子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1与MVD的表达及其相关关系的研究*

周龙书黄婵史文静

子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1与MVD的表达及其相关关系的研究*

周龙书①黄婵①史文静①

目的：探讨血管生成抑制蛋白-1（Vasohibin-1）、微血管密度（micro vessel density，MVD）在子宫内膜腺癌组织中的表达及两者之间的相关关系。方法：应用SP法检测Vasohibin-1在23例正常子宫内膜组织、28例子宫内膜非典型增生组织及69例子宫内膜腺癌组织中的表达情况；并应用CD34抗体标记上述组织中血管内皮细胞，测定MVD值，分析两者在子宫内膜腺癌的相关关系。结果：Vasohibin-1在子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率显著高于子宫内膜不典型增生组织与正常增殖期子宫内膜组织（P＜0.05）。子宫内膜腺癌组织中MVD测定值显著高于子宫内膜不典型增生与正常增殖期子宫内膜（P＜0.01）。Vaoshibin-1在子宫内膜腺癌组织中的表达与手术病理分期、肌层浸润、淋巴结转移、年龄差异均无统计学意义（P＞0.05）。在子宫内膜腺癌组织中，Vasohibin-1的表达与MVD值呈正相关（r=0.337，P＜0.05）。结论：在子宫内膜腺癌中存在Vasohibin-1、MVD的高表达，且两者在子宫内膜腺癌的发生、发展中可能起协同作用。

子宫内膜腺癌； 血管生成抑制蛋白-1； 微血管密度

First-author's address：The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510260，China

子宫内膜腺癌今年的发病率呈上升趋势，但其发病机制目前尚不十分明确。血管生成抑制因子（Vasohibin）由Watanabe等［1］和Soslow等［2］首次发现，是迄今为止发现的唯一一个血管生成负反馈抑制因子，成为肿瘤血管生成机制研究的新热点。本研究通过检测增殖期子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1和MVD的表达情况，探讨两者的相关关系和在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究收集2009年1月-2013年12月广州医科大学附属第二医院经手术切除并经病理证实的子宫内膜腺癌石蜡包埋标本69例为研究对象，年龄37～65岁，中位年龄51岁，术前均未经任何放、化疗和激素治疗等。按2009年国际妇产科联盟（FIGO）的分期标准，Ⅰ期33例，Ⅱ期24例，Ⅲ期10例，Ⅳ期2例；按有无淋巴结转移的情况分为：有淋巴结转移15例，无淋巴结转移54例；按肿瘤细胞分化级别分为G1、G2、G3级，每级分别为23、29、17例；按肿瘤浸润情况分为：无肌层浸润10例，浸润浅肌层（＜1/2为37例，深肌层或浆膜浸润（≥1/2）22例。随机抽取同期存档的子宫内膜非典型增生组织蜡块28例及因子宫肌瘤、宫颈原位癌切除子宫的增殖期子宫内膜组织蜡块23例作为对照。年龄32～58岁，中位年龄45岁。以上标本切片均由广州医科大学附属第二医院病理科提供，并由两位高年资病理医师确诊。

1.2 试剂 主要试剂：Vasohibin-1兔抗人多克隆IgG抗体，产品编号：bs-1505R（北京博奥森生物技术有限公司），CD34兔抗人多克隆IgG抗体，产品编号：BA0912（北京博奥森生物技术有限公司），即用型免疫组化UltrasensitiveTMS-P超敏试剂盒（北京中杉会桥生物技术有限公司），3，3-二氨基联苯胺（3，3-diaminobenzidine，DAB）浓缩型试剂盒：ZLI-9032（北京中杉会桥生物技术有限公司）。

1.3 结果判断标准

1.3.1 免疫组化结果判断标准 Vasohibin-1阳性表达为细胞浆和/或细胞核出现棕黄色颗粒。子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1、VEGF阳性结果均主要表达于细胞胞质。在双盲条件下，由两名病理科医师对切片进行观察，每张切片均随机选5个高倍视野（×400倍），200个细胞/视野，共计1000个细胞，取其平均数。根据目前广泛应用的免疫组化计分标准，具体如下：（1）染色强度（staining intensity，SI）：无色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分（染色深浅需与背景着色相对比）。（2）阳性细胞数（positive percentage，PP）：阴性0分，阳性细胞≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～80%为3分，＞80%为4分［3-4］。半定量积分=染色强度评分×阳性细胞数评分。

