临床分离铜绿假单胞菌10 662株的分布及耐药性变迁

郭小兵， 贺小红， 曹在秋， 胡晓欣， 李 远， 田富云， 任益慧

·论著·

临床分离铜绿假单胞菌10 662株的分布及耐药性变迁

郭小兵， 贺小红， 曹在秋， 胡晓欣， 李 远， 田富云， 任益慧

目的 了解郑州大学第一附属医院近6年来临床分离铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性变迁。 方法 收集2009年1月—2014年12月该院细菌室分离的不重复铜绿假单胞菌10 662株，分析探讨其分离率与分布、耐药性变迁、多重耐药铜绿假单胞菌检出情况。 结果 2009－2014年逐年铜绿假单胞菌总分离率分别为13.8 %、17.6 %、15.2 %、15.7 %、14.4 %和12.6 %；主要分布在ICU（46.0 %）、呼吸科（21.0 %）、普外科（15.0 %）和内科（11.0 %）等；主要标本来源为痰液（74.7 %）、血液（5.9 %）、分泌物（5.7 %）等； 6年间铜绿假单胞菌对哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦、头孢他啶、美罗培南、亚胺培南耐药率呈现整体上升趋势；逐年多重耐药菌株检出率分别为22.5 %、22.6 %、26.0 %、30.9 %、32.5 %和33.0 %，呈升高趋势。结论 该院临床分离铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药率处于较高水平且增长较快，应加强监测以利于临床合理应用抗菌药物。

铜绿假单胞菌； 分布； 耐药性； oprD突变

铜绿假单胞菌是目前医院感染的主要病原菌之一。其主要分布于ICU与呼吸科，引起下呼吸道感染［1］。近年来该菌对抗菌药物的不敏感率不断升高，多重耐药（multidrug resistant，MDR）菌株日益增多［2］。铜绿假单胞菌的高流行性、泛耐药性给临床抗感染治疗带来极大挑战。了解该菌的耐药谱与耐药性变迁，对于控制该菌所致感染，遏制其引起的医院感染发生和扩散尤为重要。为此，我们收集郑州大学第一附属医院6年间检出的10 662株不重复铜绿假单胞菌，回顾性分析其耐药性变迁情况，旨在了解本院临床分离铜绿假单胞菌耐药特点并为临床合理用药提供依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 收集我院细菌室2009年1月—2014年12月分离的不重复铜绿假单胞菌株10 662株，所有菌株均采用法国BioMerieux的VITEK-2全自动细菌鉴定/药敏分析系统鉴定。

1.1.2 实验材料 Mueller-Hinton（MH）琼脂培养基为英国OXOID有限公司产品，配制MH平皿；抗菌药物纸片购自英国OXOID。采用大肠埃希菌ATCC 25922、ATCC 35218，肺炎克雷伯菌ATCC 700603，金黄色葡萄球菌 ATCC 25923，铜绿假单胞菌 ATCC27853 作为质控菌株，所有菌株均购自卫生部药品鉴定所。

1.2 方法

1.2.1 细菌培养与药敏试验 严格按照《全国临床检验操作规程》进行细菌培养与药敏试验操作，采用纸片扩散法药敏试验检测MDR菌株对抗菌药物的耐药性，药敏结果根据CLSI 2014版标准判定。

1.2.2 MDR标准 选择具有抗假单胞菌活性的青霉素类、 头孢菌素类、 氟喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药物耐药≥3类（每一类抗菌药物中≥1种药物耐药，即为该类耐药）的菌株作为MDR菌株。

1.2.3 统计学方法 采用世界卫生组织细菌耐药性监测网WHONET 5.6软件分析系统对耐药率进行统计分析。采用SPSS 17.0软件对各年度间MDR铜绿假单胞菌检出率差异进行卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 菌株分离率

自2009年1月—2014年12月，共收集不重复铜绿假单胞菌10 662株。逐年铜绿假单胞菌总分离率依次为13.8 %、17.6 %、15.2 %、15.7 %、14.4 %和12.6 %。从时间分布来看，铜绿假单胞菌的总分离率除2009—2010年度升高外，2010至 2014年度整体呈现下降趋势。但从总分离率来看，铜绿假单胞菌总体较高，各年度依次居于医院感染病原菌的第2、1、2、1、2、2位，属于我院医院感染的主要分离菌株。

