丹参酮ⅡA磺酸钠联合乌司他丁对重症急性胰腺炎患者炎症及血管内皮功能的影响

2016-10-13 09:17张利
河北医药 2016年19期
关键词:磺酸钠乌司丹参酮

张利



·论著·

丹参酮ⅡA磺酸钠联合乌司他丁对重症急性胰腺炎患者炎症及血管内皮功能的影响

张利

目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠联合乌司他丁对重症急性胰腺炎患者外周血单个核细胞NF-κB炎症信号通路和血管内皮功能的影响。方法选取2014年1月至2016年1月收治的重症急性胰腺炎患者96例,随机分为对照组和观察组,每组48例。对照组在常规治疗基础上给予乌司他丁治疗,观察组在对照组基础上加用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液,疗程1周,服用 2周。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、一氧化氮(NO)、血管性血友病因子(vWF)、血栓素A2(TXA2)、前列环素I2(PGI2)变化。采用Real time-PCR和Western-blot检测外周血单个核细胞NF-κB炎症信号通路关键蛋白(NF-κB、IκB)表达变化。采用半自动血液流变仪检测血液流变学指标(血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数)变化。根据急性生理与慢性健康评分系统(APACHEⅡ)、急性胰腺炎分级评分系统(Balthazar CT)评估2组预后。结果与治疗前比较,治疗后2组IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、NF-κB mRNA和蛋白表达、vWF、TXA2、血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数及APACHEⅡ、Balthazar CT评分均显著降低,IκB mRNA和蛋白表达、NO、PGI2均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),但观察组改善程度更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA磺酸钠联合乌司他丁能够抑制重症急性胰腺炎患者外周血单个核细胞NF-κB炎症信号通路的激活和炎性因子释放,改善血管内皮功能和血液流变学指标,这可能是丹参酮ⅡA磺酸钠的作用机制之一。

丹参酮ⅡA磺酸钠;乌司他丁;重症急性胰腺炎;NF-κB;血管内皮功能

重症急性胰腺炎是涉及多种因素、多环节累及的外科急腹症,是急性胰腺炎的一种特殊类型,约占胰腺炎症的25%左右。该病是由于胰蛋白酶进入血液循环导致胰腺自身消化、充血、出血、坏死,严重者出现多脏器功能衰竭,具有起病急、发展迅速、预后差的特点,病死率高达30%[1,2]。重症急性胰腺炎发病机制复杂,而过度炎性反应和炎性因子水平增高是导致患者出现多脏器功能衰竭的重要原因。研究证实NF-κB炎症信号通路活化和微循环障碍贯穿于重症急性胰腺炎的整个发病过程,与重症急性胰腺炎发生、发展密切相关[3]。乌司他丁是目前临床治疗重症急性胰腺炎的常用药物,对重症急性胰腺炎发生、发展中的多个环节具有抑制作用,比如抑制胰蛋白酶分泌、控制炎性反应、改善胰腺微循环等[4]。丹参酮ⅡA磺酸钠是以水溶性成分入药制成的丹参制剂,具有抑制胰蛋白酶活性、降低炎性反应、保护血管内皮等功能[5]。本研究旨在探讨丹参酮ⅡA磺酸钠联合乌司他丁对重症急性胰腺炎患者NF-κB炎症信号通路和血管内皮功能的影响,以期为重症急性胰腺炎的临床治疗提供理论依据和实验基础。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2014年1月至2016年1月我院普外科收治的重症急性胰腺炎患者96例,所有患者均符合2013年中华医学会制定的重症急性胰腺炎诊断标准[6]。96例患者随机分为对照组和观察组,每组48例。对照组男32例,女16例;年龄38~58岁,平均年龄(48.59±6.23)岁;病程11~86 h,平均(3.06±0.35)d;观察组男30例,女18例;年龄35~56岁,平均年龄(46.27±6.11)岁;病程14~97 h,平均(3.35±0.41)d。2组年龄、性别比、病程等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准:①入院时发病时间不超过72 h;②根据症状(持续性腹痛、腹胀)、血淀粉酶升高超过正常值3倍、影像学检查结果确诊为重症急性胰腺炎;③患者签署知情同意书。

