HPLC法测定麦冬及环境中多效唑的残留量*

杨言琛，张兴国，郝安辉，李 铜，罗 霄

西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031

HPLC法测定麦冬及环境中多效唑的残留量*

杨言琛，张兴国△，郝安辉，李 铜，罗 霄

西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031

目的：确立麦冬及其生长环境中多效唑残留的快速检测方法。方法：采用无水甲醇，超声30分钟提取麦冬样品及其生长环境中多效唑。采用A gi l ent-C18色谱柱，流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸（50：15：35），流速1.0 m L/m i n；检测波长220 nm，柱温30℃。结果：在0.000 2～0.015 μg之间线性良好，相关系数为0.999 6，回收率在98.6%～105.6%之间，RSD值为2.9149%，精密度实验、稳定性考察和重现性实验的RSD分别为0.998 5%、1.368 9%、1.008 3%。结论：本方法可快速、简便、准确地测定麦冬植株样品及其生长环境中的多效唑残留量。

麦冬；生长环境；多效唑；高效液相色谱法；残留量测定

多效唑是英国ICI公司于20世纪70年代末研制开发的一种植物生长调节剂，并具有一定的杀菌作用，其作用机理是抑制赤霉素的生物合成［1］。现广泛用于多种农作物种植，有报道称多效唑在一些中药材种植中也被广泛应用［2-3］。

麦冬为百合科植物麦冬［Ophiopogon japonicus (Li nn.f)Ker-Gaw l.］的干燥块根，具有养阴生津，润肺清心的功效［4］。近年来，部分麦冬种植户为追求产量而盲目施用多效唑，虽然报道称其毒性较低，但因其在环境中性质稳定，残留期较长［5］，长期不合理的施用将严重影响麦冬产业的健康及可持续发展。多效唑主要能促进麦冬块根膨大。目前常见其他农作物及环境中多效唑残留的检测多利用气相色谱法或气质联用法等，前处理较为复杂［6-7］，麦冬中多效唑的残留检测迄今未见有H PLC法的研究报道。本研究首次将H PLC法应用于麦冬及其种植环境中多效唑残留的检测，为麦冬的GAP规范化种植及质量控制和资源的可持续开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津LC-20AT型)，紫外检测器(岛津SPD-20A)等。

1.2 试剂 无水甲醇(AR、H PLC)、乙腈(H PLC)、活性炭(AR)、多效唑对照品(纯度≥95%，如吉生物科技)等。

1.3 色谱条件 色谱柱：Agi l ent 5 TC-C18，250m m× 4.6m m；流动相：甲醇-乙腈-0.1%甲酸(50∶15∶35)，流速1.0 m L/m i n；检测波长220nm，柱温30℃。

1.4 样品制备

1.4.1 对照品溶液制备 精密称取多效唑对照品0.025 9 g，加甲醇定容至50 m L制成对照品溶液母液，再分别取1、10、100μL用甲醇定至10m L，制成对照品溶液-1、对照品溶液-2、对照品溶液-3。

1.4.2 样品溶液制备 干燥样品粉碎后过2号筛，新鲜植株样品捣碎并研磨混匀，水样避光低温保存待用。

1.4.2.1 干燥块根与须根、土壤样品 精密称取样品约1 g，并精密加入甲醇10 m L，超声提取30分钟，过0.45μm滤膜，上机测定。

1.4.2.2 叶片样品 精密称取样品约1 g，并精密加入甲醇10m L，超声提取30分钟，提取液加活性炭粉末约2 g，水浴60℃约1小时至溶液无色，过0.45 μm滤膜，上机测定。

1.4.2.3 新鲜植株样品 精密称取样品约3 g，制备方法同干燥样品，过0.45μm滤膜，上机测定。

1.4.2.4 水样 精密量取10 m L，挥干水分后，残渣中精密加入甲醇10 m L溶解，过0.45 μm滤膜，上机测定。

1.5 标准曲线 分别取对照品溶液-1、对照品溶液-2、对照品溶液-3进行测定，绘制标准曲线，得回归曲线方程Y=0.7×10-6X-0.000 2，r=0.999 6，见表1、图1。

表1 多效唑线性考察结果

图1 多效唑标准曲线

2 结果与分析

2.1 精密度考察 精密取同一对照品溶液，连续进样5次，每次进样为5μL，结果显示RSD为0.9985%，说明仪器的精密度良好，见表2。

2.2 稳定性考察 精密取同一麦冬样品的待测溶液，在间隔0、4、8、12、24小时时各测定1次，每次进样10 μL，结果RSD为1.368 9%，表明样品中多效唑含量在24小时内稳定，见表3。

表3 稳定性考察结果

2.3 重现性 精密称取同一麦冬样品共5份，每份约1g，按前述方法制备，上机测定，计算多效唑含量，结果显示RSD值为1.008 3%，说明本方法重现性良好，见表4。

表4 重现性考察结果

2.4 加样回收率 精密称取已知多效唑含量的麦冬样品6份，每份约1g，分别加入20μL或15μL对照品溶液母液，按样品溶液制备方法处理，上机测定，每次进样10 μL。结果显示平均回收率为102.64%，RSD为2.9149%，见表5。

