大血藤对慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及子宫病理组织形态学的影响*

刘　清，邓　翀，黄淑凤，孟建国，卫　昊陕西中医药大学，陕西　咸阳712046

大血藤对慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及子宫病理组织形态学的影响*

刘清，邓翀△，黄淑凤，孟建国，卫昊
陕西中医药大学，陕西咸阳712046

目的：探讨大血藤对慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6和TNF-α及子宫病理形态学的影响。方法：采用苯酚胶浆法建立大鼠慢性盆腔炎模型，以血清中IL-6和TNF-α含量、子宫肿胀程度及病理组织形态学评价为考察指标，考察大血藤对盆腔炎大鼠的影响。结果：与模型组比较，大血藤各剂量组大鼠血清中IL-6、TNF-α含量均不同程度降低，子宫内膜病理组织形态学较模型组显著改善，子宫肿胀呈现减轻趋势。结论：大血藤通过抑制炎症相关反应，发挥对盆腔炎的治疗作用。

慢性盆腔炎；IL-6；TNF-α；病理组织形态学；大血藤

大血藤为木通科植物大血藤Sargentodoxa cuneata(Ol iv.)Rehd.et Wi ls.的干燥藤茎。具有清热解毒、活血、祛风之功效。用于肠痈腹痛，经闭痛经，风湿痹痛，跌扑肿痛［1］。近代研究发现［2-4］，大血藤常以复方(如红藤汤、红藤败酱汤等)煎剂内服或灌肠等应用于盆腔炎等的治疗［2-4］。本研究按照中医血瘀证思路建立慢性盆腔炎模型，以大鼠血清中IL-6和TNF-α含量变化及子宫宫腔组织形态学变化等为指标研究大血藤单味药对慢性盆腔炎模型的作用。

1　材料与方法

1.1药物大血藤购于西安市万寿路药材市场，经陕西中医药大学高级实验师王继涛鉴定为木通科植物大血藤的藤茎。称取大血藤药材饮片1 kg，10倍量水提取3次，2 h/次，浓缩干燥，粉碎称重，收膏率为19.325%，临用时用0.5%CMC-Na配制成混悬液。妇科千金片(株洲千金药业股份有限公司，批号：201011046)。

1.2动物雌性SD大鼠7 2只，体质量(2 0 0±2 0)g，由西安交通大学医学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(陕)2007-001。

1.3试剂PGI 2试剂盒(批号LOT：201 11 00 2B)；TXA2试剂盒(批号LOT：20111002B)；IL-6试剂盒(批号LOT：20111002B)；TNF-α(批号LOT：20111002B)，均购于长春江力生物技术有限公司。

1.4仪器BT 2 2 4 S型电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)；ELX808-IU型酶联免疫检测仪(美国Bio Tek仪器公司)。

1.5方法

1.5.1苯酚胶浆的配制量取液化苯酚5 m L，西黄芪胶1 g，甘油4mL，加蒸馏水至20mL，配制成25%的苯酚胶浆。

1.5.2方法［5］取雌性大鼠7 2只，随机抽取1 2只作为假手术组。所有大鼠采用10%乌拉坦(0.01 mL/g)腹腔注射麻醉后固定，下腹部手术部位被毛并常规消毒，沿腹中线于尿道口上方1 cm处向上切口约0.8～1.0 cm，暴露左侧子宫，假手术组不做任何处理，关腹，其余各组于距离卵巢2 cm处用带有倒刺的5号针头以相同力量机械划伤子宫5次后，向卵巢方向缓慢注入苯酚胶浆0.05mL，另一侧子宫不注射作为自身对照。分层缝合关闭腹腔，恢复饮水，正常清洁饲养。造模10天后将模型动物随机分为5组各12只：模型组、大血藤大剂量组(8 g生药/kg)、中剂量组(4 g生药/kg)、小剂量组(2g生药/kg)和妇科千金片组(1.13g/kg)。按10mL/(kg·d)药量灌胃，假手术组和模型组给予等量纯净水，连续灌胃给药21天。于处理前1天将动物禁食不禁水12小时，动物按上述方法麻醉后，负压管(抗凝管与促凝管)腹主动脉各取血3～4mL，3 000转离心10分钟分离血浆、血清后置-80℃冰箱保存待测。摘取双侧子宫，除去脂肪组织后用分析天平称重记录，子宫左右两侧的重量差即为炎症肿胀程度，计算肿胀率和抑制率。子宫放入10%甲醛固定，HE染色显微镜下观察大鼠子宫组织形态学变化。按照试剂盒说明书操作，采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清中TNF-α、IL-6的浓度。

1.6统计学方法数据采用SPSS 2 0.0软件统计分析，计量资料以(±s)表示，采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD-t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

2.1 对模型大鼠子宫肿胀程度的影响与假手术组比较，模型组子宫肿胀度和肿胀率增加，差异有统计学意义(P＜0.01)，说明盆腔炎模型成功。大血藤各剂量组均有减轻子宫肿胀的趋势，其中大血藤高、中、低剂量组子宫肿胀度及肿胀率与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

2.2对模型大鼠血清IL-6和TNF-α的影响模型组与假手术组比较，苯酚胶浆注射子宫31天后大鼠血清中IL-6、TNF-α均上升，其差异有统计学意义(P＜0.01)，表明盆腔炎模型造模成功。治疗21天后与模型组比较，大血藤各剂量组及妇科千金片组大鼠血清中IL-6含量均不同程度降低。大血藤高、中剂量组IL-6含量接近假手术组，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。与模型组比较，妇科千金片组、大血藤各剂量组大鼠血清中TNF-α含量均降低，大血藤高、中剂量组与模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表1　大血藤对苯酚胶浆致慢性盆腔炎模型大鼠子宫肿胀程度的影响?χ±s）