1.2.2排除标准:①合并心、肝、胆、肾脏疾病患者;②恶性肿瘤患者;③精神疾病患者。

1.3治疗方法2组均给予吸氧、禁食、胃肠减压、抗感染、纠正水电解质失衡等常规治疗措施。对照组在常规治疗基础上给予乌司他丁(广东天普生化医药股份有限公司),10万 U,静脉滴注,2次/d。观察组在对照组基础上采用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(上海第一生化药业有限公司),40 mg,静脉滴注,1次/d。

1.4观察指标分别在治疗前后抽取患者清晨空腹静脉血2 ml,3 000 r/min离心10 min,分离血清。采用ELISA实验检测血清IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP及血浆NO、vWF、TXA2、PGI2变化。采用Real time-PCR和Western-blot检测NF-κB、IκB mRNA和蛋白表达变化。采用半自动血液流变仪检测血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数。根据APACHEⅡ、Balthazar CT评分评估2组预后,0~6分为优,7~12分为良,13~18分为差,分值越低表示预后越好。

1.5实验方法

1.5.1材料与仪器:NF-κB、IκB一抗购自美国Invitrogen公司;Prime Script TM RT Master Mix(Perfect Real Time)反转录试剂盒购自日本Takara公司;Trizol、实时荧光定量试剂盒购自美国Promega公司;细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒、高灵敏度化学发光检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司;Chemi DocTM XRS+化学发光凝胶成像系统购自美国Biorad公司;7300型Real time-PCR扩增仪购自美国ABI公司;960酶标仪购自美国Sigma公司。

1.5.2外周血单个核细胞(PBMC)提取:采集患者外周血10 ml,EDTA 抗凝,采用Ficoll液方法常规分离PBMC,加入 0.5 ml Trizol,混匀后-80℃冻存。

1.5.3Real time-PCR:Trizol提取细胞总RNA,按照试剂盒说明书加样进行逆转录反应,ABI 7300型荧光定量PCR仪扩增。引物序列由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。用仪器自带的分析软件得到各样本、各基因扩增的Ct值,以GAPDH为内参照基因,目的基因表达相对值RQ=2-ΔΔCt。见表1。

表1 Real time-PCR引物序列及扩增产物长度

1.5.4Western-blot:提取细胞总蛋白,半干法电泳转移至PVDF膜,10%脱脂奶粉封闭2 h。依次加入特异性一抗和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG,化学发光法显色、定影。用UVP软件扫描测定蛋白条带IOD值,GAPDH作为内参照,以目的蛋白与GAPDH吸光度值的比值表示目的蛋白相对表达水平。

1.5.5Elisa实验:采用ELISA实验测定血清IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP及血浆NO、vWF、TXA2、PGI2变化,试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。严格按照试剂盒说明书操作。

2 结果

2.12组IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP水平比较2组治疗前IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP水平比较差异无统计学意义(P>0.05);2组治疗后IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP水平均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但观察组降低程度更明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

组别IL-6(ng/L)IL-8(ng/L)TNF-α(ng/L)hs-CRP(mg/L)对照组 治疗前289.45±21.50114.02±12.574.18±0.5936.99±4.47 治疗后136.69±15.41*68.11±8.43*3.07±0.36*17.00±2.36*观察组 治疗前281.50±20.46109.98±10.514.20±0.6037.43±4.43 治疗后60.03±8.12*#25.20±3.15*#1.15±0.17*#6.21±0.46*#

注:与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

2.22组NF-κB、IκB的mRNA和蛋白表达比较2组治疗前NF-κB、IκB mRNA和蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05);2组治疗后NF-κB mRNA和蛋白表达均较治疗前明显降低,IκB mRNA和蛋白表达均较治疗前明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),但观察组改善程度更明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

组别NF-κBmRNA蛋白IκBmRNA蛋白对照组 治疗前3.92±0.483.76±0.450.91±0.140.79±0.11 治疗后3.05±0.36*2.88±0.40*2.12±0.26*1.98±0.25*观察组 治疗前3.96±0.453.80±0.490.87±0.110.76±0.08 治疗后1.34±0.12*#1.12±0.10*#3.51±0.48*#3.32±0.45*#

注:与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

2.32组NO、vWF、TXA2、PGI2水平比较2组治疗前NO、vWF、TXA2、PGI2水平比较差异无统计学意义(P>0.05);2组治疗后vWF、TXA2水平均较治疗前明显降低,NO、PGI2水平均较治疗前明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),但观察组改善程度更明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

