2013-2015年度甘肃省流感病毒病原学特征分析

李保娣 李红育 张慧 于德山 何健

730000 兰州,甘肃省疾病预防控制中心



·论著·

2013-2015年度甘肃省流感病毒病原学特征分析

李保娣 李红育 张慧 于德山 何健

730000 兰州,甘肃省疾病预防控制中心

目的 分析甘肃省2013-2015年流行性感冒(流感)的流行特征，为今后的流感防控工作提供科学依据。方法 采集全省19家国家级流感监测哨点医院门诊流感样病例(influenza-like illness，ILI)的咽拭子，以荧光定量PCR方法检测病毒核酸，核酸检测阳性标本用犬肾细胞(MDCK)进行病毒分离培养鉴定。结果 对37 332份ILI咽拭子进行流感病毒核酸检测，阳性5 928份，阳性率为15.88%；2013年第14周-2016年第13周三个监测年度流感病毒核酸阳性率依次为14.52%、12.36%和20.15%。按年龄组分析，<5岁婴幼儿阳性率最低为12.78%，显著低于其他年龄组；15-24岁阳性率最高为24.75%。对6 285份标本进行了流感病毒分离，分离到流感病毒1 630株，检出率为25.93%，其中395株甲型H1N1、524株季节性H3N2、342株乙型Victorian系、367株乙型Yamagata系。结论 甘肃省流感病毒型别表现为交替流行规律，应积极采取综合性防控措施。

Fundprogram:NationalScienceandTechnologyMajorProjectforInfectiousDiseaseResearchofChina(2012ZX10004-208)

流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其传播速度快，易在人群中引起大范围流行、季节性流行及反复流行。2009年9月以来，甘肃省国家级流感监测哨点医院及网络实验室构成了覆盖全省所有市州的监测体系。本研究旨在分析2013-2015年甘肃省流感病毒病原学特征，探讨其流行规律，为全省流感预防控制提供参考。

1 材料与方法

1.1 病例定义 流感样病例(influenza-likeillness，ILI)：发热(体温≥38 ℃)，伴咳嗽或咽喉疼痛等症状之一，缺乏其他实验室诊断依据者。

1.2 流感病例哨点监测 全省19家国家级流感监测哨点医院报告ILI病例，采集ILI标本，甘肃省疾病预防控制中心及各市州疾病预防控制中心进行病原学检测并录入系统，暴发疫情监测数据由疫情发生地疾病预防控制中心报告。

按照《全国流感监测方案》(2010版)要求，采集发病3d之内未使用抗病毒类药物的ILI咽拭子，每年10月1日-次年3月31日每家哨点医院每周采集10-15份，4-9月每月采集5-15份标本。采集的咽拭子24h内送至网络实验室，于4 ℃或-70 ℃以下保存，全过程避免标本反复冻融。

1.3 病原学检测

1.3.1 病毒RNA提取:用RneasyMiniKit(德国Qiagen公司)提取核酸，操作按试剂盒说明书进行。

1.3.2 流感病毒核酸检测:均使用Real-timePCR方法检测，首先检测甲型流感、乙型流感；甲型流感阳性再进一步检测甲型H1N1流感、季节性H1和H3流感；乙型流感阳性再进一步进行Victorian和Yamagata分型检测。使用的引物和探针为中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所提供，扩增试剂盒为德国Qiagen公司生产，所有操作均按照试剂盒说明书进行。

1.3.3 流感病毒分离鉴定:核酸检测阳性标本经无菌处理后接种于状态良好的MDCK细胞和(或)鸡胚进行流感病毒分离培养，然后用血凝(HA)和血凝抑制法(HI)鉴定流感病毒的型别及亚型。

1.4 主要仪器设备 实时荧光PCR仪(ABI7500/7300仪)、SIGMA3-18K离心机、倒置显微镜(奥林巴斯)等。

1.5 统计学方法 数据采用Excel2010 和SAS9.1软件进行统计分析。不同样本类型的阳性率比较用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 流感病毒核酸检测结果 2013-2015年度共检测ILI咽拭子标本37 332份，流感病毒核酸检测阳性5 929份，阳性率为15.88%；其中：乙型流感2 588份，占总阳性数的43.66%；季节性H3N2阳性1 724份，占29.08%；甲型H1N1为1 600份，占26.99%。按年统计，2015年阳性率最高(20.15%)，2013年次之(14.53%)，2014年阳性率最低(12.36%)，详见表1、图1。按标本来源分，哨点医院送检的ILI标本36 193份，阳性率15.41%；非哨点医院送检的ILI标本856份，阳性率22.43%；暴发疫情报告病例送检的ILI标本283份，阳性率56.89%；详见表2。

