托吡酯对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

朱晓峰 徐 耀 张桁忠(通讯作者)

苏北人民医院神经内科 扬州 225001



托吡酯对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

朱晓峰 徐 耀 张桁忠(通讯作者)

苏北人民医院神经内科 扬州 225001

目的 分析托吡酯对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响。方法 随机双盲法将36只雄性SD大鼠分为3组，各12只，通过线栓法形成脑缺血再灌注模型，A组大鼠行假手术，B组大鼠行8 mg/mL托吡酯治疗，A组、C组(脑缺血再灌注)则于同时间点给予10 mL/kg生理盐水干预，比较B、C 2组大鼠神经功能评分，同时比较3组大鼠脑组织Glu、GABA、GABA/Glu水平。结果 A组大鼠无神经功能缺损症状发生，B组神经功能评分为(2.90±0.92)分，显著高于C组的(1.55±0.74)分，差异有统计学意义(P<0.001)。3组大鼠Glu、GABA、GABA/Glu水平两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 托吡酯能明显促进脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能改善，可能是通过抑制Glu水平，增多GABA含量达到神经保护的目的。

托吡酯；脑缺血再灌注；大鼠模型；神经功能

相关研究发现，γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)在缺血性损伤中起重要参与作用，前者为中枢系统重要抑制性神经递质，且它由Glu脱羧而成，两者于大脑皮质及海马神经元中共存[1]。为此可将GABA、Glu作为神经保护的可能作用机制之一。托吡酯作为临床一种常见抗癫痫药物，近年来较多研究发现它能明显提高抑制性递质GABA功能，拮抗Glu相关受体亚型，对脑损伤神经保护功能明显，同时可明显减少其毒性作用[2]，理论上可用于脑损伤后神经保护。鉴于对人类的保护，本研究对雄性SD大鼠进行实验，探讨托吡酯对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响，以为临床脑缺血疾病治疗提供参考。报告如下。

1 材料与方法

1．1 材料 选择36只健康雄性SD大鼠，由扬州大学提供，质量282～322 g，平均(295.5±10.2)g。随机双盲法将大鼠分为A组(假手术)、B组(缺血再灌注大鼠，托吡酯干预)与C组(缺血再灌注大鼠，生理盐水注射)，各12只。

1．2 方法 通过线栓法完成脑缺血再灌注大鼠模型，具体操作：3 mL/kg水合氯醛(浓度10%)于大鼠腹腔注射，成功麻醉后于颈正中行切口，颈外动脉远端、颈总动脉近端(活结)均由4-0丝线结扎，然后将3/0号单股尼龙线(事前将线顶端烧钝)由颈外动脉插入颈内动脉，栓线深度19～21 mm，待大脑中动脉起始端被阻断后于颈外动脉近分叉处结扎固定线栓，缝合皮肤。缺血120 min后抽出线栓，同时将颈总动脉活结松开，形成缺血再灌注模型。A组假手术，除开不插线，其他操作相同。B组大鼠在插线、拔线时行8 mg/mL托吡酯(西安杨森制药有限公司生产，国药准字H20020555)腹腔注射，A组、C组大鼠则于相同时间点行10 mL/kg生理盐水腹腔注射。

1．3 观察指标

1．3．1 神经功能评分：通过Zausinger 6分法[3]评价，0分：不能行走；1分：可自由行走，但会向病变对侧旋转；2分：固定尾巴后向病变对侧旋转；3分：若向病变对侧施压，大鼠难以抵抗；4分：病变对侧前爪不能伸直或全身对侧屈曲；5分：不存在神经功能缺损症状。于大鼠清醒状态下再灌注2～24 h评分。

1．3．2 Glu、GABA、GABA/Glu水平：大鼠再灌注24 h后马上将其处死取脑，分离出右侧额叶顶叶皮质，称重后加入预冷脑组织匀液(比例1：10)，超声匀浆后常规离心，转速12 000 r/min，20 min，提取出上清液保存在-70℃冰箱中。GABA、Glu均通过高效液相色谱法测定。

2 结果

2．1 神经功能评分 A组大鼠均存活，可自由行走，无1例表现出神经功能缺损症状。B组大鼠于再灌注2 h内死亡1只。C组大鼠于再灌注后2 h内死亡1只，再灌注后12 h死亡1只。B组大鼠神经功能评分明显高于C组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 B组、C组大鼠神经功能评分比较，分)

