龙钻通痹颗粒镇痛、抗炎及急性毒性的实验研究

庞宇舟，蒋　林，罗宇东，米阿娜（.广西中医药大学，广西南宁53000；.广西中医药大学制药厂，广西南宁53003）

龙钻通痹颗粒镇痛、抗炎及急性毒性的实验研究

庞宇舟1，蒋林1，罗宇东2，米阿娜1
（1.广西中医药大学，广西南宁530001；2.广西中医药大学制药厂，广西南宁530023）

［目的］研究龙钻通痹颗粒镇痛、抗炎作用及急性毒性。［方法］①采用扭体、热板法两种镇痛试验方法，每个实验将60只小鼠随机分为生理盐水组，阿司匹林组（50 mg/ml）,龙钻通痹组（30 g/kg）,每组20只,各组按10 ml/kg剂量灌胃给药,每天1次,连续3 d，然后在预处理后的不同时间分别观察药物对化学、电极热板刺激痛反应的影响。②抗炎试验采用二甲苯致小鼠耳肿胀法。取小鼠40只，随机分为4组，生理盐水组给予等体积蒸馏水，龙钻通痹高、低剂量组按21.4 g/kg和10.7 g/kg剂量给予龙钻通痹颗粒溶液，阿斯匹林组按0.2 g/kg剂量给予阿斯匹林溶液，连续灌胃给药7 d，每天1次。于末次给药后1 h在小鼠右耳涂20 μl二甲苯致炎，1 h后处死动物，剪下双耳，用6 mm打孔器切下双耳片称重，以右耳重量减去左耳重，观察其肿胀程度。③急性毒性试验采用小鼠灌胃法，测定龙钻通痹颗粒的最大给药量。［结果］①扭体法试验中，与生理盐水组比较，龙钻通痹组和阿司匹林组均能明显抑制小鼠的扭体次数（P<0.01）,延长扭体潜伏期（P<0.01）；其中龙钻通痹组镇痛作用与阿司匹林组相似（P>0.05）。表明龙钻通痹颗粒对醋酸引起的疼痛有显著的镇痛作用。②热板法试验中，药后30 min，与同组给药前比较，阿司匹林组能显著延长小鼠的痛阈值（P＜0.01）；与生理盐水组比较，龙钻通痹组和阿司匹林组均能显著延长小鼠的痛阈值（P＜0.05或P＜0.01）；药后60 min和90min，龙钻通痹组与给药前比较和与生理盐水组同时段比较，均能显著延长小鼠的痛阈值，差异具有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）。③抗炎试验表明龙钻通痹大剂量组和阿斯匹林组能明显抑制小鼠耳肿胀，具有较好的抗炎作用。④急性毒性试验中，测出龙钻通痹颗粒的最大耐受量为172.8 g/kg，相当于人临床用量的161倍，毒性很小。［结论］龙钻通痹方颗粒具有镇痛、抗炎作用，急性毒性很小。

龙钻通痹颗粒；镇痛；抗炎；急性毒性

类风湿关节炎（RA）是一种病因未明的以炎性滑膜炎为主的慢性自身免疫性疾病，临床表现为外周关节的非特异性炎症，患病的关节及其周围组织被进行性破坏，若得不到及时有效的治疗，可导致关节畸形，发生功能障碍，严重者功能丧失。全世界平均患病率大约为1%，我国患病率大约在0.32%～0.36%［1］。目前临床上常用的药物主要是非甾体类抗炎药、激素类药物和生物制剂等，但此类药物价格昂贵、长期服用毒副作用大。因此，开发有效且毒副作用低的治疗类风湿性关节炎药物势在必行。龙钻通痹颗粒是广西中医药大学自主研发的民族药制剂，由飞龙掌血、大钻、青风藤、五指毛桃等药物组成，通过疏通龙路、火路之瘀滞，起到补虚祛毒的功效，在临床上用于治疗活动期类风湿关节炎［2］。其中青风藤具有祛风散瘀、利湿止痛的功效，五指毛桃具有健脾益气、化湿舒筋之功，为补气之品。现代研究表明青风藤含有的青风藤碱有镇痛、抗炎、镇静、消肿等作用［3］，五指毛桃的主要成分补骨脂素常作为评价五指毛桃质量的重要指标［4］。前期课题组已开展了龙钻通痹颗粒的质量标准与工艺方面的研究［5-8］，本实验对该制剂进行镇痛、抗炎及急性毒性研究，为临床用药提供理论依据。