2.2 菌株来源和分布

10 662株铜绿假单胞菌中98.0 %分离自住院患者，2.0 %分离自门诊患者。从标本分布上看，痰液等呼吸道标本分离率为74.7 %、血液5.9 %、分泌物5.7 %、尿液5.3 %、脓液5.0 %、引流液2.9 %、其他0.05 %。从科室分布上看，ICU分离率占46.0 %、呼吸科21.0 %、普外科15.0 %、内科11.0 %、神经外科7.0 %和烧伤科1.0 %。

2.3 常用药物耐药性分析

2009－2014年铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药情况见表1。各年度铜绿假单胞菌对2种酶抑制剂复方制剂和头孢吡肟的耐药率均小于30 %，对阿米卡星、头孢他啶、碳青霉烯类、喹诺酮类等抗菌药物的耐药率在30 %～40 %，对头孢吡肟、阿米卡星、喹诺酮类抗菌药物耐药率呈整体下降趋势，而对加酶抑制剂类、碳青霉烯类、头孢他啶耐药率则呈整体上升趋势。各年度铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为22.1 %、20.8 %、20.3 %、21.4 %、29.0 %、31.5 %和17.4 %、19.3 %、22.2 %、31.3 %、38.3 %、32.9 %，铜绿假单胞菌对美罗培南的耐药率在2009和2010年度低于亚胺培南，而在2011—2014年度则高于亚胺培南。中介率显示，亚胺培南呈升高趋势，美罗培南则呈下降趋势。

2.4 MDR铜绿假单胞菌检出率

6 年共检出MDR铜绿假单胞菌2 999株，检出率逐年依次为22.5 %、 22. 6 %、 26.0 %、 30.9 %、 32.5 %和33.0 %。经统计学分析，2011与2012年MDR铜绿假单胞菌检出率差异有统计学意义（P＜0.05），2009—2014年MDR铜绿假单胞菌的检出率整体呈上升趋势。

碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌对其他抗菌药物的药敏结果见表2。

3 讨论

目前，铜绿假单胞菌分离率在国内多所医院呈上升趋势，本院铜绿假单胞菌总分离率则呈先升后降的趋势，这与全国医院感染监控网报告结果有所不同［3］。究其原因，考虑在本院流行的细菌中，大肠埃希菌的分离率逐年升高。大肠埃希菌分离株数的增多可引起铜绿假单胞菌分离率的相对降低。从菌株实际分离数量及分离率来看，铜绿假单胞菌仍是本院医院感染的主要分离菌。

表1 铜绿假单胞菌2009－2014年度对13种常用抗菌药物耐药性变迁Table1 Changing susceptibility profile of the Pseudomonas aeruginosa strains isolated from 2009 to 2014 to 13 commonly used antimicrobial agents

表2 碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌2009－2014年度对其他抗菌药物的药敏分析Table2 Susceptibility of carbapenems-resistant Pseudomonas aeruginosa to other antimicrobial agents from 2009 to 2014

铜绿假单胞菌是引起医院获得性肺炎（HAP）和呼吸机相关性肺炎的主要不发酵糖革兰阴性杆菌， 本次研究显示， 铜绿假单胞菌主要分布于ICU、呼吸科与普外科， 主要来源于呼吸道标本、 血液、与分泌物，与CHINET细菌耐药性监测网报告结果一致［3］。探其原因，ICU患者因基础病情严重，抗生素使用强度高与接受有创操作的概率大而易发医院获得性感染［4］，呼吸科患者则多患有慢性呼吸系统疾病，致支气管清除分泌物能力减弱，从而造成呼吸道分泌物淤积，易发条件致病菌感染［5］。

