乙型肝炎检测的假阴性与假阳性结果原因研究

李国花，黄世杰，詹虎，白志敏，苏银凤，陈镜清，刘云高，曾建兴

1.福建省晋江市医院检验科，福建晋江362200；2.福建省晋江市疾病预防控制中心检验科，福建晋江362200

乙型肝炎检测的假阴性与假阳性结果原因研究

李国花1，黄世杰1，詹虎2，白志敏1，苏银凤1，陈镜清1，刘云高1，曾建兴1

1.福建省晋江市医院检验科，福建晋江362200；2.福建省晋江市疾病预防控制中心检验科，福建晋江362200

目的研究造成乙型肝炎检测假阴性与假阳性结果的原因，以此提高乙型肝炎检测的准确率，避免假阴性与假阳性结果干扰，从而为乙型肝炎的临床诊断提供准确的依据。方法采用酶联免疫吸附法对该院2014年6月—2016年6月接受检查的700例乙肝患者进行检查，统计假阴性与假阳性情况，分析检测结果的错误原因。结果700例乙肝患者中，假性结果占16.0%，其中假阳性结果占6.0%，假阴性结果占10.0%；造成假阴性与假阳性结果的影响因素：检验方法占19.6%、试剂占25.9%、实验室操作占39.3%、其他占15.2%，实验室操作的占比均高于试剂、检验方法及其他（P＜0.05）。结论乙型肝炎检测的假阴性与假阳性结果主要与检查方法、试剂、实验室操作等因素有关，加强实验室、临床医生及患者的密切配合，减少各因素对检验结果的影响，可有效提高乙型肝炎检验结果的准确性。

乙型肝炎；酶联免疫吸附法；假阴性；假阳性

临床检测乙型肝炎病毒表面抗原主要采用酶联免疫吸附试验及胶体金免疫层析法［1］。酶联免疫吸附试验操作简单、技术可靠，灵敏度及特异性较高。目前，检测病毒表面抗原的方法如电化学发光法、时间分辨免疫荧光法、聚合酶链反应、化学发光法等得到不断改善，但酶联免疫吸附试验依然是检测病毒表面抗原的可靠技术［2］。在临床检测工作中，部分未患病患者检验结果呈阳性或患病患者检验结果呈阴性，一定程度上给乙型肝炎的检验带来不必要的麻烦。因此，需要准确鉴别乙型肝炎检测的阳性与阴性结果。该研究以该院2014年6月—2016年6月接受检查的700例乙肝患者为对象，对其假阴性与假阳性结果进行了统计，并分析了造成假阴性与假阳性结果的原因，提出在检查方法、试剂、实验室操作方面进行改进，可有效提高乙型肝炎检验的准确性。现就有关情况做如下报告。

1　资料与方法

1.1临床资料

选取该院2014年6月—2016年6月接受检查的乙肝患者共700例，其中男性368例，女性332例；年龄24～80岁，平均年龄（52.52±12.84）岁；病程1～7年，平均病程（3.14±0.32）年。

1.2方法

采用酶联免疫吸附法对700例乙肝患者进行检查，乙型肝炎五项产品试剂盒，由英科新创科技有限公司生产，采用伯乐酶标仪进行检测；采用英科新创科技有限公司提供的胶体金测试卡；对乙肝检查患者的检验结果进行观察，统计假阴性与假阳性情况，并对检测结果的错误原因进行分析。

1.3判定标准

判定标准［3-4］：乙肝阳性结果0.1050≤A＜0.2100为疑似阳性，A≥0.2100为阳性，假阴性/（阴性+假阴性）为假阴性率，阳性/（阳性+假阳性）为假阳性率。

1.4统计方法

采用统计学软件SPSS 17.0处理数据，计数资料用百分数（%）表示，行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

700例乙肝患者中，检验结果错误为112例，占16.0%。其中假阳性42例，占6.0%；假阴性70例，占10.0%。造成假阴性与假阳性结果的原因与检验方法、试剂、实验室操作等相关，其中实验室操作的占比为39.3%，均高于试剂、检验方法、其他的25.9%、19.6%、15.2%（χ2= 4.5723、10.3966、16.4232，P＜0.05），具体见表1。

表1　造成假阴性与假阳性结果的影响因素［n（%）］

3　讨论

近年来，乙型肝炎病毒感染呈全球性分布趋势，已成为临床常见的传染性疾病，可以通过血液及血液制品进行传播。有关调查显示［5］：全球每年新发的乙型肝炎病毒感染病例约有5千万，每年因乙型肝炎病毒感染而死亡的患者达100万人。我国乙型肝炎病毒表面抗原阳性率占10%，提示我国乙型肝炎的发病率较高，并逐渐成为严重危害人们健康的传染病之一［6］。乙型肝炎病毒感染后，影响患者病程和转归的因素较多，其疾病谱与病毒和人体免疫应答作用的结果密切相关。所以，分析乙型肝炎检验的假阳性与假阴性结果，对乙型肝炎检测准确性的提高具有重要意义。