1　实验材料

1.1动物昆明系小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，清洁级，合格证号：SCXK桂2014－0002，购自广西医科大学实验动物中心。饲养于相对湿度（60±10）%、20～25℃的环境中，自由饮水，颗粒饲料喂养。

1.2试药龙钻通痹颗粒制粒前干膏粉（批号：20150201），由广西中医药大学制药厂提供，棕褐色，每1 g干膏粉含生药9.266 g，人口服推荐用量为每人（成人）每日101 g生药，成人体重按60 kg计算，折合剂量为1.68 g生药/kg BW；阿司匹林肠溶片为北京曙光药业有限责任公司产品，生产批号为20140607，粉碎后以注射用水加吐温-80助溶配置成混悬液，备用。

1.3主要仪器智能热板仪（YLS-6A，山东省医学科学院设备站生产）；BS224S型电子天平（北京赛多利斯）；SM-3自动化酶免分析仪（北京天石医疗用品制作所）；RE501旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限公司）；XFS-280压力蒸汽灭菌器（浙江新丰医疗器械有限公司）；HH-6数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）；LRH-250生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；101-1恒温电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）。

2　方法与结果

2.1小鼠扭体镇痛试验［9-10］取小鼠60只，雌雄各半，随机分为生理盐水组、阿司匹林组（0.5 g/ml）、龙钻通痹组（30 g/kg），每组20只，各组按10 ml/kg剂量灌胃给药，每天1次，连续3 d。末次给药1 h后，各鼠分别腹腔注射0.6%醋酸溶液20 ml/kg（醋酸溶液临用前配制），观察、记录注射醋酸溶液后15 min内各组发生扭体反应（腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的小鼠数量和各鼠扭体次数。

扭体反应抑制率计算：抑制百分率（%）=（对照组平均扭体次数-给药组平均扭体次数）/对照组平均扭体次数×100%。结果见表1。

表1　龙钻通痹颗粒对小鼠醋酸扭体反应的影响（±s，n=20）

表1　龙钻通痹颗粒对小鼠醋酸扭体反应的影响（±s，n=20）

注：与生理盐水组比较，①P<0.01

组别剂量（g/kg）扭体次数（次）扭体潜伏期（s）抑制率(%)生理盐水组-21.10±10.625.00±2.82-阿司匹林组0．510.00±4.57①7.50±2.94①52.60龙钻通痹组3010.05±7.87①8.00±3.65①52.40

由表1可见，与生理盐水组比较，龙钻通痹组和阿司匹林组均能明显抑制小鼠的扭体次数（P<0.01），延长扭体潜伏期（P<0.01）；其中龙钻通痹组镇痛作用与阿司匹林组相当（P> 0.05）。表明龙钻通痹颗粒对醋酸引起的疼痛有显著的镇痛作用。2.2小鼠热板镇痛试验［9-10］实验前将雌性小鼠置于智能热板仪55.0±0.5℃进行筛选，以小鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈指标，选取反应潜伏期在10～30 s的合格小鼠60只，按体重随机分成生理盐水组、阿司匹林组（0.5 g/ml）、龙钻通痹组（30 g/kg），每组20只，各组按10 ml/kg剂量灌胃给药，每天1次，连续3 d，分别测定给药前及末次给药后30 min、60 min、90 min各鼠的痛阈值。将每只小鼠正常痛阈值各测2次，每次间隔5 min，取其平均值为给药前正常痛阈值，比较同组药后不同时间平均痛阈与基础痛阈的差异，判断是否有镇痛作用。结果见表2。

表2　龙钻通痹颗粒对小鼠热痛反应的影响（±s，n=20）

表2　龙钻通痹颗粒对小鼠热痛反应的影响（±s，n=20）

注：与同组给药前比较，①P<0.05，②P<0.01；与生理盐水组同时间段比较，③P<0.05，④P<0.01

给药后痛阈值（s）痛阈提高率（%）30 min60 min90 min30 min60 min90 min生理盐水组-17.06±4.4817.78±5.3117.52±4.2417.18±5.184.212.690.7阿司匹林组0．516.98±5.2424.37±7.99②③19.09±8.6818.26±6.0543.5112.387.49龙钻通痹组3017.20±3.4024.10±4.28④23.84±5.23②④23.59±10.86①③40.1638.6337.19组别剂量（g/kg）给药前痛阈值（s）

由表2可见，药后30 min，与同组给药前比较，阿司匹林组能显著延长小鼠的痛阈值（P＜0.01）；与生理盐水组比较，龙钻通痹组和阿司匹林组均能显著延长小鼠的痛阈值（P＜0.05或P＜0.01）；药后60 min和90 min，龙钻通痹组与给药前比较以及与生理盐水组同时间段比较，均能显著延长小鼠的痛阈值，差异具有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）。