组别NO(U/ml)vWF(%)TXA2(ng/L)PGI2(ng/L)对照组 治疗前3.95±0.47258.15±38.29434.25±38.38168.23±14.59 治疗后5.12±0.56*199.67±18.33*321.46±25.51*235.64±21.68*观察组 治疗前4.06±0.50250.24±35.06442.16±40.23160.76±13.36 治疗后9.26±0.63*#110.25±13.37*#192.20±16.89*#378.37±28.02*#

注:与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

2.42组血液流变学指标比较2组治疗前血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数比较差异无统计学意义(P>0.05);2组治疗后血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组降低程度更明显(P<0.05)。见表5。

组别血浆黏度(mPa·s)全血高切黏度(mPa·s)全血低切黏度(mPa·s)红细胞压积红细胞聚集指数对照组 治疗前5.52±0.605.34±0.5310.88±1.320.62±0.095.11±0.50 治疗后5.00±0.53*4.84±0.48*8.97±1.02*0.51±0.05*4.68±0.44*观察组 治疗前5.50±0.615.30±0.5011.06±1.450.60±0.075.14±0.56 治疗后3.89±0.47*#3.48±0.42*#7.00±0.93*#0.39±0.04*#3.99±0.37*#

注:与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

2.52组APACHEⅡ、Balthazar CT评分比较2组治疗前APACHEⅡ、Balthazar CT评分比较差异无统计学意义(P>0.05);2组治疗后APACHEⅡ、Balthazar CT评分均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但观察组降低程度更明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表6。

3 讨论

重症急性胰腺炎是临床常见急腹症,容易并发全身性炎性反应综合征、代谢紊乱、多脏器功能衰竭等严重并发症,患者病死率高,预后差。随着对重症急性胰腺炎发病机制的不断深入研究,目前认为该病是涉及多因素、多环节的复杂病症,其中机体炎性反应过度激活和炎性因子过量生成在重症急性胰腺炎发生、发展中发挥关键作用[7]。这主要是由于胰腺组织作为抗原激活了巨噬细胞,后者分泌过量炎性因子,进而造成炎性因子网络功能紊乱,炎性因子相互作用共同导致血管通透性增加、血容量减少,甚至发展为全身性炎性反应综合征和多脏器功能衰竭[8]。

表6 2组APACHEⅡ、Balthazar CT评分比较 n=48,分,

注:与治疗前比较,*P<0.05;与对照组比较,#P<0.05

IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP是目前认为与重症急性胰腺炎发生、发展最为密切的促炎细胞因子。IL-6是由T淋巴细胞、巨噬细胞分泌的具有多种生物活性的细胞因子,能够通过激活补体、促使黏附分子产生、活化淋巴细胞等作用参与机体抗感染免疫反应[9]。IL-8是单核巨噬细胞分泌的细胞因子,具有趋化中性粒细胞迁移至靶器官及促进IL-6分泌的作用,从而导致靶器官炎性损伤[10]。TNF-α是介导胰腺及其他组织释放多种炎性因子的始动因子,也是导致炎性反应扩大、诱导白细胞趋化和黏附及胰腺组织局部坏死的重要因素[11]。hs-CRP是机体非特异性炎性反应标志物,其水平高低直接决定重症急性胰腺炎炎性反应程度[12]。NF-κB是参与炎症相关基因表达的重要核转录因子,同时也在重症急性胰腺炎全身炎性反应综合征环节发挥“信使”作用。正常情况下,NF-κB在细胞内以2个NF-κB单体和抑制因子IκB组成的无活性三聚体形式存在。当细胞受到内毒素、ROS等外界刺激时,IκB的丝氨酸残基被IκB激酶磷酸化,继而被蛋白酶降解。一旦IκB被降解,NF-κB迅速活化并转位到细胞核内,与靶基因上的启动子结合,参与调控机体免疫炎性反应、细胞分化和生长。因此,NF-κB炎症信号通路的活化是重症急性胰腺炎发生、发展的关键环节[13]。

