MCP-1在老年IgA肾病患者中的表达及意义

洪丽萍，张汀，刘变玲，肖爱华

1.郑州颐和医院肾内科，河南郑州　450000；2.复旦大学附属中山医院肾内科，上海　200032；3.郑州人民医院肾内科，河南郑州　450000

MCP-1在老年IgA肾病患者中的表达及意义

洪丽萍1，张汀2，刘变玲3，肖爱华1

1.郑州颐和医院肾内科，河南郑州450000；2.复旦大学附属中山医院肾内科，上海200032；3.郑州人民医院肾内科，河南郑州450000

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在老年IgA肾病（IgAN）患者肾脏组织、血液、尿液中的水平及意义。方法选取2014年1月—2016年1月在郑州颐和医院接受住院治疗的青少年、老年IgAN患者各30例，以及门诊体检健康的青少年、老年人各30名作为健康对照。根据所有老年IgAN患者的24 h尿蛋白定量值，将其分为不同的亚组；并根据Lee组织学分级系统将老年IgAN患者分为Ⅰ～Ⅴ级。采用免疫组织化学方法检测肾脏组织中MCP-1表达，ELISA法检测血液及尿液中MCP-1水平。结果老年IgAN患者肾脏组织、血液、尿液中的MCP-1表达水平显著高于青少年IgAN患者（P＜0.05）：0.43%vs 0.40%、（124.32±20.12）pg/mL vs（116.34±16.37）pg/mL、（125.42±19.36）pg/mL vs（110.23±17.42）pg/mL。随着病情的加重，老年IgAN患者肾脏组织、血液及尿液中MCP-1表达水平也显著升高（P＜0.05）。结论 老年IgAN患者肾脏组织、血液、尿液中的MCP-1表达水平显著增加，且与疾病进展有关，可作为辅助老年IgAN诊断及预后观察的潜在指标。

MCP-1；老年IgA肾病；青少年IgA肾病

肾脏病是中国的常见病及多发病，每年每百万人群中有近百人由于各种原因的肾脏疾病进展到终末期肾病而危及生命，IgA肾病（IgAN）是一种最常见的原发性肾小球疾病，已成为我国终末期肾病的主要来源［1］。近年来，老年人群中的IgAN发病率逐年升高［2］，而且人口老龄化已成为影响IgAN发展为终末期肾病的重要因素［3］。单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）是趋化和激活单核巨噬细胞的重要炎症因子，可能在I-gAN患者肾小管间质病变及肾功能损害中起重要作用［4-5］。但是，老年IgAN患者中的MCP-1水平研究较少。该研究自该院于2014年1月—2016年1月收治的共120例作为研究对象，其中青少年IgAN、老年I-gAN患者各30例，以及门诊体检健康的青少年、老年人各30名作为健康对照。通过研究MCP-1在老年IgAN患者中的表达水平，可能为老年IgAN诊断及预后提供一定的科学依据。

1　资料与方法

1.1主要试剂

山羊抗人MCP-1抗体［ab38085 abcam］、生物素化兔抗山羊IgG［yb36243Santa Cruz］，SABC免疫组化试剂盒+DAB显色剂［cat.no.m5655］。

1.2一般资料

选取2014年1月—2016年1月在该院接受住院治疗的青少年（男16例、女14例，年龄15～30岁，平均25.8岁）、老年IgAN患者（男15例、女15例，年龄60～71岁，平均66.5岁）各30例，以及门诊体检健康的青少年（男15名、女15名，年龄15～30岁，平均25.4岁）、老年人（男15名、女15名，年龄60～70岁，平均65.1岁）各30名作为健康对照。所有IgAN患者均经B超引导肾穿刺活检术证实为原发性IgAN，排除系统性红斑狼疮、过敏性紫癜及各型肝病所致的继发性IgAN，且均无激素、细胞毒药物等免疫抑制剂、血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）等药物史。

根据所有老年IgAN患者的24 h尿蛋白定量值，将其分为不同水平24 h尿蛋白定量亚组，即I组（尿蛋白＜25 mg（24 h·kg）、Ⅱ组（尿蛋白25～50 mg（24 h·kg）和Ⅲ组（尿蛋白＞50 mg（24 h·kg）；并根据Lee组织学分级系统将老年IgAN患者分为Ⅰ～Ⅴ级。

1.3样品采集

肾穿刺当日抽取空腹血5 mL，并留取第1次新鲜晨尿20 mL，2 000 rpm离心10 min后，分别收集上清液置于-80℃保存备用。所有肾组织取材时间均限制在离体后12 h内，经光镜及免疫荧光检查均未见异常后留取备用。

1.4肾组织MCP-1表达检测

所有肾组织标本经固定、切片，及抗原修复处理后，依次滴加一抗、二抗孵育。经免疫组化SABC试剂，DAB显色剂处理后，显微镜（×100）下观察染色结果，并采用Smartscape图像分析系统进行定量分析。每例肾组织切片随机选取10个不重叠视野，测定并计算阳性面积灰度值的平均值。