2.3抗炎作用试验［9-10］采用小鼠二甲苯所致耳肿胀实验。取体重18～22 g小鼠40只，随机分为4组：生理盐水组，龙钻通痹颗粒高、低剂量组，阿司匹林组，每组10只。龙钻通痹颗粒高、低剂量组分别按21.4 g/kg和10.7 g/kg剂量给予龙钻通痹颗粒溶液，阿司匹林组按0.2 g/kg剂量给予阿司匹林溶液，灌胃容积均为20 ml/kg；生理盐水组给予等体积蒸馏水。连续灌胃给药7 d，每天1次。于末次给药后1 h，在小鼠右耳涂20 μl二甲苯致炎。1 h后处死动物，剪下双耳，用6 mm打孔器切下双耳片称重，以右耳重量减去左耳重量，观察其肿胀程度。结果见表3，龙钻通痹高剂量组和阿司匹林组能明显抑制小鼠耳肿胀（P＜0.05），具有较好的抗炎作用。

表3　龙钻通痹颗粒对小鼠耳肿胀的影响（±s）

表3　龙钻通痹颗粒对小鼠耳肿胀的影响（±s）

注：与生理盐水组比较，①P＜0.05

组别n剂量（g/kg）耳肿胀度（mg）生理盐水组10-11.2±2.4阿司匹林组100.27.0±2.2①龙钻通痹高剂量组1021.47.8±2.3①龙钻通痹低剂量组1010.79.3±2.6

2.4急性毒性试验［11］取昆明种小鼠40只，体重18～22 g，雌雄各半，随机分为2组：龙钻通痹颗粒组和空白对照组，每组20只。小鼠禁食不禁水20 h后，龙钻通痹颗粒组以最大给药浓度（3.2 g药材/ml），最大给药体积40 ml/kg灌胃给予受试药液，一天灌胃2次（每次间隔8 h）；空白对照组灌胃等量的蒸馏水。观察给药后14 d内小鼠的外观、体重、行为、四肢活动、进食、呼吸、排泄、死亡等情况。14 d后处死小鼠进行解剖，观察各种脏器病变的情况。结果表明，给药后14 d内所有小鼠无死亡，饮食、外观、呼吸、行为、四肢活动、分泌物及排泄物等均未见异常；对小鼠体重增长无显著差异。14 d后解剖小鼠，观察心、肝、脾、肺、肾等器官，龙钻通痹颗粒组与空白对照组比较无异常。测得龙钻通痹颗粒的最大给药量为172.8 g/kg，相当于人临床用量的161倍，表明龙钻通痹颗粒的急性毒性很小。

3　讨论

本实验研究了龙钻通痹颗粒的镇痛、抗炎作用及急性毒性。热板法镇痛试验表明，龙钻通痹颗粒能显著延长小鼠的痛阈值（P<0.05或P＜0.01）；扭体法镇痛试验可见，与生理盐水组比较，龙钻通痹组能明显减少小鼠的扭体次数（P<0.01），作用与阿司匹林组相当（P>0.05），龙钻通痹颗粒对醋酸引起的疼痛有显著的镇痛作用；抗炎试验表明龙钻通痹高剂量组和阿司匹林组能明显抑制小鼠耳肿胀，具有较好的抗炎作用。在急性毒性试验中，测出龙钻通痹颗粒的最大耐受量为172.8 g/kg，相当于人临床用量的161倍，毒性很小。本实验结果表明，龙钻通痹颗粒具有良好的抗炎、镇痛作用，这可能是其治疗类风湿关节炎的药理学基础。

［1］叶任高，陆再英.内科学［M］.北京：人民卫生出版社，2004: 886.

［2］庞宇舟，邢沙沙，方刚，等.壮药龙钻通痹方治疗类风湿关节炎的临床观察［J］.中国民族医药杂志，2013，19（1）:1-2.

［3］李乐，张彩玲，宋必卫.青藤碱的药理研究与临床应用［J］.中药新药与临床药理，2006，17（4）:310-313.

［4］董青松，欧彪，陈乾平．五指毛桃研究进展［J］．广西医学，2006，28（6）:950.

［5］邢沙沙，庞宇舟，张青槐，等.壮药龙钻通痹方对实验性关节炎大鼠模型抗炎因子IL-4、IL-10的影响［J］.中国民族医药杂志，2013，19（12）：44-45.

