秦巴地区产杜仲皮急性毒性实验的研究

曾吉祥，王健，张晓林，龚远林

(达州职业技术学院，四川 达州　635001)



秦巴地区产杜仲皮急性毒性实验的研究

曾吉祥，王健，张晓林，龚远林

(达州职业技术学院，四川 达州635001)

目的：比较秦巴地区产的杜仲水提组分和醇提组分对小鼠的急性毒性，为杜仲临床应用和杜仲产品开发提供基础依据。方法：应用经典的急性毒性实验方法测定杜仲水提组分的最大耐受量(MTD)和醇提组分的半数致死量(LD50),并且在整个急性毒性实验过程中，观察小鼠灌胃后的活动状态以及体重变化。结果：杜仲水提组分的MTD为24 g/kg，杜仲醇提组分的LD50(95%的可信限)为54.51(49.72～59.77)g/kg，主要毒性症状有倦怠、俯卧不动、抽搐等。结论：秦巴地区产杜仲水提组分与醇提组分相比，其中醇提组分的急性毒性较大，水提组分较为安全。

秦巴地区；杜仲；急性毒性

杜仲为杜仲科的多年生落叶乔木，适宜生活在温暖潮湿的气候环境中，在我国四川、云南、贵州、陕西等地分布[1-3]。近年来，国内外学者对杜仲的化学成分、生物学、药理作用、保健品开发等领域的研究较多，但是在杜仲的急性毒性方面研究甚少，甚至因为对杜仲的毒性不了解，导致一系列的中毒状况[4]。本文致力于对杜仲水提组分和醇提组分急性毒性的研究，为杜仲的临床应用和杜仲产品的开发提供相应的理论基础[5]。

1　实验材料与方法

1.1实验材料

杜仲皮采自四川达州，经惠康药业有限公司鉴定为药用杜仲；乙醇等试剂均为分析纯；昆明种小鼠，健康适龄，体重18～22 g，SPF级，购自第三军医大实验动物中心。

1.2实验方法

1.2.1杜仲不同组分的制备(1)杜仲水提组分的制备：取杜仲皮200 g，粉碎，用10倍量水浸泡，加热回流提取3次，1.5 h/次，滤液减压浓缩干燥后，即得杜仲皮水提浸膏。(2)杜仲醇提组分的制备 取杜仲皮200 g，粉碎，用70%乙醇煮沸回流提取3次，1.5 h/次，滤液减压浓缩干燥后，即得杜仲皮醇提浸膏。

1.2.2急性毒性实验(1)杜仲水提组分最大耐受量(MTD)的测定：根据预试验结果无法测得杜仲水提组分的小鼠灌胃半数致死量，因而进行最大耐受量的实验。取20只小鼠，雌雄各半，随机分成两组，即空白对照组和水提组分药物组。水提组分药物组以8 g/kg的量溶解于4 mL的蒸馏水中灌胃，24 h灌胃3次，空白对照组灌胃等体积的蒸馏水。观察小鼠给药后的反应，并与每日称量体重，记录下实验数据，连续观察7 d。(2)杜仲醇提组分半数致死量(LD50)的测定：预试验结果发现一定给药剂量下有小鼠死亡，因此杜仲醇提组分可测出小鼠的灌胃LD50，正式实验醇提组分设置5个剂量组，其剂量分别为100 g/kg、50 g/kg、25 g/kg、12.5 g/kg、6.5 g/kg，各组称取的杜仲皮浸膏用4 mL的蒸馏水制备成混悬液后给药，取小鼠60只，随机平分为6组，雌雄各半，实验前禁食12 h，不禁水。5个实验组，一个空白对照组，对照组灌胃等体积的蒸馏水，给药后正常饲养。给药后2 h内，每15 min观察1次；给药2～4 h，每30 min观察1次；4～8 h内，每1 h观察1次；8～24 h内，每4 h观察1次；给药后第2天起，每天观察1次。密切观察小鼠精神、禁食、毛色、饮水以及死亡等可能出现的一切情况。

2　结果

2.1杜仲水提组分急性实验结果

小鼠给药30 min后开始出现怠动，活动较少，精神萎靡，且随着时间的变化小鼠体重与空白组比较，呈增长趋势(图1)，无小鼠死亡。给药后的第2天小鼠活动恢复正常。结果表明杜仲水提部分毒性较小，小鼠灌胃的最大耐受量为24 g/kg(相当于生药量240 g/kg)。

