离子色谱法测定磷酸替米考星中磷酸根含量

李伟岭，吴好庭，范小平，王武，许冠英，李定刚，岳永波

（1.河北天象生物药业有限公司，河北保定071100；2.中国兽医药品监察所，北京海淀100081；3.海南省兽药饲料监察所，海南海口570203；4.保定冀中药业有限公司河北省中兽药工程技术研究中心，河北保定071500）

离子色谱法测定磷酸替米考星中磷酸根含量

李伟岭1，吴好庭2，范小平3，王武1，许冠英4，李定刚4，岳永波1

（1.河北天象生物药业有限公司，河北保定071100；2.中国兽医药品监察所，北京海淀100081；3.海南省兽药饲料监察所，海南海口570203；4.保定冀中药业有限公司河北省中兽药工程技术研究中心，河北保定071500）

建立离子色谱法测定磷酸替米考星中的磷酸根含量，并考察替米考星与磷酸的成盐比率。方法：色谱柱为ASLL-HC阴离子交换柱（250 mm×4 mm），检测器为电导检测器，流动相为30 mmol/L氢氧化钠溶液，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，进样体积为25 μL。结果：磷酸根离子的检测限与定量限分别为0.002 μg/mL、0.006 μg/mL，在0.1～4.0 μg/ mL范围内线性关系良好（R2=0.9991），精密度良好（RSD=1.04%，n=8），平均回收率为99.11%（RSD=0.33%，n=9）。磷酸替米考星中替米考星与磷酸的成盐率约为1∶1。结论：所建立的离子色谱法专属性强、精密度好、准确度高，可用于磷酸替米考星的磷酸根含量与成盐率测定，5批磷酸替米考星样品的成盐状态良好。

离子色谱法；磷酸替米考星；磷酸根；成盐率

替米考星（tilmicosin）是一种半合成大环内酯类畜禽专用抗菌药，由英国Elanco公司于20世纪80年代研制开发，具有很强的抗菌活性，抗菌谱广，耐药性低，对猪支原体肺炎［1］、禽巴氏杆菌病［·2］和猪喘气病［3］有良好疗效，由于替米考星不溶于水，兽医临床常使用其磷酸盐。目前，关于磷酸替米考星药动学［4-5］与药效学［6-10］的报道较多，但是尚无有关其质量研究的报道，尤其是针对其磷酸含量及替米考星与磷酸成盐率的研究亦无报道，而磷酸含量及成盐比率直接影响磷酸替米考星的质量。本文建立了离子色谱法测定磷酸替米考星中磷酸根含量的方法，并计算其成盐率，可用于产品质量控制与评价。

1仪器与试药

戴安ICS-2000离子色谱仪（戴安中国有限公司），配有ED50电化学检测器；Millipore超纯水机（水的电阻率＞18.2 MΩ·cm）；BSA224S-CW型电子天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司］；微孔过滤器。

磷酸替米考星样品5批（河北天象生物药业有限公司，批号分别为LT20150127、LT20150129、LT20150131、LT20150202、LT20150204）；磷酸钠工作基准品（天津市化学试剂研究所）；氢氧化钠（分析纯，天津市德恩化学试剂有限公司）。

2方法与结果

2.1色谱条件以阴离子交换柱（ASLL-HC，4 mm×250 mm，3.0 μm）为色谱柱，流动相为30 mmol/L氢氧化钠水溶液，流速为1.0 mL/min；进样体积为25 μL，检测器为电导检测器。

2.2标准溶液的制备取磷酸钠基准品适量，置105℃干燥至恒重，精密称取34.38 mg，置1 000 mL容量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品贮备液（以PO34-计，浓度为20 μg/mL）。

分别精密量取标准品贮备液0.5、1.0、2.0、5.0、10、20 mL，置100 mL容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，制成系列对照品标准溶液（以PO34-计，浓度分别为0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0 μg/ml）。

2.3供试品溶液的制备精密称取磷酸替米考星供试品18.69 mg，置1 000 mL容量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5.0 mL至50 mL容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4计算公式

2.4.1磷酸根含量计算公式

其中：C供为磷酸替米考星供试品的磷酸根含量，单位为%；C标为对照品标准溶液的磷酸根浓度，单位为μg/mL；W供为磷酸替米考星供试品的浓度，单位为μg/mL；A供为磷酸替米考星供试品的离子色谱峰面积，单位为μs/min·cm；A标为对照品标准溶液的离子色谱峰面积，单位为μs/min·cm。

2.4.2磷酸替米考星样品中替米考星与磷酸的成盐率计算公式成盐率=（磷酸根含量/94.97）/（替米考星含量/869.13）其中：94.97为磷酸根的摩尔质量；869.13为替米考星的摩尔质量。

2.6检测限与定量限的测定逐步稀释标准溶液，以离子峰的信噪比约为3∶1时为检测限，测得磷酸根离子的检测限为0.002 μg/mL，见图4；以离子峰的信噪比约为10∶1时为定量限，测得磷酸根离子的定量限为0.006 μg/mL，见图5。

图1空白溶液的离子色谱图

图2磷酸钠标准溶液的离子色谱图

图3磷酸替米考星供试品溶液的离子色谱图

图4磷酸根含量检测限的测定色谱图

2.7线性范围考察取“2.2”项下系列标准溶液，分别进样25 μL，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，磷酸根离子浓度（C）为横坐标，进行线性回归，回归方程为A=10.357C-1.5052（R2= 0.9991），结果表明，磷酸根离子在0.1～4.0 μg/mL浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.8精密度试验取“2.2”项下浓度为0.2 μg/mL的标准溶液，连续进样8次，记录磷酸根离子的峰面积，计算峰面积的RSD值为1.04%（n=8），表明该方法精密度良好。

图5磷酸根含量定量限的测定色谱图

表1磷酸根含量测定的精密度测定结果

2.9加标回收率试验取磷酸替米考星样品（批号为LT20150127）约18.5 mg，精密称定9份，分别置1 000 mL容量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5.0 mL至50 mL容量瓶中，精密加入浓度为20 μg/mL的磷酸根标准品贮备液0.4、2.3、4.6 mL，用超纯水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。每个浓度平行配制3份，依法测定，计算回收率，试验结果表明，平均回收率为99.50%，RSD为0.93%（n=9）。

2.10磷酸替米考星的磷酸根含量测定取“2.2”项下浓度为0.2 μg/mL的对照品标准溶液与“2.3”项下的供试品溶液，依法测定，分别记录磷酸根离子的峰面积，按“2.4”项下的计算公式计算磷酸替米考星样品的磷酸根含量和成盐率。试验结果表明，磷酸替米考星样品中磷酸根含量约为10.06%，替米考星与磷酸的成盐率约为1∶1。

表2磷酸根含量测定加标回收率试验结果

3结论

该方法简单，准确度高，具有较高的灵敏度，适合磷酸替米考星样品的磷酸根含量与成盐率测定，可有效控制与评价其产品质量。根据磷酸替米考星的分子式，替米考星与磷酸的摩尔比数应为1∶1，5批样品的测定结果表明，产品成盐状态良好，成盐工艺适宜。

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R 917

B

0529-6005（2016）08-0110-02

2015-06-11

李伟岭（1981-），男，工程师，硕士，从事药物合成与质量研究，E-mail：13138010@qq.com

岳永波，E-mail：zygclwl@163.com