［6］张青槐，庞宇舟，邢沙沙，等.壮药龙钻通痹方对关节炎大鼠模型致炎因子TNF-α、IFN-γ的影响［J］.中国医疗前沿，2013，8（21）:9-10，26.

［7］李建颖，蒋祖玲，张青槐，等.壮药龙钻通痹方对类风湿关节炎大鼠模型MMP-13的影响［J］.贵阳中医学院学报，2014，36（1）:36-38.

［8］谭安蔷，庞宇舟，蒋林，等.星点设计-效应面法优选壮药龙钻通痹颗粒的提取工艺［J］.广西中医药，2014，37（1）: 74-76.

［9］陈奇.中药药理研究方法学［M］.2版.北京：人民卫生出版社，2006：244.

［10］农毅清，蒋林，吴玉强，等.常春卫矛与爬行卫矛的镇痛抗炎作用及急性毒性研究［J］.时珍国医国药，2012，23（6）:1384-1385.

［11］周智，韦奇志，吴植强，等.扶芳藤一般药理及急性毒性研究［J］.中国药师，2011，14（8）:1115-1117.

（编辑陈明伟）

Experimental Study of Longzuantongbi Granule on Analgesic Effect,Anti-inflammation and Acute Toxicity

PANG Yu-zhou1,JIANG Lin1,LUO Yu-dong2,MI A-na1
（1.Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,Guangxi,530001；2.Pharmaceutical factory of Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning,Guangxi,530001）

［Objective］To study the analgesic effect,anti-inflammation and acute toxicity of Longzuantongbi granule.［Methods］①The analgesic experimental methods of body twist method and hot plate test was applied.In each experiment,60 rats were randomly divided into saline group,aspirin group（50mg/ml）,Longzuantongbi group（30g/kg）,20 rats for each group.Each group was administered by intragastric gavage following the dose of 10ml/kg,once a day,for 3 days.Then effects of the drug on chemical and electrode-heatplate stimulated-pain response were observed at different time after pretreatment.②The method of Xylene-induced ear edema in mice was applied on the anti-inflammatory experiment.40 rats were randomly divided into 4groups.Saline group were given an equal volume of distilled water.High and low dose groups of Longzuantongbi were given Longzuantongbi granule solution following the dose of 21.4g/ kg and 10.7g/kg.Aspirin group were given aspirin solution following the dose of 0.2g/kg.They were administered by intragastric gavage for 7 days,once a day.One hour after the last administration,20μl xylene was scribbled in the right ear of the mice to cause inflammation.The rats were sacrificed one hour later with both ears cut.Both ears were cut with 6mm hole puncher to be weighed.The weight of the left ear was subtracted to the right ear so as to observe the swelling condition.③Rats intragastric gavage was applied onacute toxicity experiment to determine the maximum dose of Longzuantongbi granule.［Results］①In body twist experiment,compared with saline group,Longzuantongbi group and aspirin group could inhibit writhing times（P<0.01）,and extend writhing incubation period of the mice（P<0.01）.The analgestic function of Longzuantongbi group was similar to that of aspirin group.It was indicated that Longzuantongbi granule had significant analgestic action on the pain caused by acetic acid.②In the hot plate test,aspirin group could significantly prolong the pain threshold in mice 30 minutes after administration（P<0.01）；Compared with saline group,Longzuantongbi group and aspirin group could significantly prolong the pain threshold in mice 30 minutes after administration（P＜0.05或P＜0.01）; Longzuantongbi group could significantly prolong the pain threshold in mice 60 or 90 minutes after administration.Compared with saline group,Longzuantongbi group could significantly prolong the pain threshold at the same time.There was significant difference（P＜0.05或P＜0.01）.③Anti-inflammatory experiment showed that high doses of Longzuantongbi group and aspirin group could significantly inhibit mouse ear edema with good anti-inflammatory effect.④In acute toxicity experiment,the measure for maximum tolerated dose of Longzuantongbi granule was 172.8g/kg,which was equivalent to 161 times of the human clinical dose with low toxicity.［Conclusion］Longzuantongbi granule has analgesic effect and anti-inflammation with low acute toxicity.

Longzuantongbi granule;analgesic effect;anti-inflammation;acute toxicity

R285.5

A

2095-4441（2016）01-0005－04

2016-01-18

国家自然基金项目（编号：81460765）；广西卫生厅中医药管理局课题（编号：GZZJ13-09）；南宁市技术创新项目（南工信科技〔2013〕9号）

庞宇舟（1963-），男，教授，研究方向：壮瑶新药的研究与开发

蒋林，教授级高级工程师，从事药品及保健食品的新产品研发