2013-2015年，甘肃省共报告流感/ILI暴发疫情23起，其中20起发生在中小学校及托幼机构，占总疫情数的86.96%。所有疫情共检测标本283份，流感病毒核酸检测阳性161份，阳性率为56.89%，其中96份乙型、42份季节性H3N2、22份甲型H1N1、1份混合型(季节性H3N2和乙型流感混合)。所有疫情共报告发病数718例，死亡2例，其中甲型H1N1流感暴发疫情6起、死亡2例，其他型流感暴发疫情17例。

表1 2013-2015年度甘肃省流感病毒核酸检测结果

注：N:数量；L:占总阳性数的百分比

Note: N: number; L: percentage of total positive number

图1 2013年4月-2016年3月甘肃省流感流行特征Fig.1 Influenza epidemic characteristics of Gansu province from April 2013 to March 2016

标本来源Specimensource检测数Testnumber阳性数Positivenumber阳性率Positiverate(%)甲型N1N1A(H1N1)季节性H3N2SeasonalH3N2乙型InfluenzaB混合型Mixedtype哨点医院Sentinelhospital36193557615.4114851652242711ILI暴发疫情ILIoutbreak28316156.892242961非哨点医院Nonsentinelhospital85619222.439330654合计total37332592915.8816001724258816

注：哨点医院采集标本阳性率显著低于ILI暴发疫情的阳性率(χ2=364.593，P<0.01)

Note: Positive rate of sentinel hospitals was significantly lower than that of the outbreak of ILI (χ2=364.593,P<0.01)

表3 2013-2015年度甘肃省不同年龄人群ILI标本核酸检测

2.2 分年龄ILI的检测结果 将ILI标本按年龄分为5组(0-、5-、15-、25-和60-岁组)统计，0-4岁组流感病毒阳性率最低(12.78%)；5-14岁组流感病毒阳性率最高(24.75%)；60岁以上组阳性数最少，占总阳性数的3.85%。经统计学检验，各年龄组ILI病例中病毒核酸阳性率与总体阳性率差异有统计学意义(χ2=663.013，P<0.01)；5-14岁组病例流感病毒核酸阳性率与其他年龄组阳性率差异均有统计学意义(χ2=96.972-622.864，P<0.01)；其余各年龄组流感病毒核酸阳性率差异无统计学意义(χ2=0.042-5.436，P>0.05)详见表3。

2.3 流感病毒分离结果 2013-2015年甘肃省对6285份标本进行了流感病毒分离培养，分离到流感病毒1 630株，检出率为25.93%；其中395株甲型H1N1、524株季节性H3N2、342株乙型Victorian系、367株乙型Yamagata系；有两株待定型，其中1株为甲型H1N1和乙型Victorian系混合株。全甘肃省除敦煌市外其余15家网络实验室均具备病毒分离能力，2015年全省分离病毒数最多(765株)，检出率为43.61%，三个监测年度流感病毒检出率差异有统计学意义(χ2=468.055，P<0.01)，详见表4。

表4 2013-2015年度甘肃省流感病原学监测阳性率及病毒型别分布

2.4 病原学分布特征 2013-2015年分离到的流感阳性毒株数分别为356株、509株和765株。2013年4-10月仅检出2例甲型H1N1，11-12月以乙型Yamagata系为主；随后2014年1-5月甲型H1N1毒株增多，与乙型Yamagata系共同成为优势株，6-11月甘肃省未有阳性毒株检出，12月份开始季节性H3N2突然增多直至2015年2月底一直为优势毒株；2015年3-5月乙型Yamagata系又重新取代季节性H3N2而成为优势株，6-11月全省亦未有阳性毒株检出，至此，甲型H1N1在甘肃省内连续19个月未检出阳性，12月份检出2例乙型Yamagata系；2016年1-3月，甲型H1N1、乙型流感同时作为优势株而持续增加，且乙型Victorian系比例均大于乙型Yamagata系，同时，季节性H3N2也经常检出，且在2月份检出达到20株。

2009年甲型H1N1流感流行之后，甘肃省流感流行季节流感流行毒株主要以乙型和季节性H3N2型交替形式出现，其中乙型Victorian系和乙型Yamagata系也呈交替流行，直至2015监测年度后期，甲型H1N1型流感毒株又重新出现并与其他型系毒株共同流行。

3 讨论

2009年以来，甘肃省为应对流感防控新形势，形成了覆盖全省所有地州市的高效、敏感的流感监测网络。从2013-2015年ILI年龄分布来看，甘肃省流感发病例数最高的人群是0-4岁的婴幼儿，其次为5-14岁的青少年儿童，这与我省前几年监测结果[1]相同，也与我国其他地区及欧美北方地区流感流行特征研究结果[2-4]相一致。高度重视医疗机构ILI标本的采样质量，可以一定程度提高ILI阳性率。

甘肃省为典型北方省份，夏秋季(5-9月份)流感样病例数少，流感毒株检出率低；每年11月份开始ILI呈上升趋势，12月份和次年2月份流行达到高峰，呈明显的季节性、单峰性流行，流行强度受当年流感病毒活动优势型别、人群免疫状况等因素的影响；提示甘肃省冬春季12-2月份流感高峰前需加强流感监测，特别加强学校等学龄儿童聚集场所的监测工作，防止暴发疫情的发生。