表5 加样回收率实验结果

2.5 样品中多效唑含量的测定 选取麦冬生长期的样品(11月中旬，多效唑施用20天后)和麦冬采收期的样品(4月前后)，生长期样品采用新鲜样品直接测定，采收期样品经干燥处理后测定。样品来源主要为麦冬道地产区农户种植，并选取了同地方新建GAP种植示范园样品(种苗来源于当地农户种植)。样品类型有麦冬植株样品和麦冬生长环境样品，测定结果见表6、图2。

表6 多效唑含量测定结果（n=5）

图2 对照品和各样品中多效唑含量测定图谱

3 结论

本方法条件下，在0.000 2～0.015 μg之间线性良好，相关系数r为0.999 6，回收率在98.6%～105.6%之间，RSD值为2.914 9%，精密度实验、稳定性考察和重现性实验的RSD分别为0.998 5%、1.3689%、1.0083%，多效唑保留时间约为12.2分钟左右，可以实现多效唑的分离度均＞1.5，能够满足麦冬植株及其生产环境中多效唑残留的定量分析。分析检测结果，在多效唑施用20天后，在麦冬植株各部位能检测到较高水平的多效唑残留，并且对其周围环境的影响也较为严重，在土壤中检测到大量的残留，农田水体中也有一定水平的残留；在多效唑施用5个月后进入采收期，土壤中仍有一定水平的多效唑残留，麦冬植株各部位仍能检测到多效唑残留，但符合国家限量标准(GB2763-2012)0.5μg/g。GAP种植示范园样品中仍然检测到微量的残留0.076 3 μg/g，远低于国家限量标准，种植过程中没有施用多效唑，选择的农田未曾施用过多效唑，种苗来源于当地农户种植的麦冬资源，这可能是多效唑残留的来源，这也为麦冬的GAP生产提出一个要求，从施用过多效唑的麦冬中选取的种苗，需要在无多效唑的环境中经过2～3年的种植，使多效唑残留降解到标准以下才可用于GAP规范种植。

本方法的前处理简单快捷，结果准确可靠，整体检测时间短，检测成本较低，可以很好地应用于麦冬GAP生产中多效唑残留水平的监测，确保麦冬质量符合GAP要求，为规范麦冬的GAP生产和促进麦冬产业的可持续发展提供科学依据。

［1］Steffens GI，Wang SY.Bi ochemical and physiological alterations in appletrees caused by agibberell in biosynt hesisinhibit orpaclobut razol［J］.A ct a Hort icul turae，1986，179（179）：433-442.

［2］佘佳荣，杨仁斌，王海萍，等.多效唑在油菜植株、油菜籽和土壤中的残留［J］.农药学学报，2008，10（1）：113-116.

［3］于声，程波，袁志华.多效唑15%可湿性粉剂在小白菜和土壤中残留动态研究［J］.农业环境科学学报，2007，26（5）：1768-1771.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：144-145.

［5］白桦，邱月明，张青.气相色谱-质谱法测定苹果中多效唑残留量［J］.分析测试学报，2005，24（4）：64-66.

［6］胡艳云，徐慧群，姚剑，等.分子印迹固相萃取-液相色谱-质谱法测定果蔬中20种三唑类农药残留［J］.分析化学，2014，42（2）：227-232.

［7］王菲，李彤，马辰.超高效液相色谱-串联质谱法测定中药材中三唑类杀菌剂及三嗪类除草剂的残留量［J］.色谱，2013，31（3）：191-199.

Determination of Paclobutrazol Remained in MaiDong and Its Growth Environment by HPLC

YANG Yanchen，ZHANG Xingguo△，HAO Anhui，LI Tong，LUO Xiao
School of Life Science and Engineering of Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，China

Objective:To establish rapid determination method of paclobutrazol remained in MaiDong［Ophiopogon japonicus（Linn.f.）Ker-Gawl.］.Methods:Paclobutrazol remained in MaiDong was extracted by ultrasound for 30 minutes in absolute methanol.Agilent-C18chromatographic column was adopted，mobile phase:methanol-acetonitrile-0.1%methanoic acid（50:15:35），flow rate:1.0mL/min；detection wavelength was 220 nm，column temperature:30℃.Results:It showed better linear relationship between 0.000 2 and 0.015 μg，correlation coefficient was 0.999 6，recoveryrate was between 98.6%and 105.6%，RSD=2.9149%，RSD of precision，stability and reproducibility tests were 0.998 5%，1.368 9%and 1.008 3%.Conclusion:The method could be used to determine residual quantity of paclobutrazol in MaiDong and its growth environment accurately，simply and rapidly.

MaiDong；growth environment；paclobutrazol；HPLC；residual quantity determination

R28

A

1004-6852（2016）09-0037-03

2015-09-22

四川省“十二五”科技支撑计划项目资助（编号2011N Z0098）。

杨言琛（1986—），男，在读硕士研究生。研究方向：中药资源利用与G A P研究。

△通讯作者：张兴国（1958—），男，副教授。研究方向：中药资源开发利用与G A P、中药资源-品种-环境-品质-药效研究。