平菇泰山-20变异菌株的鉴别及其菌丝优化培养*

于清伟，安秀荣，王庆武，兰玉菲

（山东省泰安市农业科学研究院，山东泰安271000）

平菇泰山-20变异菌株的鉴别及其菌丝优化培养*

于清伟，安秀荣，王庆武，兰玉菲

（山东省泰安市农业科学研究院，山东泰安271000）

通过试验确定了变异菌株平菇泰山-20BY，探讨了在不同碳源、氮源、温度、pH值等条件下对变异菌株菌丝生长的影响。试验结果表明，菌丝生长最适温度24℃～26℃，最适pH值为6～7，最适碳源为葡萄糖，最适氮源为蛋白胨，最佳培养基配方为葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、KH2PO43 g·L-1和MgSO40.5 g·L-1。

平菇；变异菌株；鉴别；碳氮源

平菇（Pleurotus ostreatus）隶属于担子菌门（Basidiomycota）层菌纲（Hymenomycetes）伞菌目（Agaricales）侧耳科（Pleurotaceae）侧耳属（Pleurotus），为一类侧耳属食用菌菇类的商品名称［1］。其栽培方法简单，成本低，产量高，周期短，营养丰富，具有适应性广、抗逆性强、原料来源广、经济效益高等特点，已经发展成世界性菇类栽培品种［2］。

目前，食用菌育种手段仍以选择育种、杂交育种和诱变育种为主［3］。在育种过程中，笔者发现1株变异菌株，并对该菌株菌丝生物学特性进行了初步的研究。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1供试菌株

平菇泰山-20、平菇泰山-20BY（变异株），保藏于泰安市农业科学研究院。

1.1.2仪器

电子分析天平（精度0.001 g），上海精科实业有限公司；立式压力蒸汽灭菌器，上海申安医疗器械厂；生化培养箱，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；FE20实验室pH计，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司等。

1.1.3供试培养基

基础培养基：PDA［4］。

碳源供试培养基：蛋白胨0.2%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、琼脂2%、碳源2%（葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、果糖），pH自然［5］。

氮源供试培养基：葡萄糖2%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%、琼脂2%、氮源0.2%［蛋白胨、酵母膏、NH4Cl、（NH4）2SO4、NH4NO3］，pH自然［5］。

1.2方法

1.2.1变异菌株确定

将分离到的变异菌株无性繁殖10代，取第1代、第5代、第10代变异菌株与平菇泰山-20接入PDA培养基中，观察菌丝拮抗现象，确定变异菌株是否退化，并采用十字交叉法测定比较变异菌株与平菇泰山-20的菌丝生长速度。

1.2.2温度对菌丝生长的影响

制作PDA平板培养基，分别接入5 mm2菌龄一致的平菇泰山-20和变异菌株的母种菌块，温度设18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃共7个处理，测定菌落直径大小，计算菌丝生长速度，每处理重复5次，置于恒温培养箱中培养［6-7］。

1.2.3pH对菌丝生长的影响

制作PDA平板培养基，接入5 mm2菌龄一致的平菇泰山-20BY母种菌块，pH设4、5、6、7、8、9共6个处理，测定菌落直径大小，计算菌丝生长速度，每处理重复5次，置于25℃恒温培养箱中培养［6-7］。

1.2.4不同碳源对菌丝生长的影响

按1.1.3中碳源供试培养基配方制备不同碳源培养基，接入5 mm2菌龄一致的平菇泰山-20BY母种菌块，25℃下恒温培养，测定菌落直径大小，计算菌丝生长速度。每处理重复5次［6-7］。

1.2.5不同氮源对菌丝生长的影响

按1.1.3中氮源供试培养基配方制备不同氮源培养基，接入5 mm2菌龄一致的平菇泰山-20BY母种菌块，25℃下恒温培养，测定菌落直径大小，计算菌丝生长速度。每处理重复5次［6-7］。

1.2.6最佳培养基优化

试验选定适宜碳源、氮源后，与无机盐KH2PO4、MgSO4进行组合，采用L9（34）正交表进行四因素三水平正交试验，组合成供试培养基，方法同1.2.4［6-7］。

2　结果与分析

2.1平菇变异菌株确定

平菇变异菌株形态特征见图1。

由图1中可以看出，变异菌株菌盖颜色灰白色，菌褶白色，与原菌株形态相比差异较大。采用组织分离方式，分离得到平菇泰山-20BY菌株。

平菇变异菌株的鉴别情况见表1。

图1　平菇变异菌株的子实体形态（A、B分别为子实体正面及腹面）Fig.1Morphological characteristics of mutant strains of Pleurotus ostreatus（A and B：The front and back of fruiting body）

表1　平菇变异菌株的鉴别Tab.1Identification on mutation strains of Pleurotus ostreatus

从表1可以看出，平菇泰山-20BY第1代到第10代与平菇泰山-20都有拮抗现象；但菌丝生长速度相差不大，可确定平菇泰山-20BY稳定性较强，未在其无性繁殖过程中发生回复突变。

2.2温度对平菇菌丝生长的影响

由于平菇泰山-20BY的菌盖颜色为白色，而平菇耐高温品种一般其菌盖颜色也为白色。因此，温度对菌丝生长影响试验中，对平菇泰山-20与平菇泰山-20BY两者进行了试验比较。温度对菌丝生长的影响见图2。

图2　温度对平菇变异菌株菌丝生长的影响Fig.2Effect of temperature on mycelial growth of mutation strains of Pleurotus ostreatus