胰腺微循环障碍是重症急性胰腺炎的始动和加重因素,贯穿于疾病发生、发展的整个过程,主要是指胰腺血流动力学异常、微血管功能紊乱及细胞因子紊乱,三者相互影响,共同导致胰腺缺血、坏死[14]。重症急性胰腺炎时血液流变学异常容易引起血管内皮受损、微小静脉血流阻力增加、血栓形成,从而导致胰腺及其他重要器官微循环障碍,这是造成胰腺缺血坏死及多脏器功能衰竭的重要病理基础。此外,血管活性物质(NO、vWF、TXA2、PGI2等)在重症急性胰腺炎微循环障碍中起重要作用。基础和临床研究表明,NO释放障碍及TXA2/PGI2失衡是导致血管内皮功能障碍、血小板聚集、血栓形成的重要因素,而vWF 是血管内皮损伤的重要标志物[15]。

本研究通过观察丹参酮ⅡA磺酸钠联合乌司他丁对重症急性胰腺炎患者NF-κB炎症信号通路和血管内皮功能的影响,结果显示,与治疗前比较,治疗后2组IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、NF-κB mRNA和蛋白表达、vWF、TXA2、血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数及APACHEⅡ、Balthazar CT评分均显著降低,IκB mRNA和蛋白表达、NO、PGI2均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),但观察组改善程度更明显,差异有统计学意义(P<0.05),说明丹参酮ⅡA磺酸钠联合乌司他丁治疗重症急性胰腺炎能够明显抑制患者免疫炎性反应、改善血管内皮功能及预后。

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Effects of sulfotanshinone sodium injection combined with ulinastatin on inflammation and vascular endothelial function of patients with severe acute pancreatitis

ZHANGLi.

TheSecondDepartmentofSurgery,People’sHospitalofHandanCity,Hebei,Handan056001,China

ObjectiveTo observe the effects of sulfotanshinone sodium injection combined with ulinastatin on peripheral blood mononuclear cell NF-κB inflammatory signal pathway and vascular endothelial function in patients with severe acute pancreatitis.MethodsNinety-six patients with severe acute pancreatitis who were admitted and treated in our hospital from January 2014 to January 2016 were divided into observation group (n=48) and control group (n=48). The patients in control group ,on the basis of conventional therapy,were treated by ulinastatin,however,the ptients in observation group, on the basis of control group, were treated by sulfotanshinone sodium injection,with a treatment course of 2 weeks.The serum levels of interleukin 6 (IL-6), interleukin 8 (IL-8), tumor necrosis factor α (TNF-α), ultra-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), nitric oxide (NO), von Willebrand Factor (vWF), thromboxane A2 (TXA2) and prostacyclin (PGI2) were detected by ELISA.The expression levels of key proteins (NF-κB and IκB) of peripheral blood mononuclear cell NF-κB inflammatory signal pathway were detected by Real time-PCR and Western-Blot,respectively. The changes of hemorheological parameters including plasmaviscosity, high blood viscosity, low blood viscosity, hematocrit and RBC aggregation index were measured by semi-automatic blood rheometer. The patients' prognoses were evaluated by means of APACHEⅡ and Balthazar CT scoring system.ResultsAs compared with those before treatment, the levels of IL-6,IL-8,TNF-α,hs-CRP,NF-κB mRNA and protein,vWF,TXA2, plasmaviscosity, high blood viscosity, low blood viscosity, hematocrit and RBC aggregation index, APACHEⅡ scores,Balthazar CT scores were significantly decreased after treatment in both groups,however, the expression levels of IκB mRNA and protein,NO,PGI2 were significantly decreased after treatment in both groups (P<0.05). However the improvement degree of these indexes in observation group was more obvious than that in control group (P<0.05).ConclusionThe sulfotanshinone sodium injection combined with ulinastatin can inhibit the activation of peripheral blood mononuclear cell NF-κB inflammatory signal pathway in patients with severe acute pancreatitis and can reduce the release of inflammatory factors,and can improve vascular endothelial function and hemorheological parameters,which may be one of action mechanisms of sulfotanshinone sodium injection.

sulfotanshinone sodium injection; ulinastatin; severe acute pancreatitis; NF-κB; vascular endothelial function sulfotanshinone sodium injection

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.19.010

056001河北省邯郸市人民医院外二科

R 576.1

A

1002-7386(2016)19-2923-04

2016-05-06)

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