探讨产妇子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路及CX43表达与产后出血的相关性

魏海云　黄素然　蔡鹏宇

【摘要】 目的 探讨产妇子宫平滑肌组织中丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号转导通路及连接蛋白43（CX43）表达与产后出血的相关性。方法 30例行剖宫产产后宫缩乏力出血的产妇作为实验组， 30例行剖宫产无产后出血的产妇作为对照组。利用等长张力测定的方式对产妇离体子宫下段平滑肌收缩功能以及缩宫素诱导的收缩潜能进行检测；利用荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术对产妇子宫下段平滑肌组织中的CX43 mRNA表达进行检测；利用蛋白免疫印迹技术对产妇子宫下段平滑肌组织中MAPK信号转导通路中细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、p38磷酸化蛋白、c-Jun氨基端激酶1/2（JNK1/2）以及CX43蛋白水平进行检测。结果 实验组产妇离体子宫平滑肌自发性收缩活动力以及收缩频率均低于对照组（P<0.05）；实验组收缩幅度低于对照组， 但差异无统计学意义（P>0.05）；在使用缩宫剂之后， 实验组产妇离体子宫平滑肌的收缩活动力、收缩幅度、收缩频率以及收缩潜能均低于对照组（P<0.05）。实验组CX43 mRNA（0.72±0.33）、p-ERK1/2（2.18±0.41）、p-p38（0.77±0.19）、p-JNK1/2（0.81±0.20）、CX43蛋白（0.08±0.02）均低于对照组（1.02±0.73）、（13.10±4.51）、（0.93±0.23）、（1.10±0.50）、（0.12±0.05）（P<0.05）。结论 子宫乏力性产后出血产妇离体子宫平滑肌收缩功能以及收缩潜能显著衰退， 子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路水平及CX43表达水平显著下降， 并且两者之间关系密切， 宫缩乏力性产后出血很大程度上是由于提示MAPK信号通路活化受阻以及CX43表达下降造成的， MAPK信号转导通路及CX43表达相互调节以及共同作用之下产妇产后出血形成以及发展。

【关键词】 子宫平滑肌组织；丝裂原激活蛋白激酶信号；连接蛋白43；产后出血；相关性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.26.070

产后出血是导致产妇死亡的重要原因， 我国孕产妇死亡最主要的原因便是产后出血造成的；若不能及时进行治疗， 严重时甚至会导致不孕以及垂体功能衰弱。根据目前研究结果表明， 在子宫平滑肌收缩中， 子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路的级联磷酸化有着重要作用[1]。近年来研究表明妊娠子宫平滑肌组织中CX43表达多样并且与产程调整以及分娩发动关系密切， CX43蛋白有可能是激活MAPK之后的靶物质， 在功能机制中它们之间可能相互辅助[2]。本次研究探讨产妇子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路及CX43表达与产后出血的相关性。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 本次研究以2015年1月～2016年1月在东莞常安医院妇产科因胎位异常、胎儿窘迫、羊水过少、头盆不称、社会因素采取剖宫产术的未临产、无胎膜早破的30例宫缩乏力性产后出血产妇作为实验组， 并且选择同期进行剖宫产无产后出血的产妇30例作为对照组。产后出血诊断标准：自胎儿娩出后24 h内总失血量达1000 ml即诊断为产后出血。实验组平均年龄（28.73±2.94）岁， 平均孕周（39.31±1.47）周， 平均产次（0.80±0.54）次， 产前平均体质量指数（27.92±3.80）kg/m2， 新生儿平均体重（3373.00±513.89）g；对照组平均年龄（27.76±3.24）岁， 平均孕周（39.71±0.97）周， 平均产次（0.69±0.64）次， 产前平均体质量指数（25.62±3.05）kg/m2， 新生儿平均体重（3352.10±441.03）g。两组研究对象均无高血压、糖尿病、心脏病以及肾病等， 且无急慢性感染性疾病， 饮食和生活习惯无特殊， 无抽烟、饮酒。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法

1. 2. 1 采集样本 两组产妇均在胎儿娩出后， 预防性采用缩宫剂之前， 避开夹钳位置， 横行切取子宫下段切口处上方平滑肌组织约 15 mm×5 mm×5 mm ， 放已备好的 0℃ K-H液中， 将血迹洗尽， 并放入 0℃ K-H 液中保存并迅速带回实验室。在<4 h测定子宫平滑肌肌条张力。再取1.0～2.0 g平滑肌组织， 利用0.9%氯化钠液进行清洗再利用2.0 ml冻存管进行保存， 迅速将液氮放入进行速冻， 接着将其保存于-70℃的冰箱中， 以此来检测蛋白、提取总RNA以及检测基因。