酶联免疫吸附试验是临床检验乙型肝炎病毒感染的主要方法，其操作简便，敏感性高。酶联免疫吸附试验所用的试剂主要有北京万泰、美国雅培等，敏感度均为100%，特异性高达98.1%～99.8%，这些试剂可以批量进行操作，但假阳性结果依然存在［7］。该组检验结果错误率占16.0%，假阳性率占6.0%，假阴性率占10.0%；造成假阴性与假阳性结果的因素包括检验方法、试剂、实验室操作等，其中实验室操作的占比最高（P＜0.05）。研究表明［8-9］：影响酶联免疫吸附试验检测的因素较多，血细胞、标本的状态、洗板方式、加样量、酶标仪的使用、检测时间以及血清分离等都会对酶联免疫吸附试验检测的准确性造成影响。与此同时，标本充分离心与否也会造成假阳性结果发生。究其原因可能是上清液离心不充分，当含有过氧化物酶细胞成分的血浆在反应孔中进行加样时，因黏附于板条上而不易洗去，造成过氧化物产生酶样作用，故出现假阳性结果［10］。另外，血清中的类风湿因子同抗体结合会导致检测结果出现假阳性，血清中补体与免疫球蛋白G的Fc段结合也会产生假阳性结果，标本中免疫球蛋白聚合物吸附于塑料表面形成非特异性吸附，也是造成检测结果为假阳性的一个原因。针对上述造成乙型肝炎检验假阴性与假阳性结果的原因，该研究认为可以采取如下措施进行改进，从而减少假阳性结果，进一步提高乙型肝炎检验的准确性。具体措施为：①抗凝血标本在使用过程中，如血标本无法检验，应重新抽血进行检测；②试剂盒使用前平衡温度至室温；③抽血后置于温水中，时间保持2 h，3000 r/min离心，完全沉淀红细胞和纤维蛋白；④室温放置标本10 h后进行检测，确保血凝块良好收缩，标本中非特异性活性物质失活，以此减少非特异性反应现象；正确使用洗板机和酶标仪并且保证使用中二者仪器的状态是正常的。

由于酶联免疫吸附试验的操作简单，准确性高，使用方便，临床中得到广泛运用。但酶联免疫吸附试验存在一定局限，主要是因为酶结合物及抗原浓度高、吸光度值大的情况下，乙肝患者或乙型肝炎病毒携带者会出现漏检情况；酶结合物及抗原浓度低，吸光度值小的情况下，可产生假阴性结果。在乙型肝炎病毒感染的检测中，一旦出现漏检情况，除可能会延误临床诊治最佳时机外，还会给血库工作造成不必要的麻烦，如患者输注漏检的乙肝病毒核心抗体阳性、乙肝病毒e抗原阳性、乙型肝炎病毒阳性献血者的血，可能会造成严重后果。所以，相关部门必须引起对血库安全的高度重视，应摒弃以往单项表面抗原检查，对献血人员进行乙肝5项检测，以确保万无一失。针对乙型肝炎检验出现假阳性与假阴性结果这一问题，建议从如下几个方面展开检验工作，以促使临床检验结果的准确性进一步提高。具体为：①检验人员必须对相关试剂和仪器进行检查，避免因操作不当导致检验假阳性与假阴性结果的发生；②实验室检查前，应对患者进行检查，认真询问病史及服药情况；③督促患者遵守医嘱，检查前做到停药、空腹。检验人员、临床医师及患者三方密切配合、共同努力，才能减少假阴性与假阳性结果，从而可为乙型肝炎的可靠诊断提供有利条件。

综上所述，乙型肝炎检验中产生假阳性与假阴性结果的原因较多，主要的影响因素包括检查方法、试剂选择、实验操作等诸多方面。临床检验工作中，必须根据乙型肝炎检验假阳性与假阴性结果的影响因素，对有关问题进行解决和处理，同时加强检验人员、临床医师及患者的配合，减少假阴性与假阳性结果，才能有效提高乙型肝炎检验的准确性。

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［2］席晶云，安淑敏.乙型肝炎检验结果假阴性与假阳性的研究［J］.医学美学美容：中旬刊，2015，24（6）：214-215.

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［5］蔡余霞.ELISA法和胶体法检测乙型肝炎两对半的假阴性和假阳性率对比研究及原因分析［J］.中国医药指南，2012，22（29）：89.

［6］程育春，侯临平，张洪霞，等.酶联免疫吸附试验加样量对丙型肝炎病毒抗体检测的影响［J］.山西医药杂志：下半月版，2011，40（18）：950.

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Research on Causes of False-negative and False-positive Results of Hepatitis B Test

LI Guo-hua1，HUANG Shi-jie1，ZHAN Hu2，BAI Zhi-min1，SU Yin-feng1，CHEN Jing-qing1，LIU Yun-gao1，ZENG Jian-xing1
1.Department of Clinical Laboratory，Jinjiang Hospital，Jinjiang，Fujian Province，362200 China；2.Department of Clinical Laboratory，Jinjiang Disease Control and Prevention Center，Jinjiang，Fujian Province，362200 China

Objective To research the causes of false-negative and false-positive results of hepatitis B test thus improving the accurate rate of hepatitis B test，avoid the interference of false-negative and false-positive results and providing the accurate basis for the clinical diagnosis of hepatitis B.Methods 700 cases of patients with hepatitis B in our hospital from June 2014 to June 2016 were examined by the enzyme linked immunosorbent assay，and the false-negative and false-positive conditions were counted and the mistake causes of test results were analyzed.Results In the 700 cases of patients with hepatitis B，the false results accounted for 16.0%，including 6.0%false-positive result and 10.0%false-negative result，and the influence factors of them were the test method（19.6%），reagent（25.9%），laboratory operation（39.3%）and others（15.2%），and the proportion of laboratory operation was higher than that of reagent，test method and others，P＜0.05.Conclusion The false-negative and false-positive results of hepatitis B test are mainly related to examination method，reagent and laboratory operation，and enhancing the close cooperation of laboratory，clinical doctors and patients and reducing the effect of various factors on test results can effectively improve the accuracy of test results of hepatitis B.

Hepatitis B；Enzyme linked immunosorbent assay；False-negative；False-positive

R47

A

1672-5654（2016）10（b）-0015-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.29.015

李国花（1986.6-），女，福建晋江人，本科，主管检验师，主要从事临床检验工作。

（2016-07-15）