴)，每组10只。非穴位针刺组、穴位针刺组在西宁(海拔：2250m)先针刺7 d，然后将缺氧实验大鼠运至青海省果洛州达日县(海拔：4100m)行实地自然环境造模。在缺氧造模的同时继续针刺治疗。针刺干预3 d即用20%乌拉坦(20g 溶于100mL 蒸馏水，剂量：1mL/200g)麻醉大鼠后，将大鼠固定于泡沫板，用图钉固定四肢。腹主动脉采血，离心(4000r/min)血清，放入冻存管，保存在液氮中，运回实验室通过ELISA法检测大鼠血清中乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)等生化指标，探讨针刺干预对高原缺氧的保护作用。

1.2.3 穴位针刺干预对急性高原缺氧模型大鼠心脏组织显微结构的影响

通过大鼠心脏组织病理切片，观察急性高原缺氧对模型大鼠心脏组织肌纤维、小血管、细胞及细胞器肿胀破损情况，反映针刺干预对高原缺氧大鼠的保护作用。

1.2.4 统计方法

2 结果

2.1 穴位针刺干预对常压密闭缺氧小鼠存活时间的影响

Table 1 Effect of acupuncture intervention on the survival time of mice in normal pressure airtight induced ±s)

续表：

组别n存活时间(min)穴位针刺组810．15±1．09▲F7．476P0．004

与空白组比较，▲P<0.01.

表1结果显示，穴位膻中、内关针刺预处理有明显的抗缺氧作用。与空白对照组比较，可显著延长常压缺氧小鼠的存活时间(P<0.01)。

2.2 穴位针刺干预对急性高原缺氧模型大鼠相关生化指标的影响

Table 2 Effects of acupuncture intervention on the serum LD MDA content and LDH SOD activity in acute high altitude ±s)

与低海拔对照组比较，*P<0.001；与模型组比较，▲P<0.05、▲▲P<0.001.

表2结果显示，与低海拔对照组相比，缺氧模型组大鼠血清LD、MDA含量明显升高，LDH、SOD 活性显著升高(P<0.001)。穴位膻中、内关针刺组与缺氧模型组比，大鼠血清LD、MDA 含量显著降低(P<0.001)，LDH活性显著降低(P<0.05)，SOD 活性显著升高(P<0.001)。

2.3 穴位针刺干预对急性高原缺氧模型大鼠心脏组织显微结构的影响

a b

c d

a：低海拔对照组大鼠心肌组织结构、肌纤维排列整齐(×400)；b、c：模型组、非穴位针刺组大鼠心肌组织结构、心肌肌纤维间距增加，出现波浪状收缩，同时伴有间质水肿，肌纤维出现断裂(×400)；d ：穴位针刺组大鼠心肌组织结构、心肌肌纤维出现轻微的波浪状收缩，未见肌纤维断裂

图1 穴位针刺干预对急性高原缺氧模型大鼠心脏组织显微结构的影响

Figure 1 Effects of Acupuncture intervention on the myocardial ultrastructure of experimental mice of acute high altitude hypoxia

3 讨论

缺氧是一种普遍的生理应激，细胞对缺氧应激反应是一个复杂的、精细的调控过程，经历一系列生物学应答反应的改变，通过引起蛋白组和基因组水平的改变，调控维持氧平衡所必需的相应蛋白的表达，激活无氧代谢以及其他信号通路，调控细胞分化、凋亡和坏死等过程。[1-2]