1. 2. 2 测定子宫平滑肌肌条张力 利用电极刺激肌条使其有活性， 再与10 g肌肉张力换能器进行连接， 采取等长张力测定方法， 利用RM6240生物信号收集系统将其规律收缩后的波形极进行记录， 持续20 min， 接着利用5×10-7 mol/L缩宫剂诱导肌条进行收缩， 并做好记录， 对其收缩活动力、收缩幅度以及收缩频率进行计算。

1. 2. 3 测定子宫平滑肌组织中CX43 mRNA 利用TRIzol将子宫平滑肌组织中总RNA提取出来， 利用分光光度计来对它在260 nm以及280 nm位置的吸光度进行测定， 并对总RNA的纯度以及浓度进行计算， 此外， 利用1%琼脂糖凝胶电泳来对RNA的完整度进行检测。取2 ?g总RNA逆转录为cDNA， 利用实时荧光定量PCR仪来对其进行检测。利用Primer5.0软件对CX43以及β-action基因引物与探针进行设计。

1. 2. 4 测定子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白 采用免疫印迹法， 具体步骤是：利用RIPA[2]将100 mg冰冻组织中总蛋白提取取来， 匀浆， 4℃， 离心5 min 12000 g， 将清液取出并利用离心管分别装入， 再用BCA试剂盒来对蛋白进行定量， SDS-PAGE电泳、转膜， 免疫反应， 化学发光， 显影， 定影以及摄片。将IOD值利用凝胶定量分析软件读取出来， 目的蛋白表达相对量用蛋白IOD值/内参的IOD值表示， 用p-ERK1与p-ERK2、p-JNK1与p-JNK2的表达的相对量之和表示p-ERK1/2、p-JNK1/2的表达相对量。

1. 3 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组产妇离体子宫下段平滑肌收缩功能以及缩宫素诱导的收缩潜能情况 实验组自发性收缩活动力（58.28±29.29）g·次/h， 收缩幅度（4.51±1.80）g， 收缩频率（12.00±5.95）次/h；

在缩宫剂诱导之后， 收缩活动力（161.68±35.02）g·次/h， 收缩幅度（5.91±1.40）g， 收缩频率（31.20±12.35）次/h， 收缩潜能177.37%。对照组自发性收缩活动力（95.71±43.29）g·次/h，

收缩幅度（5.61±2.58）g， 收缩频率（19.42±13.00）次/h；在缩宫剂诱导之后， 收缩活动力（398.00±92.12）g·次/h， 收缩幅度

（8.18±2.18）g， 收缩频率（50.45±15.05）次/h， 收缩潜能270.47%。实验组产妇离体子宫平滑肌自发性收缩活动力以及收缩频率均低于对照组（P<0.05）；实验组收缩幅度低于对照组， 但差异无统计学意义（P>0.05）；在使用缩宫剂之后， 实验组产妇离体子宫平滑肌的收缩活动力、收缩幅度、收缩频率以及收缩潜能均低于对照组（P<0.05）。

2. 2 两组产妇子宫下段平滑肌组织中CX43 mRNA表达、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白情况 实验组CX43 mRNA（0.72±0.33）， p-ERK1/2（2.18±0.41）， p-p38（0.77± 0.19）， p-JNK1/2（0.81±0.20）， CX43蛋白（0.08±0.02）；对照组CX43 mRNA（1.02±0.73）， p-ERK1/2（13.10±4.51）， p-p38（0.93± 0.23）， p-JNK1/2（1.10±0.50）， CX43蛋白（0.12±0.05）。实验组产妇子宫平滑肌组织中CX43 mRNA表达、p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2以及CX43蛋白均低于对照组（P<0.05）。

3 讨论

本次研究显示， 实验组产妇离体子宫平滑肌自发性收缩活动力、收缩幅度以及收缩频率均低于对照组。在使用缩宫剂之后， 两组产妇离体子宫平滑肌的收缩活动力、收缩幅度、收缩频率以及收缩潜能均显著上升， 但是实验组各项均低于对照组（P<0.05）。据相关研究表明， 适量的缩宫剂能够增加子宫平滑肌收缩活动力等[1]。本次研究表明两组产妇子宫平滑肌中的CX43 mRNA和CX43蛋白表达水平与p-ERK1/2、p-p38、p-JNK1/2表达量呈正比。

综上所述， 子宫乏力性产后出血产妇离体子宫平滑肌收缩功能以及收缩潜能显著衰退， 子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路水平及CX43表达水平显著下降， 并且两者之间关系密切， 宫缩乏力性产后出血很大程度上是由于提示MAPK信号通路活化受阻以及CX43表达下降造成的MAPK信号转导通路及CX43表达相互调节以及共同作用之下产妇产后出血形成以及发展。

参考文献

[1] 黄科华.产妇子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路及CX43表达与产后出血关系的研究. 福建医科大学， 2011.

[2] 颜建英， 黄科华， 刘青闽， 等.产妇子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路及CX43表达与产后出血关系的研究//第72届国际妇产科联盟常务理事会暨妇产科医师论坛论文集， 2012： 274-283.

[收稿日期：2016-07-08]