我院分离铜绿假单胞菌对13种常用抗菌药物耐药性统计分析结果显示有以下耐药特点：①对抗菌药物的耐药率总体较高，如对氨基糖苷类药物阿米卡星耐药率虽呈下降趋势，但已超过同时段全国水平［6］。②对多数抗菌药物的耐药率呈升高趋势，包括酶抑制剂复方制剂、第三代头孢菌素类、碳青霉烯类。其中对美罗培南耐药率由2011年的22.2 %骤升至2012年的31.3 %，该变化也可能与2012年CLSI修改该抗菌药物折点有关［7］。③对碳青霉烯类药物耐药率迅速升高。对亚胺培南耐药率由2009年的22.1 %升至2014年的31.5 %，对美罗培南由2009年的17.4 %升至2014年的32.9 %。④本研究中抗菌药物头孢吡肟与头孢哌酮-舒巴坦对铜绿假单胞菌有较好抗菌活性。⑤MDR铜绿假单胞菌逐年增高。⑥综合敏感率、耐药率与中介率，对美罗培南的中介菌株不断向耐药菌株变迁，对亚胺培南敏感菌株不断向中介菌株变迁。

碳青霉烯类抗生素是抗菌谱最广、抗菌作用最强的一类抗生素，主要包括亚胺培南、美罗培南等。有研究表明，只对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌的主要耐药机制是oprD突变［8］，在碳青霉烯类抗生素选择压力下突变的oprD可在患者间传播，故应规范抗生素分级使用制度。有文献报道在铜绿假单胞菌引起的HAP中，MDR菌的检出可增加该类患者的住院病死率［9］。而本研究发现本院MDR铜绿假单胞菌的检出率呈上升趋势，表明铜绿假单胞菌感染形势仍十分严峻。临床医护人员在护理与用药方面应高度注意，加强医护管理，依据药动学/药效学原则，制定合理用药方案。

总之，铜绿假单胞菌广泛分布及其多重/泛耐药性，导致其所致感染的治疗不容乐观。加强菌株耐药性监测，掌握菌株耐药性变迁规律，合理选择抗菌药物，是取得理想疗效，遏制MDR菌株产生与扩散流行的关键所在。

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Changing distribution and antibiotic resistance profle in 10 662 clinical strains of Pseudomonas aeruginosa

GUO Xiaobing， HE Xiaohong， CAO Zaiqiu， HU Xiaoxin， LI Yuan， TIAN Fuyun， REN Yihui.
（Department of Laboratory Medicine， the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450052， China）

Objective To investigate the changing distribution and antibiotic resistance profle of Pseudomonas aeruginosa isolates in the past 6 years in a hospital. Methods A total of 10 662 nonduplicate P. aeruginosa strains were collected from January 2009 to December 2014 in the First Affliated Hospital of Zhengzhou University. Retrospective analysis was used to investigate the prevalence，distribution， changing antibiotic resistance profile， and prevalence of multi-drug resistant strains. Results The prevalence of P. aeruginosa was at high level. The overall prevalence was 13.8 % in 2009， 17.6 % in 2010， 15.2 % in 2011， 15.7 % in 2012， 14.4 % in 2013， and 12.6 % in 2014. These strains were mainly distributed in ICU （46.0 %）， Department of Respiratory Diseases （21.0 %），Department of General Surgery （15.0 %） and Department of Internal Medicine （11.0 %）. The primary source of these isolates included sputum （74.7 %）， blood （5.9 %） and secretions （5.7 %）. The P. aeruginosa strains showed a trend of increasing resistance rate to piperacillin-tazobactam， cefoperazone-sulbactam， ceftazidime， meropenem and imipenem in the 6-year period. The prevalence of multi-drug resistant strains was 22.5 % in 2009， 22.6 % in 2010， 26.0 % in 2011， 30.9 % in 2012， 32.5 % in 2013 and 33.0 % in 2014，respectively. Conclusions The P. aeruginosa isolates in our hospital has relatively high and increasing resistance rate to the commonly used antimicrobial agents. We should strengthen the monitoring of antimicrobial resistance to ensure rational use of antimicrobial agents.

Pseudomonas aeruginosa； distribution； antibiotic resistance； oprD mutation

R378.991

A

1009-7708 （ 2016） 05-0627-04

10.16718/j.1009-7708.2016.05.018

2015-10-13

2015-11-30

河南省医学科技攻关计划普通项目（201403044）。

郑州大学第一附属医院检验科，郑州 450052。

郭小兵（1971—），男，博士，副教授，主要从事临床微生物耐药机制研究。

郭小兵，E-mail：gxbing928@126.com。