高原环境是一个“天然缺氧实验室”，将大鼠暴露在高海拔缺氧环境中，细胞内ATP消耗， 酶活力下降，有氧呼吸产生的ATP量减少。为弥补能量缺失，糖酵解作用加强，作为催化糖酵解环节中丙酮酸转化为LD的酶，乳酸脱氧酶LDH活力在缺氧后显著提高，同时LD累积，含量提高[3-4]。缺氧导致机体总抗氧化能力下降，体内产生大量自由基，引起强烈的脂质过氧化作用并产生大量的脂质过氧化产物MDA，使细胞受到损伤，组织器官功能下降，刺激SOD活性增高，以清除自由基代谢产物， 但随着缺氧损伤的进行，产生的自由基可直接损伤抗氧化酶，使SOD等酶活力降低[5-6]。现有资料表明，急性缺氧LDH和SOD的活力可以增高或降低[7-9]，所得矛盾结果的原因可能和动物种属的不同，缺氧严重程度以及实验条件的差异有关。本研究显示，穴位膻中、内关针刺干预有明显的抗缺氧作用，对缺氧大鼠心肌具有一定的保护作用。其作用机制可能与降低缺氧大鼠耗氧量，使缺氧心肌LD的累积减少，提高SOD活性， 减轻自由基过量生成与脂质过氧化作用，减轻缺氧所造成的心肌组织病理学损伤等有关。

急性缺氧应激损伤在中医学中无相对应的病名，根据不同病情阶段的临床表现，可以将其归属中医学的“心悸”“胸痹”“头痛”“眩晕”“水气”“血证”等，属于中医气虚症范畴，中医学认为，气虚无力，血运失常，在高原低压缺氧数小时内就会产生急性气滞血瘀证[10-11]。根据其发病机制，治疗主要以补气推动血气运行为核心。中医认为心主血脉。因此，本研究选择手厥阴心包经的募穴膻中和络穴内关配伍，提出“募络配穴”这一新的配穴方法，探讨穴位针刺干预对缺氧应激损伤的保护作用及其作用机制。募穴是脏腑之气汇聚于胸腹部的腧穴，膻中作为心包募穴，又是八会穴之气会，善治一切气病，具有补上焦、宽胸膈、降气通络之功效[12]。络穴沟通表里两经，主治表里两经病证，内关穴作为心包经络穴，通过络脉与三焦经直接相贯通，络心系，代心行事， 其功能多表现在心主血脉，着重治疗心血管疾病。内关又是八脉交会穴之一，通于阴维脉，在胸腹部与六经相互维系，凡邪犯心包，影响三焦气机紊乱的病证皆可取本穴[13]。本实验结果显示，手厥阴心包经“募络配穴”针刺干预具有很好的抗缺氧作用，对急性缺氧应激损伤心肌具有良好的保护作用，为“募络配穴”针刺干预法的临床应用提供了实验依据。

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The protective effects of “Combination of Mu and Luo Acupoints” acupuncture intervention in acute hypoxia stress injury*

Li Yongping，Cao Zhidong，Zhang Ying，Wang Wenjuan，Sa Yuping，Wu Juan

(Qinghai University，Xining，Qinghai 810000)

Objective To discuss the effect of pericardium meridian “Combination of Mu and Luo Acupoints” on acute hypoxia stress injury and its mechanism.Methods Using experimental animal model of normal pressure airtight hypoxia and plateau low pressure hypoxia.To observe the survival time of mice after acupuncture intervention for normal pressure airtight hypoxia.To test the serum LD MDA content and LDH SOD activity in experimental mice of plateau low pressure hypoxia and to observe the influence on the myocardial ultra-structure.Results The acupuncture intervention RN17 and PC6 acupoint showed obvious effect on hypoxia.To compare with control group.It significantly prolonged the survival time of the mice underwent normal pressure hypoxia.It reduced the serum LD MDA contents and the activity of LDH.Moreover，it increased the SOD activity. It could improve the structure of myocardial tissue.Conclusion The acupuncture RN17 and PC6 acupoints can increase the hypoxia tolerance and prevent the body injury because of plateau hypoxia.It may be related to the increase of SOD activity in serum，the MDA contents decrease in membrane lipid peroxidation and the lactic acid accumulation of body.It provides the basis for “Combination of Mu and Luo Acupoints” treating oxygen related diseases.

Combination of Mu and Luo Acupoints Acupuncture Intervention Hypoxia Protection

*：青海省卫计委中藏医药研究项目(项目编号：2015105)；青海大学中青年科研基金项目(2014-QYY-7) 李永平(1978～)，男，汉族，甘肃籍，副教授，硕士生导师

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A

10.13452/j.cnki.jqmc.2016.03.003

2016-02-08