特应性皮炎患者尘螨特应性斑贴试验结果分析

付玉萍 李东宁 王兰 孙健 闫铁夫 王莉丽 杜红阳

121001辽宁锦州，辽宁医学院附属第一医院皮肤科（付玉萍、李东宁、孙健、闫铁夫、王莉丽、杜红阳）；湖北省孝感市中心医院皮肤科（王兰）

特应性皮炎患者尘螨特应性斑贴试验结果分析

付玉萍 李东宁 王兰 孙健 闫铁夫 王莉丽 杜红阳

121001辽宁锦州，辽宁医学院附属第一医院皮肤科（付玉萍、李东宁、孙健、闫铁夫、王莉丽、杜红阳）；湖北省孝感市中心医院皮肤科（王兰）

目的 分析尘螨变应原不同蛋白浓度的特应性斑贴试验结果，并对诊断价值进行评价。方法 85例特应性皮炎患者，以两个厂家提供的变应原原液进行尘螨变应原的特应性斑贴试验（APT），同时以尘螨变应原的皮肤点刺试验（SPT）及血清特异性IgE测定（SIgE）作为对照，比较APT、SPT、SIgE测定的灵敏度、特异度及阳性预测值，并比较 5组不同浓度变应原（3 000、5 000、7 000、10 000、12 000 pnu/g）APT结果，及两个厂家提供的变应原原液间的差异。结果 以SIgE为金标准。1组：APT、SPT检测尘螨的灵敏度分别为79.41%、73.53%；特异度分别为76.12%、80.95%；阳性预测值分别为64.29%、67.57%。2组：APT、SPT检测尘螨的灵敏度分别为81.53%、76.02%；特异度分别为77.78%、79.85%；阳性预测值分别为65.09%、66.07%。以SPT为金标准。1组：APT、SIgE检测尘螨的灵敏度分别为78.38%、67.57%；特异度分别为77.42%、84.21%；阳性预测值分别为67.44%、73.53%。2组：APT、SIgE检测尘螨的灵敏度分别为79.25%、61.07%；特异度分别为80.63%、82.54%；阳性预测值分别为69.55%、77.21%。两组试剂间差异无统计学意义。另外，5种不同浓度的阳性率分别为1组：8.24%、22.35%、29.41%、44.71%、41.18%；2组：3.53%、23.53%、31.76%、34.12%、35.29%，两组试剂间差异无统计学意义（P＞0.05）。而两组试剂的各组间APT阳性率差异有统计学意义（P＜0.05），即尘螨变应原浓度的增加会提高APT阳性率，但当浓度达到一定值后阳性率升高不明显。结论 APT诊断尘螨变应原的灵敏度较高，增加变应原蛋白浓度可提高APT阳性率，但达到适宜浓度后阳性率不再升高。

皮炎，特应性；斑片试验；抗原，尘螨属；过敏反应；点刺

尘螨变应原已被证实是特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）患者皮炎发作或加重的诱发因素之一，及时准确地发现致敏原并避免接触可有效预防病情反复发作。目前临床上诊断尘螨过敏原的常用方法包括皮肤点刺试验（skin prick test，SPT）和外周血清特异性IgE测定（SIgE）［1］。这两种方法已应用于临床多年，主要针对速发型超敏反应，而对参与AD迟发型超敏反应的尘螨过敏原很难识别。特应性斑贴试验（atopic patch test，APT）是一种新的处于临床研究阶段的过敏原检测方法。本研究参考欧洲过敏与临床免疫学会（EAACI）2006年推荐的方法［2］，选择与AD发病相关的常见吸入性变应原尘螨进行特应性斑贴试验，分析变应原不同蛋白浓度对APT的影响，并对其诊断价值进行评价。

一、资料与方法

1.一般资料：2013年4月至2014年4月，辽宁医学院附属第一医院皮肤科门诊85例AD患者，均符合Hanifin-Rajka诊断标准［3］，入选前2周内未系统用糖皮质激素或免疫抑制剂治疗，3 d内未口服抗组胺药物，无泛发性皮疹，无系统性疾病。男59例，女26例，年龄（16.3±4）岁（2～38）岁，其中2～12岁48例，13～22岁23例，＞22岁14例。所有患者依次行SPT、SIgE、APT检测。

2.SPT：消毒受试者前臂屈侧面无皮疹皮肤，将尘螨过敏原点刺液（北京协和医院变态反应原制剂室提供）一滴至皮肤上，用点刺针垂直穿过点刺液，以刺破表皮而不出血为宜。15 min后测量并记录皮疹平均直径（MFD），MFD=（D+d）/2，D为风团或红晕的最大直径，d为通过D中点的垂直直径，当MFD ≥ 3 mm 时判为阳性［4］。

3.SIgE：采用酶联免疫吸附法（ELISA）快速试纸条技术检测血清中过敏原SIgE抗体（检测试剂盒由苏州浩欧博生物医药有限公司生产），SIgE＞0.35 IU/ml判为阳性。