表2　大血藤对苯酚胶浆致慢性盆腔炎模型I L-6和TNF-α的影响?±s）

2.3各组大鼠子宫宫腔组织的病理形态学变化［6-7］肉眼观察模型组，可见子宫组织与腹腔其他组织粘连，部分宫腔变窄、组织积液，毛细血管变粗，充血严重。其他各组粘连较少，子宫形态正常。子宫组织HE染色后，光镜观察，假手术组子宫内膜腔壁结构清晰，无充血水肿与坏死脱落，偶见轻度增生，肌纤维纹理清晰可见。模型组子宫内膜腔壁结构改变，内膜充血水肿，肌层与豁膜肌层结构紊乱；有大量或层状性炎性细胞浸润，纤维组织增生；上皮细胞变性坏死，腺体萎缩变形。提示苯酚胶浆致慢性盆腔炎模型成功。大血藤各剂量组内膜组织结构基本恢复正常排序，上皮轻度增生、增厚，肌层、浆膜完整界清；炎性细胞浸润明显减轻，内膜无明显充血水肿；大部分腺体恢复。表明大血藤能够有效改善慢性盆腔炎大鼠子宫内膜组织形态学的病理状态，见附图1。

3　讨论

苯酚胶浆注入大鼠子宫制造慢性盆腔炎模型，造成大鼠子宫内膜充血、水肿、炎症渗出，粘连。病理检查显示，模型动物的子宫发生了充血、炎症浸润、黏膜层水肿、腺体破坏减少等变化，说明模型成功。

细胞因子IL-6是单核细胞和血管内皮细胞产生的重要炎症介质之一，IL-6主要诱导炎症反应，能促进淋巴细胞分化，催化和放大炎症性反应和毒性作用，造成组织细胞的损害，其虽无疾病的特异性，但能直接反映各种类型损害的严重程度，IL-6的过量产生会导致剧烈的免疫反应，对机体造成损害［8-9］。TNF-α是诱导天然免疫和特异性免疫的重要介质，又是特异性免疫和炎症反应间联系的重要因子，并由激活的巨噬细胞产生［10］。TNF-α过度表达可诱发炎性反应。实验研究发现，与假手术组比较，模型组大鼠血清中IL-6、TNF-α浓度均升高，初步证实大血藤可通过降低血清IL-6、TNF-α水平，抑制炎症介质和炎症因子的表达，调节机体免疫功能，为治疗慢性盆腔炎免疫机制之一，而更多的免疫调控环节有待进一步探究。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：19.

［2］ 江梦华，石秋里，刘海萍.红藤汤灌肠联合盆腔治疗仪治疗慢性盆腔炎临床观察［J］.亚太传统医药，2012，8（12）：60-61.

［3］ 徐文峥，江伟华.红藤汤中药配方颗粒治疗慢性盆腔炎的临床观察［J］.中国中药杂志，2011，36（10）：1386-1387.

［4］ 贾先红.红藤败酱汤治疗慢性盆腔炎52例疗效观察［J］.山西中医，2007，23（3）：19-20.

［5］ 闻莉，张三元，李莉，等.大鼠慢性盆腔炎模型的技术要求及模型特点［J］.浙江中西医结合杂志，2001，11（8）：484-486.

［6］ 卫昊，郭洁，侯建平，等.坤复康胶囊对盆腔炎模型大鼠病理形态学的影响［J］.陕西中医学院学报，2007，30（2）：46-48.

［7］ 卫昊，侯建平，郭惠玲，等.坤复康胶囊对混合菌液致盆腔炎模型大鼠血液流变学和病理形态学的影响［J］.中药药理与临床，2012，28（3）：92-94.

［8］ 李红梅，张三元.慢盆宁对实验性慢性盆腔炎巨噬细胞分泌功能的调节［J］.实用医技杂志，2005，12（11）：3081-3082.

［9］ 李敏，环诚，王平.中药防治盆腔炎药效研究思路与方法［J］.陕西中医学院学报，2004，27（4）：64-65.

［10］程违.免疫生理学［M］.上海：上海科学技术出版社，1993：11.

In fluence of DaXueTeng on PathologicalM orphology，IL-6 and TNF-α of the Ratsw ith Chronic Pelvic In flamm atory D isease

LIU Qing，DENG Chong△，HUANG Shufeng，MENG Jianguo，WEIHao
ShaanxiUniversity of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China

Objective：To discuss the influence of DaXueTeng［Sargentodoxa cuneata（Oliv.）Rehd.etWils.］on uterine pathomorphology，the levels of IL-6 and TNF-αof the rats w ith chronic pelvic inflammatory disease （PID）.Methods：Ratmodel w ith chronic PID was established by adopting phenol method，and the effects of DaXueTeng on the ratsw ith PID were surveyed by observing the indexes of the contents of IL-6 and TNF-α，uterine swelling degrees and pathomorphology.Results：Compared w ith themodel group，the contents of IL-6 and TNF-α decreased in different degrees in the rats of different doses groups of DaXueTeng，pathologicalmorphology of endometria improved compared w ith themodel group，uterine swelling relieved.Conclusion：DaXueTeng could treat PID by inhibiting inflammation-related reactions.

chronic pelvic inflammatory disease；IL-6；TNF-α；pathomorphology；DaXueTeng

附图1　各组盆腔炎模型大鼠HE染色子宫的病理变化（4 0 0×）

R711.33

A

1004-6852（2016）07-0011-04

2015-06-23

陕西省教育厅专项科研计划项目（编号09JK389）。

刘清（1982—），女，硕士学位，实验师。研究方向：中药抗炎与免疫调节研究。

邓翀（1978—），男，博士学位，副教授。研究方向：中药炮制化学及中药炮制原理研究。