1.3.2 阴阳性划分 采用半定量积分对各子宫内膜组织进行阴阳性划分［5-6］。半定量积分0～1分为阴性（-），2～3分为免疫反应结果弱阳性（+），4～6分为中等阳性（++），＞6分为强阳性（+++）。-～+为表达缺失、低表达；++～+++为过表达；+～+++均为阳性。结果由两名高年资病理科医师统一核准。

1.3.3 MVD判定标准 由CD34标记内皮细胞后，其定位于细胞膜和细胞浆。MVD计数参照Maeda等［7-8］，采用双盲法，由两名病理科医师分别进行，再取平均值。先在低倍镜（×100）下全面观察整体切片，找出肿瘤内血管最密集处，再在高倍镜（×200）下计数5个视野，取其平均值，但管腔大于8个红细胞直径的血管不计数。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件包进行卡方检验和Spearman等级相关分析，多组均数的比较采用Kruskal Wallis检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Vasohibin-1在不同子宫内膜组织中的表达情况比较 Vasohibin-1在正常增殖期与非典型增生的阳性表达率均明显低于内膜样腺癌（P＜0.05）。正常增殖期与非典型增生阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 不同子宫内膜组织中Vasohibin-1的表达情况

2.2 在不同子宫内膜组织中的MVD计数情况比较 在正常增殖期子宫内膜组织与非典型增生子宫内膜组织中的阳性表达率均明显低于子宫内膜腺癌（P＜0.001）。正常增殖期子宫内膜与非典型增生子宫内膜的阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 不同子宫内膜组织中MVD计数情况（±s）

表2 不同子宫内膜组织中MVD计数情况（±s）

*与正常增殖期子宫内膜和子宫内膜不典型增生比较，P＜0.05；#与子宫内膜不典型增生和正常增殖期子宫内膜比较，P＜0.001

组织类型MVD（个/HP）P值正常增殖期（n=23）10.32±5.48不典型增生（n=28）17.44±3.59＜0.05*子宫内膜腺癌（n=69）33.63±10.51＜0.001#

2.3 不同子宫内膜组织中Vasohibin-1的表达与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系 Vasohibin-1与子宫内膜癌患者年龄、手术病理分期、肌层浸润及有无淋巴结转移均无关（P＞0.05），见表3。

2.4 子宫内膜腺癌中Vasohibin-1表达与MVD的相关关系 子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1表达阳性者37例，MVD计数为（32.89±1.06）个/HP；阴性者32例，MVD计数为（28.83±0.89）个/HP，提示子宫内膜癌中Vasohibin-1与MVD的表达呈正相关（r=0.337，P＜0.05）。

表3 Vasohibin-1与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系

3 讨论

3.1 血管生成抑制蛋白-1在子宫内膜癌中的表达及意义 人血管生成抑制蛋白-1（Vasohibin-1）基因位于染色体14q24.3上，其蛋白产物有365个氨基酸残基，是一个非传统型分泌蛋白［9-10］。有研究表明，Vasohibin-1在体外能有效抑制血管内皮细胞的移行、增殖及网络形成，体内能有效抑制肿瘤的新生血管形成，从而抑制肿瘤的生长［11-12］。李姝君等［13］报道Vasohibin-1的检出率从增生期到分泌期内膜、从高分化至低分化子宫内膜癌组织逐渐增高。而文献［14-15］采用免疫组织化学法检测Vasohibin-1在子宫内膜腺癌中的表达明显低于正常子宫内膜中的表达。

本研究结果表明：Vasohibin-1在正常增殖期子宫内膜、子宫内膜不典型增生及子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率分别为26.1%、32.1%、53.6%，其中子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1的表达率明显高于子宫内膜不典型增生及正常增殖期子宫内膜，此结果与Yoshinaga等［6］研究结果相似。考虑在子宫内膜腺癌中，虽然Vasohibin-1的阳性表达率随着肿瘤的恶性程度升高而逐渐增加，但是Vasohibin-1的表达上调并不足以抑制子宫内膜腺癌的血管生成，其原因的深入探究尚需后续研究加以阐明。