4.APT：尘螨变应原浸出液原液分别由浙江我武生物科技股份有限公司（APT1组）及安徽润敏江生物科技有限公司（APT2组）提供，经我院中心实验室采用柱层析法提纯，以白凡士林及白矿物油（赋形剂）为基质，并依据文献［5］将2种原液分别配成5组尘螨变应原蛋白浓度，即 3 000、5 000、7 000、10 000、12 000 pnu/g。操作步骤：在斑试器胶带背面标好变应原浓度，将变应原膏体按顺序置于滤纸片上（50 μg），将加有变应原的斑试器胶带贴于受试者背部脊柱两侧（无皮损处），并对斑试器小室逐个适当加压，以排出气体，确保其内的变应原与皮肤充分接触。敷贴48 h后，可取下斑试器30 min后判读结果，敷贴时间达到72 h后再次判读结果，必要时1周后再次观察结果。本次试验以敷贴72 h后判读结果为标准，应用欧洲特应性皮炎工作组（ETFAD）1998 年推荐的 APT 反应分级标准［6］，≥ +即判为阳性。

5.统计学处理：采用SPSS17.0软件进行χ2检验，P＜0.05差异有统计学意义。分别以SIgE、SPT作为变应原检测的金标准，计算各检测方法的灵敏度、特异度及阳性预测值，其中灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%，特异度=真阴性/（真阴性+假阳性）×100%，阳性预测值=真阳性/（真阳性+假阳性）×100%。

二、结果

1.APT、SPT 及 SIgE 检测结果：APT1组、APT2组、SPT组、SIgE组的阳性例数分别为43、48、37、34；阳性率分别为50.59%、56.47%、43.53%、40.00%。各组间阳性率比较χ2=3.40，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.APT、SPT及SIgE诊断的灵敏度、特异度及阳性预测值比较：以SIgE为金标准，APT1组、SPT检测尘螨的灵敏度分别为79.41%、73.53%，特异度分别为76.12%、80.95%，阳性预测值分别为64.29%、67.57%。APT2组、SPT检测尘螨的灵敏度分别为81.53%、76.02%，特异度分别为77.78%、79.85%，阳性预测值分别为65.09%、66.07%。以SPT为金标准：APT1组、SIgE检测尘螨的灵敏度分别为78.38%、67.57%，特异度分别为77.42%、84.21%，阳性预测值分别为67.44%、73.53%。APT2组、SIgE检测尘螨的灵敏度分别为79.25%、61.07%，特异度分别为80.63%、82.54%，阳性预测值分别为69.55%、77.21%。

3.尘螨过敏原浓度对APT检测结果的影响：两组试剂各浓度组间的APT阳性率差异均无统计学意义（P＞0.05）。而每组试剂的各组内的阳性率差异有统计学意义（P＜0.05），即尘螨变应原浓度不同APT阳性率也不同。见表1。

分别对两种试剂的各蛋白浓度组间进行两两比较：APT1组中，除5 000 pnu/g组与7 000 pnu/g组间差异有统计学意义，χ2=10.72，P＜0.01外，其余相邻浓度组间阳性率差异无统计学意义，均P＞0.05，说明该试剂的尘螨过敏原浓度到达7 000 pnu/g后再增加蛋白浓度APT阳性率无明显升高。而在APT2组中，除3 000 pnu/g组与5 000 pnu/g组间阳性率比较差异有统计学意义（χ2=14.53，P＜ 0.01），其余相邻浓度组间阳性率差异无统计学意义（均P＞0.05）。说明尘螨变应原浓度达到5 000 pnu/g后再增加蛋白浓度APT阳性率升高不明显。

表1 变应原5组不同蛋白质浓度特应性斑贴试验检测结果

三、讨论

AD的皮损表现为湿疹样变，病因比较复杂，除了遗传因素外，一般认为变应原是主要的致病因素，患者可因食入、吸入或接触各种变应原而诱发皮肤的过敏反应。有研究者用屋尘螨、花粉、真菌及食物等的变应原进行斑贴试验［7-8］，有一定比例的阳性率，同时这些变应原的吸入、接触或食入可使AD的皮疹加重，因此考虑AD的发病机制可能与针对这些变应原的免疫反应有关。研究表明，IgE介导的变态反应是AD的重要发病机制，而其与AD发病的关系可通过APT来评估，有助于研究AD的发病原因［9-10］。

本研究选择85例AD患者进行APT，对其诊断价值进行评价，结果显示，APT与SIgE、SPT相比诊断试验的灵敏度较高，特异度和阳性预测值偏低。这可能与AD的发病机制、多种变态反应及不同检测方法的理论基础不同有关，其中SIgE检测和SPT主要针对IgE介导的速发型过敏反应，而APT则是基于迟发型过敏反应，虽然也有树突细胞表面固定的特异性IgE抗体参与，但可能存在其他非IgE介导的机制［11］。本研究与其他研究［5］的差异可能与APT操作尚未标准化，不同研究的受试者选择标准不完全一致，试剂来源厂家也不同，其配制标准及金标准的制定不同，而且研究者的结果判读存在主观差异等原因有关。本研究结果显示APT的阳性率较高，且SPT和SIgE结果均阴性时，APT反应阳性，体现出其在特应性皮炎吸入变应原方面具有较高的诊断价值，提示对AD患者仅进行经典的SIgE检测及SPT可能会漏掉重要的变应原信息。研究表明，与经典的变应原检测方法相比，APT的临床相关性更好［6］。