1.5血液及尿液MCP-1水平检测

采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血液及尿液中的MCP-1水平，严格按照试剂盒说明书操作。

1.6统计方法

采用SPSS 15.0统计学软件进行数据分析。计量资料用（±s）表示，两组间比较采用t检验，多组比较采用χ2分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1肾脏组织MCP-1表达分析

比较分析健康青少年（A组）、健康老年人（B组）、青少年IgAN患者（C组）以及老年IgAN患者（D组）肾脏组织中的MCP-1表达水平。如图1所示：与A组和B组相比，C组和D组的肾脏组织MCP-1表达水平均显著升高 （P＜0.05），且D组显著高于C组 （P＜0.05）。此外，A组和B组相比，肾脏组织MCP-1水平差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1　各组肾脏组织MCP-1表达

2.2血液及尿液MCP-1水平分析

与A组和B组相比，C组和D组的血液及尿液MCP-1水平均显著升高（P＜0.05），且D组显著高于C组（P＜0.05）。同样地，A组和B组相比，血液及尿液MCP-1水平差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1　各组血液及尿液MCP-1水平比较［（±s），pg/mL］

表1　各组血液及尿液MCP-1水平比较［（±s），pg/mL］

注：与A组比较：aP＜0.05；与B组比较：bP＜0.05；与C组比较：cP＜0.05。

组别　血液　尿液A组（n=30）B组（n=30）C组（n=30）D组（n=30）100.56±12.38 98.29±12.26（116.34±16.37）a（124.32±20.12）bc46.85±9.87 43.29±8.73（110.23±17.42）a（125.42±19.36）bc

2.3老年IgAN患者不同水平24 h尿蛋白定量亚组MCP-1表达水平分析

比较分析不同水平24 h尿蛋白定量亚组肾组织、血液及尿液中的MCP-1表达水平，结果分别如图2，表2所示。随着老年IgAN患者24 h尿蛋白定量升高，其肾组织MCP-1表达逐渐增加（图2。P＜0.05），且血液及尿液中的MCP-1水平也逐渐升高（表2。P＜0.05）。

表2　老年IgAN患者不同水平24h尿蛋白定量亚组血液及尿液MCP-1水平比较［（±s），pg/mL］

表2　老年IgAN患者不同水平24h尿蛋白定量亚组血液及尿液MCP-1水平比较［（±s），pg/mL］

注：与Ⅰ组比较：aP＜0.05；与Ⅱ组比较：bP＜0.05。

组别　血液　尿液Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组104.57±16.59（125.43±20.03）a（127.36±18.42）ab56.78±11.24（84.53±14.32）a（124.64±18.53）ab

图2　老年IgAN患者不同水平24h尿蛋白定量亚组肾组织MCP-1表达

2.4老年IgAN患者不同组织学分级亚组MCP-1表达水平分析

比较分析不同组织学分级亚组（Ⅰ～Ⅴ级组）肾组织、血液及尿液中的MCP-1表达水平，结果如图3、表3所示。老年IgAN患者中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组肾组织中的MCP-1表达差异无统计学意义，Ⅳ、Ⅴ级组肾组织中的MCP-1表达差异无统计学意义；而Ⅳ、Ⅴ级组肾组织MCP-1表达水平均显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组（图3。P＜0.05）。类似地，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组血液及尿液MCP-1水平差异无统计学意义，Ⅳ、Ⅴ级组血液及尿液MCP-1水平差异无统计学意义；而Ⅳ、Ⅴ级组血液及尿液MCP-1表达水平显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组（表3。P＜0.05）。

表3　老年Ig A肾病患者不同组织学分级亚组血液及尿液MCP-1水平比较［（±s），pg/mL］

表3　老年Ig A肾病患者不同组织学分级亚组血液及尿液MCP-1水平比较［（±s），pg/mL］

注：与Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级组相比：aP＜0.05。

组别　血液　尿液Ⅰ级Ⅱ级Ⅲ级Ⅳ级Ⅴ级116.45±20.46 102.32±18.54 106.84±16.73（121.48±16.46）a（126.53±17.34）a48.32±11.23 52.67±12.34 87.56±16.56（110.43±18.53）a（128.63±20.42）a

图3　老年IgAN患者不同组织学分级亚组肾组织MCP-1表达

3　讨论

随着人口老龄化和肾活检技术的发展，老年肾病患者的检出比例逐渐增加，已成为影响老年人群生命健康的重要因素。IgAN是我国老年人群中第二常见的原发性肾小球疾病［6-7］，其预后的主要影响因素有高血压、肾功能不全、蛋白尿、病理分级等。此外，老龄化也可作为影响IgAN进展的危险因素。