2014年5月份之后甘肃省流感流行主要以B型和A(H3N2)型为主，到2016年1月份以后甲型H1N1再次流行，在2009年之前人群中流行的季节性H1N1流感从2010年之后再未检测到，可能已经被甲型H1N1流感毒株所替代。今后甘肃省流感监测需严防甲型H1N1和其他流感旧毒株的再流行及新型毒株的出现。毒株的鸡胚分离培养及暴发疫情处置需要完善。

传统的数据收集和分析方法结合大数据在公共卫生领域的应用必然会改变现在疫病防控被动的局面[5]。加强网络实验室质量控制，切实做好流感监测工作，及时掌握流感的活动情况，明确流行株并及早发现变异株，为季节性流感的流行、流感大流行的预警预测提供依据[6，7]。

[1] 李红育，张慧，姜中毅，等.2009-2012年甘肃省流感监测病原学结果分析[J].中华实验和临床病毒学杂志，2014,28(2)：120-122. doi:10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2014.02.015.

[2] 高燕，方立群，张勇，等.中国大陆季节性流感活动的时空分布特征[J].中华流行病学杂志,2009，30(11):1097-1101. doi:10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2009.11.001.

[3] Viboud C,Wladimir JA.Simonsen L.Influenza in tropical regions[J].PloS Med，2006，3 (4):1097-1101468-471e89 0468-0471. doi:10.1371/journal.pmed.0030089.

[4] Arkema JM, Meijer A, Meerhoff TJ,et al.Epidemiological and virological assessment of influenza activity in Europe,during the 2006-2007 winter[J].Euro Surveill, 2008，13(34):pii=18958. Available online: http://www.eurosurveillance.org/ViewArticle.aspx?ArticleId=18958.

[4] 邹晓辉,朱闻斐,杨磊,等.谷歌流感预测—大数据在公共卫生领域的尝试[J].中华预防医学杂志, 2015,49(6)：581-584.doi:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2015.06.026.

[6] Centers for Disease Control and Prevention.[EB/OL].[2007-02-21].http://www.cdc.gov/flu/weekly/pdf/flu surveillance overview.pdf.

[7] Monto AS,Comanor L,Shay DK, et al. Epidemiology of pandemic influenza: use of suiveillance and modeling for pandemic preparedness[J].J Infect Dis,2006,194(Suppl2):S92-S97. doi: 10.1086/507559.

Analysis on the pathogenic characteristics of influenza viruses in Gansu Province，2013-2015

LiBaodi,LiHongyu,ZhangHui,YuDeshan,HeJian

GansuProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Lanzhou730000,China

HeJian,Email: 1014770674@qq.com;LiHongyu,Email:hongyuligs@163.com

ObjectiveToofferascientificbasisfortheinfluenzapreventionandcontrol,weanalysedtheinfluenza(flu)characteristicsofGansuprovinceduringtheyearof2013to2015.MethodsWedetectedthesamplesoffluvirus,whichcollectedfromthethroatswabsofoutpatientswithinfluenza-likeillness(ILI)inthe19nationalinfluenzasurveillancesentinelhospitalsoftheGansuprovince,byfluorescencequantitativePCRtechnique,thepositivespecimenswereusedtoisolateandidentifytheviruswiththecaninekidneycells(MDCK).ResultsAftertheinfluenzavirusnucleicaciddetectionsof37 332ILIthroatswabs,wegot5 928positivesamples,andthepositiveratewas15.88%.Fromthe14thweekof2013tothe13thweekof2016,thepositiveratesoftheinfluenzavirusnucleicacidwereinturnasfollowing:14.52%, 12.36%and20.15%respectively.Accordingtoagegroups,theresultsshowedthatthelowestpositiverateof12.78%wasfromthebabiesbelow5yearsold,whichwassignificantlylowerthanthatoftheotheragegroups.Thehighestpositiverateof24.75%wascamefromthegroupof15-24yearsold. 1 630influenzaviruswasisolatedfrom6 285specimens,thepositiveratewas25.93%,whichincluding395A(H1N1), 524seasonalH3N2, 342BVictorianvirusand367BYamagatavirus.ConclusionsTheepidemictypesofinfluenzavirusinGansuprovinceperformintheruleofalternativespreading.Soitisnecessarytotakeactivemeasurestopreventandcontrolhumaninfectionwiththeinfluenzavirus.

Influenzavirus;Crowdmonitoring;Virusculture;Polymerasechainreaction

何健，Email：1014770674@qq.com；李红育，Email：hongyuligs@163.com

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.05.008

流感病毒；人群监测；病毒培养；聚合酶链反应

国家“十二五”艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项(2012ZX10004-208)

2016-05-20)