HPLC法测定地丙醇搽剂中醋酸地塞米松和樟脑的含量

钱文慧 曹燕丽 吴晶晶 侯忆璠 苏 华 岩林苹

江苏省南京军区南京总医院制剂科，江苏南京210002

HPLC法测定地丙醇搽剂中醋酸地塞米松和樟脑的含量

钱文慧 曹燕丽 吴晶晶 侯忆璠 苏 华 岩林苹▲

江苏省南京军区南京总医院制剂科，江苏南京210002

目的建立同时测定地丙醇搽剂中醋酸地塞米松和樟脑含量的分析方法。方法采用高效液相色谱法同时测定醋酸地塞米松和樟脑的含量，以Lichrospher C18为色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-水（60∶40）为流动相，检测波长为270 nm，柱温为25℃，流速：1.0 mL/min。结果醋酸地塞米松和樟脑检测浓度分别在0.007 74～0.015 49 mg/mL（r2=0.9999）和0.487 28～1.949 13 mg/mL（r2=0.9999）范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为100.28%、99.72%，RSD为0.58%、0.56%。地丙醇搽剂中醋酸地塞米松平均含量为0.29 mg/mL，樟脑平均含量为28.84 mg/mL。结论本法操作简单，准确可靠，适用于地丙醇搽剂的质量控制。

高效液相色谱法曰醋酸地塞米松曰樟脑曰地丙醇搽剂

地丙醇搽剂为南京军区南京总医院（以下简称“我院”）临床广泛使用的外用制剂，具有消炎抗敏、止痒止痛的疗效，临床上主要用于慢性湿疹、神经性皮炎、皮肤瘙痒症的治疗，疗效显著。地丙醇搽剂处方中的主要成分为醋酸地塞米松和樟脑，其中醋酸地塞米松能降低毛细血管的通透性，减轻水肿，从而抑制炎性反应的发生和发展［1-2］；樟脑则具有杀虫止痒、消肿止痛的功效［3］，两者是地丙醇搽剂发挥疗效的主要有效成分。原质量标准的含量测定项下仅要求采用紫外分光光度法测定醋酸地塞米松的含量，方法处理费时，且未要求定量检测挥发性成分樟脑的含量。为了全面控制制剂的质量，笔者参考相关文献［3-8］，建立了采用同一波长同时定量测定地丙醇搽剂中醋酸地塞米松和樟脑的含量，该方法操作简单、结果可靠，为进一步保障该制剂的质量提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agi1ent 1100 Series高效液相色谱仪，VWD检测器；AE240电子分析天平（德国梅特勒-托利多仪器有限公司），KQ-250DB数控超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）；FA1604S电子天平（上海天平仪器厂）。

1.2 试药

醋酸地塞米松对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号100122-201206，纯度100%）；樟脑对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号110747-201409，纯度98.7%）；色谱醇甲醇（美国TEDIA公司）；地丙醇搽剂（规格：每瓶装60 mL，我院制剂科自制，批号：140307），其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择

本研究用紫外分光光度计分别对醋酸地塞米松和樟脑的对照品溶液进行全波长扫描，发现醋酸地塞米松和樟脑的的最大吸收波长分别为239、290 nm，本应选择两曲线的交叉点285 nm为测定波长，但因该制剂中醋酸地塞米松和樟脑的比例相差很大，樟脑的浓度是醋酸地塞米松的10倍，因此测定波长选择了醋酸地塞米松吸收值较大的270 nm作为检测波长，在该检测波长下两组分相互无干扰，且吸收值比较合适，因此选择270 nm作为检测波长，具体吸收图谱见图1。

图1 醋酸地塞米松和樟脑的紫外吸收光谱图

2.2 色谱条件与系统适应性试验

按照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版一部附录ⅥD）测定［4］。采用Lichrospher C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-水（60∶40）为流动相，检测波长270 nm，流速1.0 mL/min，柱温25℃，进样量为20 μL，理论塔板数按醋酸地塞米松和樟脑峰计算不低于2000。

2.3 对照品溶液的制备

分别精密称取醋酸地塞米松和樟脑对照品适量，置于25、50 mL量瓶中，加流动相系统稀释至刻度，摇匀，配制成分别含醋酸地塞米松4.9376 mg/mL和樟脑0.1936 mg/mL的对照品储备液。分别精密吸取醋酸地塞米松对照品储备液2 mL和樟脑对照品储备液0.6 mL置于10 mL容量瓶中，加流动相稀释至容量瓶刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备

精密吸取地丙醇搽剂0.4 mL于10 mL量瓶中，加流动相至刻度，过滤，除去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

2.5 专属性试验

按处方比例和供试品制备工艺不加醋酸地塞米松和樟脑，制成阴性对照，按照“2.3”项下方法制成阴性对照溶液。精密吸取如上所述的对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各20 μL，按上述方法进行测定并记录色谱图。试验结果显示，在供试品色谱中，与对照品色谱相应的保留时间处，有同一色谱峰，而阴性对照溶液在相应保留时间处则无色谱峰出现，表明其对样品测定无干扰，具体图谱见图2。

图2 地丙醇搽剂的HPLC图

2.6线性关系考察

分别精密吸取醋酸地塞米松储备液1.0、1.6、2.0、3.0、4.0 mL和樟脑储备液0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL至10 mL的容量瓶中，采用流动相稀释至刻度，定容。按照上述色谱条件和方法进样20 μL，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，分别得到醋酸地塞米松和樟脑的回归方程：Y= 15 403X-3.18，r2=0.9999（n=5）和Y=171.6X-2.7954，r2=0.9999（n=5）。结果表明，醋酸地塞米松的浓度在0.007 74～0.015 49 mg/mL之间，樟脑的浓度在0.487 28～1.949 13 mg/mL之间，与峰面积呈良好的线性关系，方法可行。