2.2杜仲醇提组分急性毒性实验结果

杜仲醇提浸膏灌胃小鼠后30 min开始出现死亡，死亡均发生在8 h内，给剂量组的死亡率分别为：100%、70%、40%、10%、0%。灌胃后不同时间点的累计死亡数见表1，不同时间点的累计死亡率见图1。在灌胃后5 min就开始出现怠动、俯卧不动、闭眼等异常行为，给药后小鼠的急性中毒症状见表2，由表2可见个实验组在不同时间范围内均有不同程度的不适症状出现。各组存活小鼠体重变化见图2，不难发现小鼠体重随着给药剂量的增加成一定的正相关性。

LD50和95%可信区间的计算采用的是改良寇氏法[6-9]:

lgLD50=Xm-i(∑p-0.5)

= 2-0.155(1+0.7+0.4+0.1-0.5)

= 1.736

故LD50=54.51g/kg

=49.72-59.77g/kg

其中，i为组距，即相邻两组剂量对数剂量之差；Xm为最大给药剂量对数值；p为各剂量组死亡率，用小数表示；n为实验组数(不包括空白对照组)。

表1　杜仲醇提组分灌胃后小鼠不同时间点的累计死亡数

表2　杜仲醇提组分组小鼠急性毒性症状

组分倦怠发生率(%)发生时间抽搐发生率(%)发生时间俯卧不动发生率(%)发生时间100g/kg1001min～12h400.5～81005min～8h70g/kg901min～8h400.5～4805min～8h49g/kg801min～8h200.5～4805min～6h34.3g/kg801min～4h———705min～6h24g/kg601min～2h———705min～4h空白组—————————

3　讨论

杜仲皮具有补肝肾、强筋骨、调血压、防衰老、抗肿瘤等功效，特别是对高血压具有独特的疗效。近年来，对杜仲的药理作用研究尤为多，随着杜仲各种各种的药理活性问世，对杜仲保健品的开发也层出不穷。本文针对杜仲的急性毒性进行研究，结果发现杜仲水提组分的MTD为24 g/kg(相当于生药量240 g/kg)，根据中药毒性的现代分级，属于杜仲水提组分属于无毒[10]。醇提组分的LD50(95%的可信限)为54.51(49.72～59.77)g/kg属于小毒[11-13]。本文仅针对急性中毒剂量上进行了探讨，中毒机理尚不清楚，需进行进一步的研究。

在实验过程中发现不管是水提组还是醇提组，小鼠的体重与空白组比较均较重，且给药剂量越大小鼠体重增长越明显。可能原因在于给药后小鼠精神活动处于萎靡，怠动状态，导致小鼠活动减少从而体重增加。由实验结果可知杜仲醇提组分的毒性明显比水提组分大，在制备杜仲不同组分的浸膏时，尽量将溶剂挥发干净，因此溶剂对实验结果的影响较小。可能原因在于不同提取溶剂提取的成分差别。水提组分主要以多糖类、蛋白质类、氨基酸类等的物质为主[14-15]，而醇提组分则是以木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类物质为主[16-17]。相较于水提组分，醇提组存在一定的毒性。

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(学术编辑：周春阳)

The acute toxicity about eucommia ulmoides oliver from the area of Qinling-Daba Mountains

ZENG Ji-xiang,WANG Jian,ZHANG Xiao-lin,GONG Yuan-lin

(DazhouVocationalandTechnicalCollege,Dazhou635001,Sichuan,China)

Objective：Compare the acute toxicity of different components of Eucommia Ulmoides Oliver in Qinba Manountain Chain and to provide experimental data for safe use in clinal．Methods：Different components of Eucommia Ulmoides Oliver were administrated to mice．The MTD of water extract and the LD50of alcohol extract of Eucommia Ulmoides Oliver,Eucommia Ulmoides Oliver were tested by the classical methods of acute toxicity and the active state and weight change of mice were observed during the acute toxicity test.Results：The MTD of water extract of Eucommia Ulmoides Oliver was 24 g·kg-1．The LD50 ( 95% confidence interval) of alcohol extract of Eucommia Ulmoides Oliver were 54.51(49.72～59.77)g/kg in mice．Mental fatigue，lassitude and convulsion were the main acute tixical symptoms．Conclusion：Comparing the different components in Eucommia Ulmoides Oliver of acute toxicity,the water extract is safer,and the alcohol extract has certain toxicity.

】Qinba mamountain chain;Eucommia ulmoides;Acute toxicity

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.03.015

四川省教育厅科研项目(14ZA0331、14ZB0383)

2015-09-08

曾吉祥(1972-)，男，讲师。通讯作者：王健，E-mail: wj_yxx@163.com

时间：2016-6-1617∶46

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160616.1746.030.html

1005-3697(2016)03-0342-03

R285.5

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