原花青素对D-半乳糖致衰老大鼠小脑的保护作用

赵松峰 张亚玲 张 晓 师秀琴 张 祥 张晓坚 程亮星

1)郑州大学第一附属医院药学部 郑州 450052 2)《肿瘤基础与临床》编辑部 郑州 450052



原花青素对D-半乳糖致衰老大鼠小脑的保护作用

赵松峰1)张亚玲2)张 晓1)师秀琴1)张 祥1)张晓坚1)程亮星2)

1)郑州大学第一附属医院药学部 郑州 450052 2)《肿瘤基础与临床》编辑部 郑州 450052

目的 探讨原花青素(PC)对D-半乳糖致衰老大鼠小脑的保护作用。方法 取健康6月龄雄性Wistar大鼠50只，随机均分为阴性对照组、衰老模型组、维生素E(VE)组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组等5组，每组10只，分别给予相应处理后，测定各组大鼠小脑组织中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果 VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平较衰老模型组升高，而NO、NOS、MDA水平较衰老模型组降低(均P<0.001)；PC 160 mg/kg组与VE组的NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)；PC 80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平低于VE组、PC 160 mg/kg组，而NO、NOS、MDA水平高于VE组、PC 160 mg/kg组(均P<0.001)。结论 PC对D-半乳糖致衰老大鼠小脑组织具有一定的保护作用。

原花青素；衰老大鼠；小脑；一氧化氮；一氧化氮合酶；超氧化物歧化酶；丙二醛；谷胱甘肽过氧化物酶

原花青素(proanthocyanidins，PC)主要提取自葡萄皮和葡萄籽，具有明显的抗氧化、增强心脑血管活性、改善学习记忆机能、抗炎及抑制肿瘤细胞生长等作用[1-3]，但关于PC对衰老大鼠小脑的影响尚未见报道。本研究通过测定D-半乳糖至衰老大鼠小脑组织中一氧化氮(nitric oxide，NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase，GSH-Px)水平，观察原花青素对衰老大鼠小脑的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1．1 实验动物及分组 健康6月龄雄性Wistar大鼠50只，体质量325～363 g，购自河南省实验动物中心，采用数字表法随机均分为5组：阴性对照组、衰老模型组、VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组各10只。

1．2 主要药品、试剂及仪器 PC(安阳晶森天然产物有限公司，批号：15064102)；维生素E(vitamin E，VE)注射剂(上海通用药业股份有限公司，批号：150235)；NO、NOS、SOD、MDA、GSH-Px及考马斯亮兰测试盒(南京建成生物工程研究所，批号分别为：20150822、20151001、20150823、20150829、20150826、20150923)；722型分光光度计(上海第三分析仪器厂)。

1．3 给药方法 阴性对照组：皮下注射3.0 mL/kg的0.85% NaCl溶液；衰老模型组：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和0.85% NaCl溶液1.5 mL/kg；VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和相应浓度的药物1.5 mL/kg。1次/d，连用12周。

1．4 标本采集及指标测定 标本采集：各组大鼠于末次给药1 h后，用1%戊巴比妥钠(0.4 mL/kg)腹腔注射麻醉，快速常规取出小脑，4 ℃ 0.85% NaCl溶液冲洗，滤纸吸干，置于-80 ℃冰箱内保存。指标测定：取适量小脑组织，称质量，制匀浆，4 ℃、3 500 r/min离心10 min，取上清液，按试剂盒说明测定NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px水平。测定总蛋白量采用考马斯亮兰法。

2 结果

2．1 大鼠小脑组织中NO、NOS水平比较 衰老模型组较阴性对照组大鼠小脑组织中NO、NOS水平升高(均P<0.001)；VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组NO、NOS水平较衰老模型组降低(均P<0.001)；PC 160 mg/kg组与VE组的NO、NOS水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)；PC 80 mg/kg组NO、NOS水平高于VE组、PC 160 mg/kg组(均P<0.001)。见表1。

2．2 大鼠小脑组织中SOD、MDA和GSH-Px水平比较 衰老模型组大鼠小脑组织中SOD、GSH-Px水平较阴性对照组降低，而MDA水平较阴性对照组升高(均P<0.001)；VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平较衰老模型组升高，而MDA水平较衰老模型组降低(均P<0.001)；PC 160 mg/kg组与VE组的SOD、MDA和GSH-Px水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)；PC 80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平低于VE组、PC 160 mg/kg组，而MDA水平高于VE组、PC 160 mg/kg组(均P<0.001)。见表1。

表1 各组大鼠小脑组织中NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px比较

注：与阴性对照组比较，1)P<0.001；与衰老模型组比较，2)P<0.001；与VE组比较，3)P<0.001；与PC 160 mg/kg组比较，4)P<0.001

3 讨论

衰老机制复杂，目前研究较为深入的包括自由基学说、凋亡学说、免疫学说等[4-5]。D-半乳糖致衰老因其造模成功率高、安全性高及造模时间短等优点而被广泛应用，本实验也验证了这一结果。

NO是最早被发现的气体性信息分子，具有生理和病理双重作用，少量的NO能够发挥神经递质和信息分子的作用，对体内正常细胞发挥保护作用，参与机体的生物学信号传导和功能调节，如学习、血管调节等；而当机体内积聚大量的NO时则会发挥强氧化剂作用，产生细胞毒性，导致机体的自由基增加和脂质过氧化，在衰老、缺血再灌注损伤等病理过程中起一定作用[6]。NO参与了衰老过程中多种机能改变，特别是神经系统功能的退化[7]。NOS是NO合成的关建酶，机体内的NOS主要分为诱导型NOS(iNOS)和结构型NOS(cNOS)，iNOS是较活跃的一类，其过度激活可导致NO水平的升高，从而导致衰老的发生，通过测定总NOS水平可间接反映iNOS水平[8]。SOD和GSH-Px是机体重要的清除自由基的酶，正常情况下能够清除体内多余的自由基，防止机体自由基的堆积和脂质过氧化的发生，使自由基的产生和机体对自由基的清除保持一种动态的平衡，从而保证正常生命活动的顺利进行，而随着衰老的进展，机体内的SOD和GSH-Px水平降低，造成了机体自由基的过剩，进而导致自由基的堆积以及由此而引起的脂质过氧化、细胞损伤等，两者水平的高低可以间接反映机体的抗氧化能力[9]。MDA是机体脂质过氧化的产物，可以间接反映机体氧化程度和衰老程度[10]。

本实验结果显示VE组、PC 160 mg/kg组和80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平较衰老模型组升高，而NO、NOS、MDA水平较衰老模型组降低，说明PC可能通过这些因子发挥抗衰老作用；PC 160 mg/kg组与VE组的NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px水平相近，说明一定量的PC能够达到VE一样的抗衰老作用；PC 80 mg/kg组SOD、GSH-Px水平低于VE组、PC 160 mg/kg组，而NO、NOS、MDA水平高于VE组、PC 160 mg/kg组，提示PC的作用可能具有一定的剂量依赖性，随着药物量的增加，其作用可能越强。

综上所述，PC能够增强抗氧化酶SOD、GSH-Px水平，减少MDA生成，从而通过抗氧化而发挥一定的抗衰老作用；同时PC还能够降低机体NOS水平，从而减少NO水平，进而起到抗衰老的作用，且作用具有剂量依赖性。

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(收稿2015-12-18)

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1673-5110(2016)19-0077-03