从图2中可以看出，2个菌株菌丝生长速度差异性较小，在一定温度范围内，随着温度升高，菌丝生长速度呈现上升趋势；超过26℃时菌丝生长速度缓慢下降；平菇泰山-20BY在高温区生长速度稍快于平菇泰山-20，但最适温度范围依然都是24℃～26℃。

2.3pH对平菇变异菌株菌丝生长的影响

pH对平菇变异菌株菌丝生长影响情况见图3。

图3　pH对平菇变异菌株菌丝生长的影响Fig.3Effect of pH on mycelial growth in mutation strains of Pleurotus ostreatus

由图3可以看出，在pH值4～9的6个处理中，pH值6～7时，菌丝生长速度最快，菌丝浓白，长势也最好；pH值4～5时菌丝生长速度最慢，菌丝长势也最差。平菇泰山-20BY最适pH范围为6～7，pH值8～9时次之，可能是由于调配培养基pH后灭菌，灭菌结束后培养基pH下降所致。

2.4不同碳源对平菇变异菌株菌丝生长的影响

不同碳源对平菇变异菌株菌丝生长的影响见表2。

表2　碳源对平菇变异菌株菌丝生长的影响Tab.2Effect of carbon sources on the mycelial growth of mutation strains of Pleurotus ostreatus

由表2可见，以葡萄糖为碳源时，菌丝生长速度最快，菌丝长势最好；以乳糖、果糖为碳源时，菌丝生长速度及菌丝长势较差。因此，葡萄糖是变异菌株平菇泰山-20BY菌丝生长的最佳碳源。

2.5不同氮源对平菇变异菌株菌丝体生长的影响

5种氮源均可被平菇泰山-20BY菌丝生长利用，其对菌丝体生长的影响见表3。

表3　氮源对平菇变异菌株菌丝体生长的影响Tab.3Effect of nitrogen sources on mycelial growth of mutation strains of Pleurotus ostreatus

从表3可以看出，蛋白胨作为氮源时，菌丝生长速度最快，菌丝长势也最好；酵母膏次之；NH4Cl、（NH4）2SO4、NH4NO3作为氮源时，菌丝生长速度及菌丝长势最差。由此可得出平菇泰山-20BY菌丝生长的最佳氮源为蛋白胨。

2.6平菇变异菌株的最佳培养基优化

确定平菇变异菌株的最佳碳源为葡萄糖、最佳氮源为蛋白胨后，与无机盐组合进行正交设计，见表4。L9（34）正交试验结果见表5。

表4　正交试验因素和水平Tab.4Factors and levels of orthogonal test

对表5中数据进行直观分析，由极差R值可以得出，碳源对平菇变导菌株菌丝生长影响最大，氮源次之，而KH2PO4影响最小。对均值Ki值进行分析，可筛选出培养基最佳组合配方为A2B3C2D1，即葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、KH2PO43 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1。

3　结论与讨论

通过试验，变异菌株平菇泰山-20BY菌丝生长最适温度24℃～26℃，最适pH值为6～7，最适碳源为葡萄糖，最适氮源为蛋白胨，最佳培养基配方为葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨10 g·L-1、KH2PO43 g·L-1、MgSO40.5 g·L-1。

在温度对菌丝生长的影响试验中，平菇泰山-20BY耐高温性能稍高于平菇泰山-20，但是否会在栽培出菇时更加耐高温并不能确定，变异菌株的子实体形态特征等是否优良等，还有待于进一步的出菇试验。

表5　L9（34）正交试验结果Tab.5Results of L9（34）orthogonal test

［1］黄年来.我国食用菌产业的现状与未来［J］.中国食用菌，2000，19（4）：3-5.

［2］于富强，肖月芹，刘培贵.野生粗柄侧耳的生物学特性及其人工栽培［J］.食用菌学报，2005，12（3）：33-37.

［3］张金霞.中国食用菌菌种学［M］.北京：中国农业出版社，2011：129.

［4］杜秉海.微生物学实验［M］.北京：北京农业大学出版社，1994：226.

［5］王明才，于清伟，安秀荣，等.灰树花泰山-1生物学特性研究［J］.山东农业科学，2014，46（6）：73-75.

［6］王庆武，兰玉菲，安秀荣.泰山赤灵芝菌株生物学特性研究［J］.山东农业科学，2015，47（11）：64-67.

［7］杨菁，李洪荣，蔡丹凤，等.无孢平菇的生物学特性研究［J］.食用菌学报，2010（增刊）：53-56.

Identification and Optimization on Mycelial Growth of Pleutotus ostreatus Variant Strain

YU Qing-wei，AN Xiu-rong，WANG Qing-wu，LAN Yu-fei
（Tai'an Academy of Agriculture Sciences，Tai'an 271000，China）

The effects of different carbon source，nitrogen source，temperature and pH on the mycelial growth of variant strain Taishan-20BY were studied in this paper.The results showed that the suitable temperature for mycelial growth was 24℃-26℃，the suitable pH was 6-7，the suitable carbon source was glucose and the suitable nitrogen source was peptone.The most appropriate culture media was glucose 20g·L-1，peptone 10g·L-1，KH2PO43g·L-1，MgSO40.5g·L-1.

Pleurotus ostreatus；variant strain；identification；carbon and nitrogen source

S646.1

A

1003-8310（2016）03-0040-04

10.13629/j.cnki.53-1054.2016.03.009

国家现代农业（食用菌）产业技术体系建设专项（CARS-24）。

于清伟（1983-），男，本科，农艺师，主要从事食用菌育种、驯化栽培、病虫害防控技术研究。E-mail：zsztyqw@126.com

2016-03-18