2.7 精密度试验

分别取“2.2”项下的醋酸地塞米松和樟脑对照品溶液，按上述色谱条件和方法连续进样5次，进样量为20 μL，结果得醋酸地塞米松峰面积RSD为0.58%，樟脑峰面积RSD为0.56%，表明该方法精密度良好。

2.8 稳定性试验

取同一批号（批号：140307）的样品1份，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，在常温下分别于0、1、2、4、8 h进样20 μL，记录醋酸地塞米松和樟脑的色谱图并计算峰面积，RSD分别为0.80%、0.99%，表明样品溶液的稳定性良好。

2.9 重复性试验

取同一批号（批号：140307）的样品5份，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方法进行制备，按上述的色谱条件连续进样5次，进样量为20 μL，结果得醋酸地塞米松和樟脑峰面积的RSD分别为0.98%、1.00%，表明方法重复性好。

2.10 加样回收率试验

精密吸取已知含量的样品0.2 mL（批号：140307），共9份，分别置于10 mL量瓶中，精密加入低、中、高浓度的醋酸地塞米松储备液0.18、0.3、0.42 mL和樟脑储备液0.6、1、1.4 mL，按照“2.4.3”项下样品方法制备。精密吸取上述试液各20 μL注入色谱仪，测定含量，计算回收率。醋酸地塞米松和樟脑的平均回收率分别为100.28%、99.72%，RSD分别为1.04%和0.90%。结果见表1～2。

表1 醋酸地塞米松加样回收率试验结果（n=9）

表2 樟脑加样回收率试验结果（n=9）

2.11 样品含量测定

取三批地丙醇搽剂（批号：140103、140307、140819），按照“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，结果见表3。

表3 醋酸地塞米松和樟脑含量测定结果（n=3）

综合3批样品测定结果，本品含醋酸地塞米松为标示量的90.0%～110.0%，因樟脑为挥发性成分，所以确定本品含樟脑为标示量的85.0%～110.0%。

3 讨论

3.1 流动相的选择

参照《中国药典》2015版二部中关于醋酸地塞米松和樟脑的含量测定方法及部分参考文献［5，9-12］，对流动相进行了选择试用：发现甲醇-水（60∶40）出峰时间太慢，40 min内樟脑都未出峰，且该流动相下醋酸地塞米松的样品峰形不太好；而乙腈-水（70∶30）出峰时间又稍快，且样品峰分离度不好；最终采用乙腈-水（60∶40）为流动相，两样品色谱峰出峰时间合适，分离度较好，故选择其为最佳流动相。

3.2 稀释溶剂的选择

文献报道［5，13-16］，醋酸地塞米松和樟脑都为非极性物质，易溶于甲醇或无水乙醇等溶剂。笔者经过比较和实验，发现乙腈-水（60∶40）流动相系统作为稀释溶剂对醋酸地塞米松和樟脑的溶解性都较好，同时也能避免样品出现溶剂峰。

3.3 质量标准的制订

原质量标准中仅测定地丙醇搽剂中醋酸地塞米松的含量，对制剂中另一挥发性成分樟脑的含量并未检测，因此为了全面控制制剂的质量，需要同时测定制剂中醋酸地塞米松和樟脑的含量。笔者检索了相关文献［17-20］，关于采用同一波长同时测定两个成分的相关报道较少，因此为了进一步提高医院制剂的质量以及确保临床用药的安全，本文根据地丙醇搽剂中两个主药的成分性质以及含量的多少，建立了采用同一波长同时测定制剂中醋酸地塞米松和樟脑的含量。最后结合实际生产情况，综合多批样品测定结果，确定本品含醋酸地塞米松为标示量的90.0%～110.0%；而樟脑为挥发性成分，且之前只对樟脑仅进行定性鉴别，未进行定量控制，因此确定本品含樟脑为标示量的85.0%～110.0%。

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Determination of dexamethasone acetate and camphor in Dibingchun Liniment by HPLC

QIAN WenhuiCAO YanliWu JingjingHou YifanSU HuaYAN Linping▲
Department of Preparation Division，Nanjing Genera1 Hospita1 of Nanjing Mi1itary Command，PLA，Jiangsu Province，Nanjing210002，China

Objective To estab1ish the method for the determination of dexamethasone acetate and camphor in Dibingchun Liniment.Methods The HPLC method was used to determine their contents and the Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）co1umn was used，the detection wave1ength was set at 270 nm and the co1umn temperature was maintained at 25℃.The mobi1e phase system was acetonitri1e-water（60∶40）and the f1ow rate was 1.0 mL/min.Results The 1iner range of dexamethasone acetate and camphor were 0.007 74-0.015 49 mg/mL（r2=0.9999）and 0.487 28-1.949 13 mg/mL（r2=0.9999）respective1y and the average recovery was 100.28%and 99.36%.The average contents of dexamethasone acetate and camphor for determination in Dibingchun Liniment were 0.29，28.84 mg/mL.Conclusion This method is simp1e，practica1 and accurate，the resu1t can be used to contro1 the qua1ity of Dibingchun Liniment.

HPLC；Dexamethasone acetate；Camphor；Dibingchun Liniment

R914.1

A

1674-4721（2016）07（c）-0142-04

2016-04-13本文编辑：赵鲁枫）

全军医疗机构制剂标准提高科研专项课题重点项目（14ZJZ08）

▲通讯作者