藏鸡大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究

贡 嘎　益西措姆　扎西拉姆　德吉卓嘎

（西藏大学农牧学院动物科学学院，西藏林芝　860000）

藏鸡大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究

贡 嘎益西措姆扎西拉姆德吉卓嘎

（西藏大学农牧学院动物科学学院，西藏林芝860000）

本文从西藏林芝某农户家采集藏鸡新鲜无污染粪便样品50份，组织样品10份，分离鉴定细菌后，采用WHO推荐的K-B纸片法测定常用抗菌药物的敏感性。结果显示，60份样品中分离鉴定出10株藏鸡大肠杆菌。这些菌株对16种抗菌药物产生了不同程度的耐药。其中对氨苄西林和头孢噻吩耐药率最高，达100%，对头孢哌酮、头孢噻肟、头孢呋辛、妥布霉素、链霉素和哌拉西啉耐药率较高，达80%，对头孢曲松、头孢唑啉耐药率为70%，对阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素耐药率为60%，对庆大霉素耐药率为50%，但耐药菌株对头孢西丁和头孢他啶敏感性较高，达90%。由此可见，藏鸡大肠杆菌分离株对常用抗菌药存在着一定的耐药现象。

藏鸡大肠杆菌分离鉴定耐药性

鸡大肠杆菌病是严重危害养鸡业的重要细菌性传染病，规模养鸡场细菌性疫病的发生以大肠杆菌为主。该病血清型多样、抗原性复杂、临床症状和病理变化多变，不同品种、不同日龄的鸡群均可发病，轻者可以引起鸡群生产性能下降，重者导致发病鸡大批死亡，尤其对雏鸡危害更大。临床上经常使用大量的抗菌药物，导致不断出现耐药大肠杆菌株，从而也不断扩大了耐药谱[1- 4］。

2015年9月，西藏林芝某农户藏鸡群发生了严重腹泻并伴有血便现象，严重者为死亡。其中1日龄经用抗生素治疗后效果不佳。本文从该农户腹泻鸡群疑似患鸡大肠杆菌病的新鲜无污染腹泻物中分离大肠杆菌，对其进行鉴定，以期了解藏鸡大肠杆菌耐药现象，进而为藏鸡大肠杆菌防控策略的制定提供依据。

1　材料与方法

1.1材料

从西藏林芝采集藏鸡新鲜无污染粪便（血便），装入自封袋，编号，待检。

1.2主要试剂

（1）普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红亚甲蓝平板均由本实验室制备[5］。

（2）药敏纸片

药敏纸片：共16种，购自杭州滨和生物试剂有限公司。

1.3细菌的分离与鉴定

1.3.1分离培养

无菌取出待检粪样，接种在普通平板上，在37℃培养24h，观察生长情况，并进行革兰氏染色镜检。

1.3.2鉴定

挑取普通平板上典型菌落分别接种在麦康凯琼脂平板及伊红亚甲蓝平板上画线，37 ℃培养24 h，观察结果。

1.3.3药敏试验

无菌操作选取分离细菌纯培养物致密画线于普通营养琼脂平板上，将临床常用的16种抗生素药敏纸片贴于琼脂平板表面中央处，倒置平皿，放于37 ℃培养箱中培养24 h 后观察结果。

1.4抑菌结果的判定

参照 NCCLS（2013）公布的标准以敏感（Susceptible）、中介（Intermediate）、耐药（Resistant）三种形式对抑菌圈大小做出判定，个别抑菌圈大小参考相关文献做出判定，具体判定标准见表 1。

2　结果与分析

2.1大肠杆菌分离鉴定

（1）在普通平板上生长出圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落。经革兰氏染色后发现革兰氏阴性两端钝圆的直杆菌。

（2）在麦康凯琼脂平板及伊红亚甲蓝平板上分别形成红色菌落和带金属闪光的菌落。

表1 药敏试验判定标准

2.2大肠杆菌体外药敏实验结果

药敏试验选用16种抗菌药物，结果显示，藏鸡耐药大肠杆菌对同类药物之间存在交又耐药性。

2.3藏鸡耐药大肠杆菌的耐药率

2.3.1藏鸡大肠杆菌的耐药情况

来自西藏林芝地区10个牦牛耐药大肠杆菌对 16 种抗菌药物有不同程度耐药性。见表2，图1。

图1　鸡大肠杆菌对16种抗菌药的耐药率（%）

表2 药物敏感试验结果

2.3.210株耐药菌株的耐药谱

10 株藏鸡耐药大肠杆菌对 16 种抗菌药物有不同程度的耐药性，且多重耐药现象较重，最少为 6 种，最多为 15种。11耐菌株所占总菌株比例最大为 40%；其次是 6耐为 20%；10耐、12耐、14耐、15耐菌株均占总菌株的 10%。见图 1-2。

图2 耐药性大肠杆菌的各耐药谱占耐药菌的比例

表3 耐药大肠杆菌的多重耐药率

3　讨论

已有研究表明，我国多重耐药现象普遍严重[ 5］。本实验经细菌分离后在麦康凯、伊红美兰培养基上纯培养以及细菌革兰氏染色镜检后确定为10株大肠杆菌。对所分离的10株藏鸡大肠杆菌进行耐药性检测，结果显示16种抗菌药物的耐药率较高，作者认为，由于西藏养殖户对细菌耐药性的认识不够清楚，因此在食品动物养殖中普遍存在滥用抗生素以及严重缺乏联合、交叉、轮换等用药方式来减少细菌的耐药率的意识。

本实验采用WHO 推荐的 K-B纸片法检测10株大肠杆菌对16种抗菌药物的敏感性。其中对氨苄西林和头孢噻吩耐药率最高，达100%，对头孢哌酮、头孢噻肟、头孢呋辛、妥布霉素、链霉素和哌拉西啉耐药率较高，达80%，对头孢曲松、头孢唑啉耐药率为70%，对阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素耐药率为60%，对庆大霉素耐药率为50%，但耐药菌株对头孢西叮和头孢他啶敏感性较高，达90%。

兽医临床用药应根据药敏试验结果，有针对性地使用，而且必须经常更换抗菌药种类，以免产生新的耐药菌株，同时较好地控制畜禽大肠杆菌病，只有这样才能有针对性的选用敏感药物。

试验结果显示藏鸡大肠杆菌对常用抗菌药物耐药率较高，耐药谱较广。所以对病原菌进行耐药性检测势在必行。因此建议在兽医临床上应选停用耐药性极强的药物，应选择敏感性较高的药物来针对性治疗藏鸡大肠杆菌病。

[1]张晓红.鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验[J］.中国动物检疫，2013，30（1）：65-66.

[2]张遂平，杨建奋，邵艳华.鸡大肠杆菌分离及药敏试验研究[J］.中国畜牧业，2013（2）：62-63.

[3]刘娣琴，杨红梅，贾志江.鸡大肠杆菌病的防治误区与对策[J］.畜牧兽医杂志，2012，31（5）：89-89.

[4]雷崇良.鸡沙门菌、大肠杆菌和传支混合感染的诊治[J］.中国家禽，2004，26（6）：24.

[5]吕殿红，曾振灵，陈杖榴，等.大肠埃希菌多重耐药性的形成机制[J］.动物医学进展，2007，28（7）：76-81.

贡嘎（1983-），男，藏族，讲师，预防兽医学硕士，研究方向:人畜共患病。

2015年西藏自治区大学生创新性项目