3.2 微血管密度与子宫内膜癌的关系 微血管密度（MVD）是一种反映肿瘤血管形成的指标，随着肿瘤MVD的增加，肿瘤侵袭转移等恶性潜能也明显增加。因此，MVD被认为是预测肿瘤转移复发和预后的一项重要指标标［16-17］。文献［18-19］的研究显示在子宫内膜癌组织中的MVD计数明显高于子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜对照组。本研究采用CD34单克隆抗体对子宫内膜腺癌、子宫内膜不典型增生及增殖期子宫内膜各组织血管内皮细胞进行特殊染色，然后测量各组织的MVD值分别为（33.63±10.51）、（17.44±3.59）、（10.32±5.48）个/HP。子宫内膜腺癌组织的MVD值与后两者比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），说明MVD的表达与子宫内膜腺癌的发生、发展有关。

3.3 Vasohibin-1、MVD在子宫内膜腺癌中表达的相关关系 众所周知，子宫内膜癌的复发与转移是影响患者生存期的最主要因素，而高密度血管形成在肿瘤复发和转移的开始及结束阶段都是必须的。Vasohibin-1作为血管生成抑制因子， 在体内能有效抑制肿瘤的新生血管形成，从而抑制肿瘤的生长，MVD是衡量肿瘤血管生成常用的客观定量指标。在本研究中，子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1的阳性表达率增高，MVD的表达也增强，且两者间具有正相关关系（P＜0.01）。由此考虑，一方面随着肿瘤的进展，机体需要反馈性地增加Vasohibin-1的表达来抑制新生血管生成，从而出现子宫内膜腺癌组织中Vasohibin-1的高表达，但可能在某阶段存在Vasohibin-1的表达上调并不足以抑制血管生成的情况；另一方面，正常子宫内膜组织中，促血管生成因子和抑制血管生成因子之间存在着平衡，而子宫内膜腺癌中上述两者间出现了失衡状态，从而导致子宫内膜癌中血管异常增生［20］。

综上所述，Vasohibin-1作为一种新发现的内源性血管生成负反馈调剂因子，在子宫内膜腺癌中存在高表达，并可能与高表达的MVD在子宫内膜腺癌的发生、发展中起协同作用。虽然上述机制有待进一步阐明，但随着研究的不断深入，Vasohibin-1有望在抗肿瘤血管生成及妇科肿瘤治疗中发挥重要的作用。

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R esearch of E xpression and Its Correlation of V asohibin-1 and MV D in E ndometrial Adenocarcinoma Tissue

ZHOU L ong-shu，HUANG Chan，SHI Wen-jing.//Medical Innovation of China，2016，13（27）：006-009

Objective：To probe the expression of endometrial adenocarcinoma and the relationship between them in angiogenesis inhibitor protein-1（Vasohibin-1） and microvessel density（vessel density micro，MVD）.Method：The expression situation of Vasohibin-1 in 23 cases of normal endometrium，28 cases of atypical endometrial hyperplasia and 69 cases of endometrial adenocarcinoma were detected by SP method.CD34 antibody was used to label the vascular endothelial cells in the tissue，and MVD value was determined.Then，the correlation between endometrial adenocarcinoma between two objects were analyzed.Result：The positive expression rate of Vasohibin-1 in endometrial adenocarcinoma was significantly higher than that in endometrial atypical hyperplasia tissue and normal proliferative phase of endometrial tissue（P＜0.05）.The value of MVD in endometrial adenocarcinoma was significantly higher than that in the endometrial atypical hyperplasia and normal proliferative phase endometrium（P＜0.01）.There was no statistical significance in the expression of Vaoshibin-1 in endometrial adenocarcinoma and the surgical pathologic stage，muscle invasion，lymph node metastasis，age（P＞0.05）.There was positively correlated in the expression of Vasohibin-1 and the MVD values in the endometrial adenocarcinoma tissue（r=0.337，P＜0.05）.Conclusion：There is high expression of MVD and Vasohibin-1 in endometrial adenocarcinoma，and they may be played a synergistic role in the occurrence and development of endometrial adenocarcinoma.

Endometrial adenocarcinoma； Angiogenesis inhibitor protein-1； Microvessel density

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.27.002

广东省科技计划项目（2012B031800436）

①广州医科大学附属第二医院 广东 广州 510260

史文静

（2016-06-27） （本文编辑：程旭然）