由于APT是一种新的处于临床研究阶段的过敏原检测方法，目前尚无统一的标准化流程，因此本实验的另一目的是分析尘螨变应原不同蛋白浓度对APT结果的影响，并探讨论进行APT的适宜蛋白浓度。Ingordo等［12］用两种不同的屋尘螨浸出液进行APT研究，结果显示，提高变应原浓度可提高APT阳性率。本研究用两种厂家的试剂进行试验，显示，APT1组从3 000 pnu/g至7 000 pnu/g浓度组，随变应原蛋白浓度的增加，APT阳性率也增加，但7 000 pnu/g浓度组较10 000、12 000 pnu/g浓度组阳性率升高不明显。APT2组从3 000至5 000 pnu/g，随变应原蛋白浓度的增加，APT阳性率也增加，但5 000 pnu/g浓度组较7 000、10 000、12 000 pnu/g浓度组阳性率升高不明显。考虑7 000、5 000 pnu/g变应原浓度分别为APT两种试剂的适宜浓度，再增加变应原蛋白浓度也不会明显提高阳性率。我们可以得出结论：将APT与SPT、SIgE相结合可进一步提高临床检测变应原的准确性，实验时变应原蛋白浓度约5 000～7 000 pnu/g较适宜。

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Evaluation of atopy patch test with dust mite allergens for patients with atopic dermatitis

Fu Yuping,Li Dongning,Wang Lan,Sun Jian,Yan Tiefu,Wang Lili,Du Hongyang
Department of Dermatology,First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University,Jinzhou 121001,Liaoning,China（Fu YP,Li DN,Sun J,Yan TF,Wang LL,Du HY）;Department of Dermatology,The Central Hospital of Xiaogan,Xiaogan 432000,Hubei,China（Wang L）

ObjectiveTo analyze results of atopy patch test （APT）with dust mite allergens at different concentrations in patients with atopic dermatitis（AD）,and to evaluate the diagnostic value of APT.MethodsTotally,85patientswithADwere enrolledinto thisstudy.Allthe patients underwentAPT with 5 concentrations（3 000,5 000,7 000,10 000 and 12 000 pnu/g）of dust mite allergens,as well as skin prick test （SPT）with dust mite allergens.Dust mite allergens were obtained from two different manufacturers（group 1 and 2）.Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）was performed to detect allergen-specific immunoglobulin E（SIgE）in sera from these patients.The sensitivity,specificity and positive predictive value of APT,SPT and SIgE assay were compared,and the results of APT were compared among different concentrations of allergens and between allergens from different manufacturers.ResultsWhen SIgE assay served as the gold standard,the sensitivity,specificity and positive predictive value in the diagnosis of dust mite allergy were 79.41%,76.12%,and 64.29%respectively for APT,73.53%,80.95%and 67.57%respectively for SPT with group 1 dust mite allergens,and 81.53%,77.78%and 65.09%respectively for APT,76.02%,79.85%and 66.07%respectively for SPT with group 2 allergens.When SPT was regarded as the gold standard,the sensitivity,specificity and positive predictive value in the diagnosis of dust mite allergy were 78.38%,77.42%,67.44%respectively for APT,67.57%,84.21%,73.53%respectively for SIgE assay with group 1 dust mite allergens,79.25%,80.63%and 69.55%respectively for APT,61.07%,82.54%and 77.21%respectively for SIgE assay with group 2 allergens.There were no significant differences in the sensitivity,specificity or positive predictive value of APT or SPT between the two groups of allergens.The positive rate of APT was 8.24%,22.35%,29.41%,44.71%and 41.18%respectively with group 1 allergens at 3 000,5 000,7 000,10 000 and 12 000 pnu/g,and 3.53%,23.53%,31.76%,34.12%and 35.29%respectively with group 2 allergens.No significant differences were observed in the positive rate of APT between group 1 and 2 allergens at same concentrations（allP＞ 0.05）,but a significant difference was observed in that between different concentrations of group 1 or 2 allergens（bothP＜ 0.05）.The positive rate of APT increased with the increase of allergen concentrations,but stopped rising when the concentrations of group 1 and 2 allergens reached 7 000 pnu/g and 5 000 pnu/g respectively.Conclusions The sensitivity of APT is relatively high for the diagnosis of dust mite allergy.The positive rate of APT increased with the increase in allergen concentrations,but stopped rising when the concentrations reached a certain level.

Dermatitis,atopic;Patch tests;Antigens,dermatophagoides;Anaphylaxis;Pricking needling

Li Dongning,Email:ldn000123@sina.com

2015-06-05）

（本文编辑：吴晓初）

李东宁，Email：ldn000123@sina.com

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2016.01.011

辽宁省医学高峰建设工程重点科研项目（200930）

Fund program:Key Scientific Research Program for Medical Peak Construction in Liaoning Province（200930）