食用菌液体菌种发酵罐专用母种制作方法

白胡木吉力图　白福林　哈斯图力古尔　刁雅娟　钱丹珠

摘 要：本文介绍了液体专用母种的制作过程、培养终点及质量好坏的判断、液体专用母种生产中应注意的问题等内容。

关键词：液体菌种；培养器；母种

中图分类号：S646 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160432006

在液体菌种培养器的使用越来越普及时种植户遇到了不会制作液体菌种培养器专用母种的难题，影响了种植户使用液体菌种培养器这种先进设备的积极性。本文介绍其制作方法如下：

1 液体专用母种的制作过程

1.1 试管斜面种的制作

采用PDA综合培养基。另外，根据不同需要可以采用营养加富培养基，即在上述配方外加入20g麸皮或0.5g蛋白胨；用漏斗将培养基分装至试管1/5～1/4处，试管口壁不粘培养基；梳棉制作大小合适的棉塞，松紧适度，塞入试管内1.5 ～2.0cm，外露0.5 ～1.0cm7支或10支捆成1捆，管口用牛皮纸包好，直立于灭菌锅内，准备灭菌；121～126℃（0.11 ～0.15MPa）的条件下灭菌30min，将培养基冷却至60～70℃时将灭好菌的培养摆成斜面，冷却备用；当培养基温度降至30℃以下时，无菌室内将菌种用接种钩接入空白培养基上，动作迅速、准确；根据不同的品种选择其适宜的温度避光培养，常规品种22～26℃，高温品种29～31℃，一般7～11d即可长好，菌丝生长健壮、洁白、均匀、无任何杂菌污染的菌种为优良菌种。

1.2 摇瓶种的制作

按液体培养基的配料办法按一定的配比制作培养基（土豆20%、麸皮45%～5%、红糖1.2%～5%、葡萄糖1.5%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、蛋白胨0.3%、VB120mg/L）；每瓶装料系数为20%～40%，即1000mL的锥形瓶装料约200～400mL；棉塞外包1层纱布，大小要合适，上面加盖1层牛皮纸，用线绳绑好。

121～126℃（0.11MPa～0.15MPa）的条件下灭菌30min；每瓶接入2～3块0.5cm2～1cm2的菌块，使菌块尽量漂浮在液面上；把接好种的锥形瓶置摇床上（或静置24h后），在23～25℃的条件下振荡培养，一般7～10d即可长好。可以看见，瓶里有大量基本均匀、活力旺盛的菌球；菌球形态应大小均匀、活力旺盛、毛刺明显，静置5min后菌球占菌液浓度的80%以上或不分层。菌液由前期的微浑浊变得澄清透明，多数是浅黄色或橙黄色；若变得浑浊不清，则很可能是染菌。到培养后期菌液的糖香味会逐渐消失，取而代之的是或有或无的菌种特有的清香味；若有臭味、酸味、霉味，则可能是染菌。若以上指标还不能判断菌种的质量，还可以将菌种放在20～25℃的条件下静置48h左右。若表层菌种萌发明显且无其它颜色的孢子，则多为正常；若有其它特殊颜色，则可能是染菌。

1.3 固体颗粒培养基的制作

配方有木腐类，硬杂木屑73%～78%、麸皮20%～25%、

红糖1%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、石膏1%、含水量60%～63%；草腐类，谷粒40%～50%、麸皮20%～25%、红糖1%、木屑20%～25%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、石膏1%～2%、含水量60%～63%。注：其中杂木屑和麸皮用20～40目的筛子过筛，用筛子中间的细小颗粒；用500mL锥形瓶盛装，用压子压平至刻度450mL左右（每瓶约装干料150g）；塞上大小合适外包纱布的棉塞，盖上1层牛皮纸；在121～126℃的条件下灭菌90min；在无菌条件下用灭过菌的吸管将经过测生长正常的摇瓶种接到灭好菌的固体培养基上，每瓶接入10mL；把接好种的菌瓶置24～26℃下培养，待菌丝长满后可以使用；用肉眼观察将菌丝生长弱、慢及有其它异常情况的菌种瓶挑出不用，生长良好的菌种一般菌丝短、密、齐，菌丝颜色洁白一致，无任何杂菌。

2 液体专用母种生产中应注意的问题

2.1 制定好生产计划、严格执行生产操作程序

制定好生产计划，合理安排各级菌种的生产时间，保持其生产的连续性，保证菌种在最佳状态时得到应用。严格执行菌种的生产操作程序，保证菌种的纯度、质量和合格率。

2.2 保证菌种的可靠性

能及时准确地判断出作为各类种源的菌种是否染菌，特别是摇瓶种，更应该通过各种途径保证其可靠性。

2.3 保存好母种

液体专用母种长好后应在1～5℃条件下避光保存，在1个月之内使用效果最好。

2.4 熟练生产工艺操作

在生產初期，如果自己不会制作母种，可以从专业制作厂家购买专用母种进行生产或用摇瓶种生产，以便于熟练生产工艺操作，及时准确判断操作中可能出现的问题。

参考文献

[1] 王德芝，张水成，王贤香等.食用菌生产技术[M].北京：中国轻工业出版社，2007：167-183.

作者简介：白胡木吉力图（1973-），男，通辽职业学院副教授、农学硕士，从事食用菌育种与栽培研究。