MCP-1是单核巨噬细胞趋化和激活的主要趋化因子［8］。研究表明，IgAN患者肾小管上皮细胞可通过分泌大量的MCP-1，趋化单核巨噬细胞在肾小管间质中的浸润，同时激活其产生多种促炎细胞因子及促纤维因子，加重IgAN患者的肾小管间质病变及肾功能不全发展［4，9］，也有观点认为，MCP-1能够对细胞膜离子泵产生影响，从而改变细胞钙浓度，进而影响并加重肾小管间质纤维化，从而加重IgAN患者肾功能恶化［10］。国内的研究标明，IgA肾病组肾组织中，随间质病变加重，表达MCP-1的细胞数量逐渐增加，MCP-1的表达量随肾间质纤维化的进展逐渐增多，与小管间质病变的动态变化趋势基本一致［11］，与该研究中，老年人与青少年IgAN患者肾脏组织MCP-1水平，血液及尿液中MCP-1水平显著升高一致。该研究中，老年IgAN患者的MCP-1水平显著高于青少年IgAN患者，提示MCP-1与老年IgAN患者疾病进展有关，可能与老年患者病程较长，常合并高血压、慢性肾功能不全，老年IgAN患者病理改变常伴间质损害，肾间质纤维化程度比年轻组严重有关，该研究中患者例数相对较少，亦可能存在其他原因需进一步研究。蛋白尿、肾小球滤过率水平及肾小管萎缩/间质纤维化发生率是影响老年IgAN患者预后的危险因素［12］，该结论在动物模型中也得到验证［13］。因此，该研究进一步根据24 h尿蛋白定量及Lee组织学分级对老年IgAN患者进行分组，对不同亚组间的MCP-1表达水平进行差异比较。结果发现，随着老年IgAN患者24 h尿蛋白定量和组织学分级的升高，其肾脏组织、血液及尿液中的MCP-1表达水平均逐渐增加，与国外研究［14］一致：MCP-1与24 h尿蛋白呈显著正相关，可能与大量蛋白尿对肾小管间质的作用有关，蛋白尿可激活小管细胞膜、小管细胞基底侧分泌MCP-1.这些研究结果进一步证实，MCP-1参与老年IgAN患者疾病进展。

综上所述，该研究结果表明MCP-1水平与老年IgAN患者疾病进展有关，可作为辅助老年IgAN诊断及预后观察的潜在指标。

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Expression and Significance of MCP-1 in Elderly Patients with IgA Nephropathy

HONG Li-ping1，ZHANG Ting2，LIU Bian-ling3，XIAO Ai-hua1
1.Department of Nephrology，Zhengzhou Yihe Hospital，Zhengzhou，Henan Proivnce，450000 China；2.Department of Renal medicine，Zhongshan Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai，200032 China；3.Department of Renal Medicine，Zhengzhou People's Hospital，Zhengzhou，Henan Province，450000 China

Objective This study mainly investigated the expression of monocyte chemoattractant protein（MCP）-1 in the kidney tissues，blood and urine samples from elderly patients with IgA nephropathy（IgAN），aiming to identify the role of MCP-1 in IgAN.Methods 30 cases of adolescents IgAN patients and 30 cases of elderly IgAN patients from January 2014 to January 2016 in Zhengzhou Yihe hospital were selected.30 cases of healthy adolescents and 30 cases of elderly healthy people as control from the Outpatient physical examination in the same hospital.The elderly patients with IgAN were divided into different subgroups according to the levels of 24 h urine protein excretion and Lee classification.The expression of MCP-1 in kidney tissues was analyzed by immunohistochemistry，while the levels of MCP-1 in blood and urine samples were measured with an enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）kit.Results MCP-1 expression in kidney tissues，or its levels in the blood and urine，from elderly patients with IgAN were significantly higher than those in young patients with IgAN（P＜0.05）：0.43%vs 0.40%、（124.32±20.12）pg/mL vs（116.34±16.37）pg/ mL、（125.42±19.36）pg/mL vs（110.23±17.42）pg/mL。Moreover，in elderly patients with IgAN，the expression or levels of MCP-1 in kidney tissues or blood and urine samples were also increased with the higher（P＜0.05）.Conclusion The expression levels of MCP-1 were significantly increased in elderly patients with IgAN，which was also closely related to the development of IgAN.This study indicated that MCP-1 might be one potential marker for the diagnosis and prognosis of IgAN in elderly patients.

MCP-1；Elderly IgAN；Adolescents IgAN

R743

A

2096-1782（2016）10－0010-04

10.19368/j.cnki.2096-1782.2016.10.010

洪丽萍（1981.12-），女，河南信阳人，硕士，主治医师，研究方向：慢性肾炎。

肖爱华（1964.1-），女，河南遂平人，本科，主任医师，研究方向：糖尿病肾病，慢性肾脏病一体化治疗，E-mail：xah6569@sina.com。

（2016-07-15）