2．2Glu、GABA、GABA/Glu水平B组Glu水平明显低于A组、C组(t值分别为3.841、4.707，P<0.05)；B组GABA、GABA/Glu分别明显高于A组(t值为5.914、2.305，P<0.05)，均明显低于C组(t值为4.065、13.484，P<0.05)。A组、C组Glu、GABA、GABA/Glu水平比较差异有统计学意义(t值分别为3.254、8.872、17.994，P<0.05)。见表2。

表2 3组大鼠 Glu、GABA、GABA/Glu水平比较

注：与A组比较，*P<0.05；与C组比较，#P<0.05

3 讨论

受脑组织缺血缺氧、血管再灌注损伤等多种因素影响，缺血性脑血管疾病神经元可能变性坏死或凋亡[4]。脑缺血后中枢神经系统兴奋性氨基酸大量释放，致使细胞外液中谷氨酸、γ-氨基丁酸上升，产生神经毒性加快神经元变性坏死速度，可能机制包括：(1)脑缺血后兴奋性氨基酸增多，对N-甲基-D-门冬氨酸受体刺激而让钾离子、氯离子至细胞内，易引发神经元水肿症状[5]；(2)脑缺血后增加钙离子内流几率，致使细胞内钙离子数目太多而将磷脂酶A2或C等激活，损伤神经细胞。可见神经保护重点在于抑制神经元兴奋，而神经元兴奋抑制关键在于氨基酸抑制，进而减少其毒性作用。

现代医学认为中枢神经系统重要成分包括Glu、GABA等，正常生理环境下，因机体内有Glu摄取系统且摄取能力强，可保持细胞Glu维持低水平，仅有少许Glu作为兴奋性神经递质在大脑学习、记忆等多种信号传导功能中起参与作用[6]。而一旦脑缺血发生，Glu释放过度，激活n-甲基-D-天门冬氨酸产生兴奋毒性作用，促进神经元坏死或死亡。GABA主要由Glu脱羧而来，存在于大脑皮质及海马神经元中，通常情况下Glu含量为GABA的4倍左右。当Glu产生兴奋性毒性后，抑制性递质GABA通过对GABA投射神经元位相性抑制可达到拮抗神经元的目的。于海宁等[7]人研究表明脑缺血时除了Glu水平上升外，抑制性氨基酸GABA浓度亦明显上升，且两者呈正相关性。托吡酯作为临床一种新型抗癫痫药物，主要成分为氨基硫酸酯，近年来较多研究及临床表明托吡酯在神经细胞元中有一定的作用，可能机制包括：(1)托吡酯对神经元方便可有效阻断，但该作用与托吡酯使用后时间有关，主要是通过阻断钠通道达到阻断神经元放电的目的；(2)该药物通过激活GABAA受体频率，以提高氯离子内流，进而以增强抑制中枢神经递质作用；(3)托吡酯通过使谷氨酸AMPA受体活性下降以抑制中枢神经递质[8]。本文结果显示，B组大鼠Glu、GABA水平明显比C组低，差异有统计学意义(P<0.05)，提示托吡酯能明显降低脑缺血再灌注大鼠Glu、GABA水平，有利于其神经功能恢复，与刘姜冰等[9]研究结果基本一致。另外，B组大鼠神经功能评分明显比C组高，差异有统计学意义(P<0.05)，提示托吡酯对脑缺血再灌注大鼠有神经保护作用，可能与其降低Glu、GABA水平有关。

综上所述，托吡酯对脑缺血再灌注损伤大鼠神经有保护作用，可能是通过降低Glu及GABA水平达到明显改善大鼠神经功能的目的，值得临床进一步研究应用。

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[4] 欧小凡，林斯革，蔡雪峰，等．托吡酯治疗偏头痛的临床疗效及其对脑血管病变和神经元放电的影响研究[J]．中国全科医学，2013，16(02)：161-163．

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[6] 吴丹红，钟萍，包关水，等．不同剂量托吡酯对癫大鼠海马组织中NCAM和GAP- 43 mRNA表达的影响[J]．上海交通大学学报(医学版)，2009，29(12)：1 459-1 462．

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[8] 金杰．托吡酯片在人体内的药物动力学及生物等效性研究[J]．中南药学，2013，11(3)：166-169．

[9] 刘姜冰，石静萍，赵薛旭，等．托吡酯对急性脑缺血后大鼠脑皮层氨基酸类神经递质含量的影响及神经保护作用[J]．重庆医科大学学报，2010，35(05)：692-694．

(收稿2015-09-26)

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1673-5110(2016)22-0109-03